Vol. 57,No. 1Jan. ,202 1
第57卷第1期2021年1月
林 业 科 学
SCIENTIA  SILVAE  SINICAE
doi ：10. 11707/j.l001-74熒.20210106
山新杨钾离子通道基因PdbSKOR 的克隆与功能分析
王力敏"陈亚辉・2杨庆山3，曲日涛5姜姜2张金池2
(1.鲁东大学农林工程研究院 烟台264025； 2.南京林业大学林学院 南京210037； 3.山东省林业科学研究院 济南250014； 4.山东省高等学校重点实验室“作物高产抗逆分子模块育种实验室” 烟台264025；
5.烟台市农业技术推广中心 烟台264001 ；
&海南省南繁生物安全与分子育种重点实验室 海口 570100； 7.剑桥大学植物系 英国剑桥CB2 3EA)
摘 要：【目的】植物SKOR 是典型的外向整流型Shaker 类钾离子(K * *)通道蛋白，介导根部K +向地上部的长距 离运输。本研究克隆并鉴定杨树时通道基因PdbSKOR ，在转录水平探讨其组织特异性表达特征及对缺钾、高钾、 干旱和低温胁迫的响应情况，并明确其电生理学功能。【方法】通过同源克隆法，在山新杨中鉴定并克隆1个K +
通道基因PdbSKOR ；运用MEGA  7. 0软件构建山新杨等14种不同科属木本植物SKOR 通道成员的系统进化树；禾IJ
用实时荧光定量PCR 分析PdbSKOR 的组织特异性表达特征及在转录水平根部PdbSKOR 对缺钾、高钾(60 mmol- L -1 KCl)、干旱(15%PEG6000)和低温(4 t)处理的响应情况；借助膜片钳系统研究PdbSKOR 的电生理功能。
【结果】在山新杨中克隆1个K +通道基因PdbSKOR ( GenBank  No. MT335814)，其编码蛋白含有6个离子通道跨膜 域(S1—S6)、环核苷酸结合域、Ankyrin 锚蛋白域和KHA 二聚体功能结构域，属于典型的Shaker 类K +通道；14种 木本植物SKOR 蛋白的氨基酸一致性高达81.09%，S6跨膜区的氨基酸一致性最高(96%)；不同科属植物的SKOR
同源蛋白在遗传进化关系上差异较大，而同一科属植物的遗传距离较近，山新杨PbdSKOR 与同属杨柳科的红皮柳 的同源蛋白SpuSKOR 的遗传距离最近；在PdbSKOR 启动子区域预测到18种顺式作用元件，主要包括发育调控、 激素响应和胁迫响应等相关的调控元件；实时荧光定量PCR 表明PdbSKOR 在3年生山新杨根部的相对表达量最
高，其次是盛开期花和花序，在茎部、叶片和果絮中的表达量相对较低；PdbSKOR 在组培幼苗根部的表达水平也是 最高的，且在转录水平对高钾处理没有响应，但对缺钾、干旱和低温胁迫处理较为敏感，其中,PdbSKOR 在幼苗根部
的表达水平受缺钾或干旱处理的抑制均显著降低，受低温胁迫诱导而显著增强；膜片钳研究表明当细胞膜电位为 +20 mV 时,PdbSKOR 离子通道即被激活，并记录到典型的外向整流电流，并随胞外K +浓度的降低而增大，且正向
电压越大，内向整流的电流越强，表明PdbSKOR 是一个电压依赖的外向整流型K +通道。【结论】从山新杨中克隆 并鉴定了 1个K +通道基因PdbSKOR ；山新杨PdbSKOR 与红皮柳SpuSKOR 在系统进化关系上最近；PdbSKOR 主要 在山新杨根部(成年树和幼苗)表达，幼苗根部PdbSKOR 在转录水平受缺钾、干旱和低温胁迫的调控；PdbSKOR 是 山新杨根部主导K +外排的通道。
收稿日期：2020-02-17；修回日期：2020-04-20。
基金项目：国家重点研究计划子课题(2019YFD1000500)；山东省农业良种工程项目(2019LZGC009)；国家自然科学基金项目
(31901572)；山东省重点研发计划(2018JHZ006)。
*宋志忠为通讯作者。
关键词：山新杨；Shaker 类钾离子通道；SKOR ；基因克隆；基因表达；膜片钳
中图分类号：S718.46 文献标识码：A  文章编号：1001-7488(2021)01-0053-11
Cloning  and  Functional  Analysis  of  Potassium  Channel  Gene  PdbSKOR  in
Populus  davidiana  x  P. bolleana
Wang  Limin 1'6 Chen  Yahui 1'2 Yang  Qingshan 3'4
Qu  Ritao 5 Jiang  Jiang 2
Zhang  Jinchi 2 Zhang  Hongxia 1,4,6 Song  Zhizhong 1,4,6,7
(1. The  Engineering  Research  Institute  of  Agriculture  and  Forestry , Ludong  University  Yantai  264025 ；
2. College  of  Forestry , Nanjing  Forestry  University  Nanjing  210037 ；
3. Shandong  Academy  of  Forestry  Jinan  250014 ；
4. Key  L aboratory  of  Molecular  Module-Based  Breeding  of  High  Yield  and  Abiotic  Resistant  Plants  in  Universities  of  Shandong  Yantai  264025 ；
5. Yantai  Agricultural  Technology  Extension  Center  Yantai  264001 ；
6. Hainan  Key  L aboratory  for  Biosafety  Monitoring  and  Molecular  Breeding  Haikou  570100；
7. Department  of  Plant  Science , University  of  Cambridge  Cambridge  UK  CB2 3EA)
Abstract :cari
【Objective  ] Plant  SKOR( Stelar  K + outward  rectifier) is  a  typical  outwardly  rectifying  Shaker  type  potassium
(K +) channel , mediated  long-distance  K + transport  from  roots  to  shoots. The  objectives  of  this  study  were  to  isolate  a  K +
54林业科学57卷
