离心法和虹吸法制备冷沉淀的质量比较
梁泽梅
梁泽梅，，梁进芳
梁进芳，，黄飞
云浮市中心血站，广东云浮527300
摘要目的探讨离心法和虹吸法制备冷沉淀的质量。方法随机选取2020年6月—2021年6月云浮市中心血站制备的合格新鲜冰冻血浆60袋（100mL/袋），抽签法随机分成A、B两组，每组30袋。A组采用离心法制备冷沉淀，B组采用虹吸法制备冷沉淀，对比两组制备冷沉淀的Ⅷ因子含量和纤维蛋白原含量，并统计合格率。结果B组Ⅷ因子含量（79.68±25.28）IU、纤维蛋白原含量（206.47±59.78）mg均高于A组的（65.16±27.18）IU、（168.15±43.83）mg，差异有统计学意义（t=2.143、2.832，P<0.05）；两组制备冷沉淀的Ⅷ因子和纤维蛋白原含量均符合国家标准，合格率均为100%，差异无统计学意义（P>0.05）。结论两种制备冷沉淀的方法均符合国家标准，与离心法相比较，采用虹吸法制备的冷沉淀
Ⅷ因子含量、纤维蛋白原含量更高，制备效率更高效。
关键词离心法；虹吸法；冷沉淀；新鲜冰冻血浆；纤维蛋白原
中图分类号R457文献标志码A doi10.11966/j.issn.2095-994X.2022.08.10.24
Comparison of the Quality of Cold Precipitation Prepared by Centrifugation and Si⁃phoning Method
LIANG Zemei,LIANG Jinfang,HUANG Fei
Yunfu Central Blood Station,Yunfu,Guangdong Province,527300China
Abstract Objective To explore the quality comparison of cold p recipitation prepared by centrifugal method and siphon method.Methods Sixty bags of qualified fresh frozen plasma(100mL/bag)prepared at the Yunfu Central Blood Station from June2020to June2021were randomly selected.Group A used centrifugation to prepare cold precipitation,and group B used siphoning method to prepare cold precipitation.The content of factorⅧand fibrinogen were compared between the two groups,and the passing rate was calculated.Results It showed that the content of factorⅧ(79.68±25.28)IU and fibrinogen(206.47±59.78)mg in group B were higher than those in group A(65.16±27.18)IU and (168.15±43.83)mg,and the difference was statistically significa
nt(t=2.143,2.832,P<0.05).The content of factorⅧand fibrinogen in the two groups of prepared cold precipitates met the national standards,and the pass rate was100%,and the difference was not statistically signifi⁃cant(P>0.05).Conclusion Both methods of cold precipitation preparation conformed to the national standards,and compared with the cen⁃trifugation method,the content of factorⅧand fibrinogen in cold precipitation prepared by siphoning method was higher and the preparation efficiency was more efficient.