channel gene PdbSKOR from the hybrid of Populus davidiana X P.bolleana,to characterize the tissue-specific expression patterns of PdbSKOR gene and responses to K+depletion,K+excess,drought and low temperature treatments,and to determine electrophysiological function.[Method]By carrying out homology-based cloning,a putative K+channel gene PdbSKOR was characterized and cloned from P.davidiana X P.bolleana.The details of PdbSKOR gene and encoded protein were analyzed.MEGA7.0software was used to construct a phylogenetic tree by multiple alignment of14SKOR proteins from different genera and families,including the hybrid of P.davidiana X P.bolleana.Expression profiles of PdbSKOR and responses to K+depletion,K+excess(60mmol•L1KCl),drought(15%PEG6000)and low temperature (4X)treatments,especially in the roots,were analyzed using quantitative real-time RT-PCR(qRT-PCR).The electrophysiological function of PdbSKOR was preliminarily determined using patch clamping.[Result]The K+channel gene PdbSKOR(GenBank No.MT335814)was cloned from hybrid of P.davidiana X P.bolleana.PdbSKOR possessed the functional domains of6ion trans-membrane doma
ins(S1-S6),cyclic nucleotide binding domain,ankyrin domain and KHA dimerisation domain,which belonging to the classic plant potassium channels.The amino acid sequences of SKOR proteins from14woody plants shared an overall identity of81.09%,and the highest identity(96%)was observed in the S6transmembrane region.The phylogenetic tree showed that SKOR homologs from different families and genera are quite different during evolution,while those from the same Family and Genus are relatively close in genetic distance. Particularly,P.davidiana X P.bolleana and Salix purpurea belong to the same family of Salicaceae,PdbSKOR was closely clustered with SpuSKOR in the phylogenetic tree.Eighteen cis-acting regulatory elements,including development regulation,hormone response and stress response,were observed in the promoter region of PdbSKOR gene.qRT-PCR verification showed that PdbSKOR was dominately expressed in roots of3-year-old hybrid of P.davidiana X P.bolleana, followed by full bloom flower and inflorescence,and weakly expressed in stems,leaves and fruit flocs.Moreover,the relative expression of PdbSKOR was the highest in roots of tissue-culture plantlets,and was more sensitive to K+depletion, drought and low temperature treatments,whose expression was decreased under K+depletion and drought but induced under low temperature treatment.Expression of PdbSKOR had little response to K+excess treatment.Patch clamp analysis demonstrated that the activity of PdbSKOR channel was activated when the cell membrane voltage reached at+20mV,and the channel activity was increased correspondingly with th
e enhancement of positive membrane voltage,typical outward currents were recorded and enhanced alongside with the decrease of external K+concentration.All these findings showed that PdbSKOR was a typical voltage dependent outwardly rectifying K+channel.[Conclusion]PdbSKOR gene was cloned and characterized from hybrid of P.davidiana X P.bolleana.PdbSKOR was closely clustered with homolog of SpuSKOR from S.purpurea in the phylogenetic tree.PdbSKOR was mainly expressed in roots of both mature trees and tissue-culture plantlets,and was prone to be regulated by K+depletion,drought,and low temperature treatment.PdbSKOR is a voltage dependent outwardly rectifying K+channel that dominates the K+release in roots of P.davidiana X P.bolleana.
Key words:Populus davidiana X P.bolleana；Shaker type potassium channel；SKOR;gene cloning；gene expression；patch clamping
钾离子(K+)是植物细胞中含量最为丰富的阳离子之一，参与光合作用、气孔运动、蒸腾作用、信号传导和植物抗逆等生命活动。缺钾阻碍植物生长和发育，影响产量和品质(宋志忠等，2015；Lebaudy et al,2007；Ward et al,2009;Very et al.,2014；Wang et al.,2017)。
植物通过根部能从土壤中吸收足量的K+，并有效分配到不同组织部位，进而满足正常的生长和发育(Gaymard et al.,1998；Lebaudy et al.,2007；Ward et al.,2009；Very et al.,2014；Demidchik et al., 2
014;Wang et al,2017)。前人通过研究根部K+吸收动力学证实了植物体内存在2种K+吸收机制：机制I，主要在外界K+浓度低于200pmol-L-1时起作用，是一个典型的主动吸钾过程，即高亲和K+吸收系统；机制主要在外界K+浓度高于1mmol-L-1时起作用，是一个典型的被动吸钾过程，即低亲和K*吸收系统(Epstein et al.,1963；Kochian et al., 1982;Very et al,2003)。特别地，定位于细胞质膜的各类K+通道主要介导植物体内K+的长距离运输和分配，根据蛋白结构特征及功能方式的不同，这些K+通道可分为3大类：Shaker家族通道、TPK家族通道和其他钾离子通道(Gaymard et al.，1998；Lebaudy et al.，2007；Very et al.，2014；Wang et al.，2017)o其中，Shaker类K+通道是研究最为透彻的,
第1期王力敏等：山新杨钾离子通道基因PdbSKOR的克隆与功能分析55
其对K+的亲和常数约在几十mmol，属于典型的高通量、低亲和的K+通道，在植物钾素营养高效中起至关重要的作用(Grabov,2007；Lebaudy et al., 2007；Ward et al.,2009；Demidchik et al.,2014；Wang et al.,2017)。
自Anderson等(1992)和Sentenac等(1992)分别在拟南芥(Arabidopsis thaliana)中揭示了植物Shaker类K+通道KAT1和AKT1，此后30年内，陆续从不同植物中报道了40多个Shaker类K+通道(Lebaudy et al.,2007；Ward et al.,2009；Hedrich, 2012；Lim et al,2019)，包括拟南芥中9个(Hedrich,2012；Lim et al.,2019)，马铃薯(Solanum tuberosum)SKT1(Zimmermann et al.,1998)，番茄(Solanum lycopersic
um)LKT1(Hartje et al.,2000)，胡萝卜(Daucus carota)KDC1(Downey et al.,2000)和DKT1(Formentin et al,2004)，玉米(Zea mays) KZM1、KZM2、ZMK1和ZmK2.1(Bauer et al.,2000；Philippar et al,2003；Su et al.,2005；Buchsenschutz et al,2005)，水稻(Oryza saliva)OsAKT1、OsKAT1 (Otaba et al,2007；Li et al.,2014)和大麦(Hordeum vulgare)HvAKT1、HvAKT2(Boscari et al., 2009)
o根据电压依赖性和K+在跨膜时不同的运动方向，又可将Shaker型K+通道分为3类：内向整流、外向整流和弱向整流(即双向整流)。模式植物拟南芥中，内向整流型的K+通道包括AKT1、SPIK、KAT1和KAT2(Cao et al,1995；Very et al.,1995；Gaymard et al,1996；Pilot et al.,2001；Mouline et al,2002)，外向整流型的K+通道有SKOR和GORK(Gaymard et al,1998；Ache et al.,2000；Hosy et al,2003；Corratge-Faillie et al.,2017；Lim et al,2019)，弱向整流型K+通道有AKT2/3 (Lacombe et al.,2000；Dreyer et al.,2004)。