Key words Centrifugation;Siphoning;Cold precipitation;Fresh frozen plasma;Fibrinogen
近年来，冷沉淀凝血因子在临床中应用广泛，冷沉淀是由新鲜冰冻血浆制备的血液制品。血浆冷沉淀中的Ⅷ因子及纤维蛋白原，可轻型甲型血友病、纤维蛋白原缺乏症、弥散性血管内凝血、血管性血友病等患者[1-2]。冷沉淀中的凝血因子Ⅷ易受制备时间、温度等多种因素的影响，Ⅷ因子和纤维蛋白原含量与冷沉淀制备过程有密切关系，若选择不合适的制备方法，不能确保冷沉淀的活性，临床效果欠佳[3-4]。只有选择合适的制备方法，才能最大限度开发利用血液资源、确保冷沉淀的活性，减少损耗，提高血液质量，保证临床
*临床研究*
收稿日期：2022-08-01；修回日期：2022-08-22
基金项目：云浮市医药卫生科研立项课题（2020B044）。
作者简介：梁泽梅（1985-），女，本科，主管护师，研究方向为血液成分制备。
通信作者：黄飞（1983-），男，本科，副主任技师，研究方向为血液成分制备，E-mail：*****************。
输血的安全性[5]。目前全国各地血站制备冷沉淀的方法通常有离心法和虹吸法两种，本研究选取2020年6月—2021年6月云浮市中心血站制备的合格新鲜冰冻血浆60袋（100mL/袋），比较离心法和虹吸法制备冷沉淀的质量，现报道如下。
1材料与方法
1.1设备与试剂
冷冻离心机（型号9942）；冰冻血浆解冻箱（KJX-Ⅲ）；血浆速冻机（SDJ-20）；封管热合机（SE250）；电子天平（ES-3101C）；血液分浆夹；微电脑配平仪（WG-PPY-IV）；贮血冰箱[MBR-506D(H)]；-40℃低温冰箱（MDF-U5411）；海尔医用低温冰箱（DW-25W300）；全自动凝血仪（型号ACL7000）；以下试剂盒均购自[沃芬医疗（北京）公司]：纤维蛋白原测定试剂盒，APTT试剂，CaCl2，乏Ⅷ因子血浆。
1.2纳入与排除标准
用200mL四联血袋（抗凝剂为CPDA-1）采集经初筛符合GB18467-2011《献血者健康检查要求》规定的献血者200mL全血，且采集时间≤7min，在采集后8h内完成血浆分离，并置于血浆速冻机内进行速冻，速冻完成后转移至低温冰箱中保存，进行冷沉淀制备前进行检测，排除不合格的样本。
1.3研究对象
随机选取云浮市中心血站制备的合格新鲜冰冻血浆60袋（100mL/袋），抽签法随机分成A、B两组，每组30袋（100mL/袋）。研究经伦理委员会批准（伦理号：2020A041）。A组采用离心法制备冷沉淀，B组采用虹吸法制备冷沉淀。对比两种制备冷沉淀的方法及检测结果，寻求安全、高效的冷沉淀制备方法，确保冷沉淀质量安全。
1.4方法
1.4.1离心法制备冷沉淀A组将30袋合格新鲜冰冻血浆于前一晚取出，放置4±2℃冰箱中过夜融化（约14h）。当血浆基本融化时，取出血浆，在4±2℃的大容量冷冻离心机重离心，按设定好的离心程序（3880r/min、8min、4±2℃）进行离心。离心完成后，轻轻取出血袋，将血袋放于分浆夹上，松开管道夹，将上层血浆利用分浆夹的压力和虹吸原理转移至空袋中，然后将剩余的40~ 50mL血浆与沉淀物进行混合，制备成冷沉淀，宜在制备后1h内完成速冻，速冻后将其快速置于低温冰箱中保存备用。
1.4.2虹吸法制备冷沉淀B组将30袋合格新鲜冰冻血浆取出，放置4±2℃冰冻血浆解冻箱中，取一空袋，悬挂于
解冻箱外，位置要低于血浆袋，松开血袋夹，融化的冰冻血浆通过虹吸原理逐渐流入空袋，当融化至剩余40~ 50mL血浆与沉淀物时，闭合导管，停止虹吸，将剩余血浆与沉淀物进行混合，制备成冷沉淀，宜在制备后1h内完成速冻，速冻后将其快速置于低温冰箱中保存备用。
1.4.3标本检测分别从A、B两组共60袋冷沉淀中留取样本，用全自动凝血仪检测两种方法制备的冷沉淀的Ⅷ因子浓度和纤维蛋白原浓度，电子天平称量血袋重量，计算容量。含量=浓度×容量。
1.4.4质量合格标准参照国家标准GB18469-2012《全血及成分血质量要求》，来源于200mL全血：纤维蛋白原含量≥75mg，Ⅷ因子含量≥40IU。
1.5观察指标
①两种方法制备冷沉淀的Ⅷ因子和纤维蛋白原含量。
②两种方法制备冷沉淀的Ⅷ因子和纤维蛋白原合格率。
1.6统计方法