特别地,SKOR编码一类外向整流型Shaker型K+通道。模式植物拟南芥中，SKOR通道生理功能的分子机制研究较为详尽：AtSKOR定位于拟南芥根的中柱鞘和中柱薄壁细胞，主要负责将韧皮部的K+分泌到木质部，进而经由木质部实现K+的根-茎长距离运输，同时发现缺失该通道功能可导致地上部含钾量降低约50%，在植物生长发育过程中起重要作用(Gaymard et al,1998)。近年来，陆续在小花碱茅(Puccinellia tenuiflora)(段丽婕等，2015)、水稻(Kim et al,2015)、霸王(Zygophyllum xanthoxylum)(Hu et al,2016)、黑果枸杞(Lycium ruthenicum)(刘丽萍等，2018)、甜瓜(Cucumis melo) (Huang et al,201
8)、葡萄(Vitis vinifera)(沈静沅等，2020）等多种植物中报道了SKOR通道基因，且具有相似的蛋白结构特征，有6个跨膜结构域和1个K+通道孔（P-loop），其中最为保守的K+通道标签序列为GYGD（刘丽萍等，2018；Lebaudy et al, 2007；Ward et al,2009；Huang et al,2018）。
虽然植物基因数据库中能搜索到少数木本植物中Shaker类K+通道蛋白序列，但是，木本植物SKOR的功能仍然未知。本研究以山新杨（Populus davidiana X P.bolleana）为材料，克隆PdbSKOR，明确其组织特异表达模式和电生理功能，为研究林木钾素营养高效的分子机制奠定理论基础，并提供基因资源和技术支撑。
1材料与方法
试验于2017年1月一2019年10月，分别在南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室、鲁东大学农林作物遗传改良中心和剑桥大学植物系离子运输研究室完成。
1.1试验材料与胁迫处理
供试材料为南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室培育的3年生山新杨（雄性株），露地生长，常规田间管理。分别于2019年不同日期采集山新杨盛开期的花（4月25日）、新生展叶（5月9日）、成熟叶片（6月20日）、1年生韧皮部（5月9日）、根（5月9号）、果絮（5月9号）
组织材料，在液氮中冷冻后保存于-80冰箱。非生物胁迫处理所用材料为鲁东大学农林作物遗传改良中心培育的山新杨组培幼苗。根据王壮伟等（2018）的描述进行胁迫处理：在人工气候箱中，将幼苗在1/2MS营养液（Murashige et al,1962）预培养3天，然后分别进行缺钾（MS营养基配方中的KH2PO4和KNO3分另」用NaH2PO3和NaNO3代替）、高钾（60mmol-L-1KCl）、干旱（15g-L-1 PEG6000）、低温（4°C）处理，每个处理9株幼苗，分别在处理4、24、48、72h，采集幼苗根部材料，液氮冷冻后保存于-80C冰箱。
1.2杨树PdbSKOR检索与克隆
以拟南芥AtSKOR（Gene ID：AT3G02850）编码蛋白的序列为参考，在Phyt o zome毛果杨（Populus trichocarpa）基因组（http:〃www. phytozome）中检索获得1个SKOR同源蛋白，下载毛果杨SKOR CDS 序列后，设计上下游引物（表1），提取山新杨组培幼苗整株总RNA，反转录获得第1链cDNA模板，利用Prime STAR tm HS DNA聚合酶（TaKaRa，大连）对山新杨PdbSKOR的CDS进行PCR扩增，下载毛果杨
56林业科学57卷
SKOR起始密码子ATG上游2.0kb的启动子区域的序列，设计上下游引物,PCR扩增山新杨PdbSKOR的启动子区域；扩增产物送生工生物工程(上海)股份有限公司测序验证。利用在线服务器Pfam(http:〃pfa
/search)分析PdbSKOR蛋白的功能结构域，利用在线服务器Phyre2(http:〃www.sbg.bio. ic.ac.uk/phyre2/i?id二index)预测PdbSKOR蛋白的三级结构。
1・314种木本植物SKOR系统发育树
在Phytozome基因组数据库中下载红皮柳(Salix purpurea)、巨桉(Eucalyptus grandis)、无油樟(Amborella trichopoda)、雷家德氏棉(Gossypium raimondii)、木署(Manihot esculenta)、可可(Theobroma cacao)、葡萄、桃(Prunus persica)、白梨(Pyrus bretschneideri)、苹果(Malus domestica)、番木瓜(Carica papaya)、甜橙(Citrus sinensis)和克莱门柚(Citrus clementina)13种不同木本植物SKOR同源蛋白的氨基酸序列，利用ClustalX2.0软件对山新杨和这13种植物同源蛋白SKOR进行氨基酸序列一致性分析，并借助MEGA7.0软件构建SKOR同源蛋白系统发育树。
1.4实时荧光定量PCR分析
通过MiniBEST Plant RNA提取试剂盒(TaKaRa，大连)分别提取山新杨3年生植株和组培幼苗不同组织的总RNA，利用PrimeScriptTM RT reagent Kit(TaKaRa，大连)试剂盒反转录获得第1链cDNA，作为PCR反应的模板。利用NCBI/ Primer-BLAST在线服务器，设计PdbSKOR基因的特异性表达引物(表1)，以山新杨EF1/3(elongation factor gene)(Yang et al,2015)作为内参基因，利用SYBR Green荧光染料(TaKaRa，大连)，借助ABI 7500荧光定量PCR仪(纽约，美国)进行实时荧光定量PCR，所得的C t值
经内参基因EF1B均一化后，利用2沁C*法(Livak et al,2001)计算目的基因的相对表达量。每个样品设置3次生物学重复。1.5pTracer-CMV3-SKOR表达载体构建
分析PdbSKOR的限制性酶切位点，设计特异性扩增引物，构建表达载体pTracer-CMV3-SKOR：上游添加Kpn I(New England Biolabs，美国)酶切位点，下游添加Not I(New England Biolabs，美国)酶切位点(表1，下划线标注)，扩增产物经Kpn I/ Not I双酶切作用后，利用T4DNA连接酶(New England Biolabs，美国)，构建到经由Kpn I/Not I双酶切的pTracer-CMV3的多克隆位点中，即重组表达载体pTracer-CMV3-SKOR。
表1本文所用特异性引物
目的Purpose Tab.1Specific primers used in this study
引物
Primer（5'一3'）
扩增产物大小
Amplicon size/bp
PdbSKOR CDS扩增F Amplification of PdbSKOR CDS R
PdbSKOR启动子区域扩增F Amplification of promoter region of PdbSKOR R PdbSKOR特异性表达引物F Specific expression primers of PdbSKOR R EFIB特异性表达引物F Specific expression primers of EF1/3R
pTracer-CMV3-SKOR质粒构建F Construction of plasmid of pTracer-CMV3-SKOR vector R ATGGATGGTCATGGCAATCACAG TCAAGATAAGTAATGTGTTTGA
TTATTTGTTGACAAAATTAGGG GTTATGAATCACAGCAACCCTT
GGATTCGGACGATGATGGAGA GTCCATGCTCGATACCACCT
GACAAGAAGGCAGCGGAGGAGAG CAATGAGGGAATCCACTGACACAAG
GAGAGGTACCATGGATGGTCATGGCAATCA GAGAGCGGCCGCTCAAGATAAGTAATGTGTTTG
1.6膜片钳电生理研究
利用Su等(2005)报道的方法，利用膜片钳系统研究PdbSKOR的电生理功能：以转染pTracer-CMV3空
载体作为对照，将浓缩纯化的pTracer-CMV3-SKOR质粒转染HEK293-T细胞(ATCC公司，美国)，筛选绿荧光标记成功的细胞，利用pCLAMP10.0设备(Axon，美国)采集并记录通道电流信号，借助pCLAMP10.0软件采集图像和分析数据。每个K+浓度条件下均选择6个细胞作为生物学重复。1.7数据显著性分析
借助SPSS13.0软件(SPSS Chicago，美国)对全文数据进行显著性分析，在对照和胁迫处理条件下2个独立样品间进行t-检验(*：0.01<P<0.05；**：P<0.01)。
2结果与分析
2.1杨树PdbSKOR的克隆
以拟南芥AthSKOR(At3g02850)编码序列作为参考序列，在毛果杨基因组数据库中检索到1个同
第1期王力敏等：山新杨钾离子通道基因PdbSKOR的克隆与功能分析57
源蛋白SKOR（Potri.017G135400），下载山新杨SKOR基因的CDS序列并设计上下游引物，提取山新杨组培幼苗整株总RNA，反转录获得第1链cDNA模板,PCR扩增山新杨PdbSKOR基因的CDS 序列，克隆到pMD19-T载体，转化感受态大肠杆菌（Escherichia coli）DH5a，筛选阳性克隆子，送生工生物工程（上海）股份有限公司测序，获得山新杨PdbSKOR的CDS序列，含有2526bp，编码841个氨基
酸，提交NCBI数据库获得GenBank登录号MT335814（表2）。利用Pfam在线服务器在PdbSKOR蛋白中检测到离子通道跨膜域（S1—S6, PF00520）、环核苷酸结合域（cNBD,PF00027）、KHA 二聚体结构域（PF11834）和ankyrin锚蛋白域（ANKY,PF12796）等功能结构域（图1），并鉴定了极为保守的通道特征标签序列GYGD，暗示PdbSKOR是一个典型的K+外排型通道。此外，三级结构预测表明山新杨PdbSKOR和红皮柳SpuSKOR具有类似的蛋白质高级结构（图2）o
表214种木本植物SKOR蛋白信息
Tab.2Information of SKOR proteins from14woody species
科种蛋白基因ID编码区氨基酸数目Family Species Protein Gene ID CDS/bp Amino acid number
杨柳科Salicaceae
山新杨
Populus davidiana X P.bolleana
PdbSKOR MT3358142526841
杨柳科Salicaceae
红皮柳
Salix purpurea
SpuSKOR SapurV1A.0223s027********
桃金娘科Myrtaceae
巨桉
Eucalyptus grandis
EgrSKOR Eucgr.L019712508835
无油樟科无油樟
AtrSKOR del.AmTr_v1.0_
2292763
Amborellaceae Amborella trichopoda scaffold00138
锦葵科Malvaceae
雷蒙德氏棉
Gossypium raimondii
GraSKOR Gorai.009G1142002493830
大戟科Euphorbiaceae
木薯
Manihot esculenta
MesSKOR Manes.02G0787002505834
梧桐科Sterculiaceae
可可
Theobroma cacao
TcaSKOR Thecc1EG027138t22481826
葡萄科Vitaceae
葡萄
Vitis vinifera
VviSKOR GSVIVT010306670012385794
蔷薇科Rosaceae
桃
Prunus persica
PpeSKOR Prupe.3G1649002493830
蔷薇科Rosaceae
白梨
Pyrus bretschneideri
PbrSKOR Pbr0228272521839
蔷薇科Rosaceae
苹果
Malus domestica
MdoSKOR MDP00002632952523840
蔷薇科Rosaceae
番木瓜
Carica papaya
del.supercontig_116.822376791
芸香科Rutaceae
甜橙
Citrus sinensis
CsiSKOR orange1.1g003425m2466821
芸香科Rutaceae
克莱门柚
Citrus clementina
CclSKOR Ciclev10024904m2466821
2.214种木本植物SKOR同源蛋白系统发育树
在Phytozome基因组数据库分别鉴定山新杨（杨柳科Salicaceae）、红皮柳（杨柳科）、巨桉（桃金娘科Myrtaceae）、无油樟（无油樟科Amborellaceae）、雷蒙德氏棉（锦葵科Malvaceae）、木薯（大戟科Euphorbiaceae）、可可（梧桐科Sterculiaceae）、葡萄（葡萄科Vitaceae）、桃（蔷薇科Rosaceae）、白梨（蔷薇科）、苹果（蔷薇科）、番木瓜（蔷薇科）、甜橙（芸香科Rutaceae）和
克莱门柚（芸香科）14种木本植物的SKOR蛋白，并下载氨基酸序列（表2和图1）。多重氨基酸序列比对结果表明：14种植物SKOR蛋白具有相似的氨基酸序列结构特征，均含有6个保守的跨膜区，即S1—S6，在跨膜区S5和S6之间有1个通道孔P环结构（P-loop），且包含一段极保守的标签序列GYGD（图1）；不同科、属植物SKOR蛋白具有较高的相似性，两两物种之间SKOR蛋白氨基酸序列的一致性均高于85%,14种植物SKOR同源蛋白在氨基酸水平仍然具有81.09%的一致性，特别是S1至S6区间，氨基酸序列一致性极高，其中S6跨膜区的一致性最高，达到96%（图1）o

版权声明：本站内容均来自互联网，仅供演示用，请勿用于商业和其他非法用途。如果侵犯了您的权益请与我们联系QQ:729038198，我们将在24小时内删除。