采用SPSS26.0统计学软件进行数据处理，符合正态分布的计量资料以（xˉ±s）表示，组间差异比较采用t 检验；计数资料以百分比（%）表示，P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1两组制备冷沉淀的Ⅷ因子和纤维蛋白原含量比较B组Ⅷ因子含量、纤维蛋白原含量均高于A组，差异有统计学意义（t=2.143、2.832，P<0.05），见表1。
2.2两组制备冷沉淀的Ⅷ因子和纤维蛋白原合格率比较
两组制备冷沉淀的Ⅷ因子和纤维蛋白原含量均符合国家标准，合格率均为100%，差异无统计学意义（P>0.05）。
3讨论
随着临床输血管理的加强，冷沉淀凝血因子的需求逐渐上升，对冷沉淀的质量、输血的安全性也越来表1两组制备冷沉淀的Ⅷ因子和纤维蛋白原含量比较(xˉ±s) Table1Comparison of factorⅧand fibrinogen content of cold pre⁃
cipitation prepared in two groups(xˉ±s)
组别
A组（n=30）
B组（n=30）
t值
P值
Ⅷ因子含量（IU）
65.16±27.18
79.68±25.28
2.143
0.036
纤维蛋白原含量（mg）
168.15±43.83
206.47±59.78
2.832
0.006
越重视[6]。冷沉淀凝血因子是一种广泛用于止血、凝血功能障碍疾病的重要血液制品，其有效成分包括凝血因子Ⅷ、纤维蛋白原、纤维结合蛋白等，适用于缺乏Ⅷ因子及纤维蛋白原而出血不止、血管性血友病等患者，也可用于恶性肿瘤术后出血、严重创伤、烧伤、弥散性血管内凝血等患者的替代，促进创伤烧伤愈合，防止伤口感染，阻止弥散性血管内凝血扩展[7-9]。冷沉淀中的凝血因子Ⅷ较不稳定、半衰期较短、活性易丧失，在制备过程中对时间、温度等多种因素的要求较高，易发生变性、沉淀，不能确保冷沉淀的活性，临床效果欠佳[10]。目前，制备冷沉淀的方法通常有离心法和虹吸法两种，离心法操作过程中人为影响因素相对多一些，操作过程相对复杂，而虹吸法操作简单，不仅人为影响因素比较少，且所需仪器少，更为经济，因此，采用虹吸法制备冷沉淀更便捷。冷
沉淀的质量影响着效果，血站应选择科学、安全、高效的冷沉淀制备方法，确保血液制品质量安全，对效果有重要临床意义[11]。本研究分别采用离心法和虹吸法制备冷沉淀，采用全自动凝血仪检测两种方法制备的冷沉淀，比较两组的检测结果，从而选择更优的制备方法。
本研究结果显示，B 组制备的冷沉淀中Ⅷ因子含量（79.68±25.28）IU 、纤维蛋白原含量（206.47±59.78）mg 均高于A 组（P <0.05），均符合国家标准；在李庚娣等[12]的研究中，虹吸法制备冷沉淀中的Ⅷ因子含量（80.0±29.3）IU 、纤维蛋白原含量（131.6±34.8）mg 高于离心法（P <0.05），与本研究所得结果基本一致。表明与离心法相比较，采用虹吸法制备的冷沉淀Ⅷ因子、纤维蛋白原含量更高。分析原因在于A 组采用离心法制备冷沉淀，首先将原料血浆提前一晚置于4±2℃冰箱中过夜融化（约14h ），当血浆基本融化时，取出血浆，进行重离心，然后将上层血浆移至另一空袋中，剩余的40～50mL 血浆和沉淀物进行混合，即为冷沉淀[13]。由于冰箱中温度不稳定，且不易控制温度，血浆融化的速度不一致，易引起凝血因子活性降低，且回收率下降。此外，将原料血浆置于冰箱内融化时间过长，易发生纤维蛋白析出，导致冷沉淀量减少，影响Ⅷ因子的活性，且对操作者的
技术要求较高[14]。因此，采用离心法制备的冷沉淀Ⅷ因子与纤维蛋白原含量降低，凝血因子Ⅷ回收率降低，致使冷沉淀合格率降低。虹吸法采用4±2℃冰冻血浆解冻箱融化血浆，血浆融化后通过虹吸作用流入悬挂于解冻箱外的空袋中，剩下40~50mL 血浆与沉淀物进行混合，制备成冷沉淀。采用冰冻血浆解冻箱可准确控制解冻箱温度保持在4±2℃，使原料血浆融化温度和速度保持一致，可以保证
良好的融化环境[15]。有研究指出，冰冻血浆在1h 内融化，制备的冷沉淀质量最为理想，在提取冷沉淀的过程中时间越短越好[16]。因此，与离心法相比较，虹吸法制备的冷沉淀Ⅷ因子含量与纤维蛋白原含量较高，Ⅷ因子和纤维蛋白原的回收率较高，冷沉淀合格率相对较高。在冷沉淀的质量控制上，离心法比虹吸法的人为影响因素多，且操作过程比较复杂，而虹吸法步骤相对简单，受外界因素影响较小，所需仪器少且对操作者的要求较低[17]。
两组制备的Ⅷ因子和纤维蛋白原含量均符合国家标准，合格率均为100%，差异无统计学意义（P >0.05）；表明两种冷沉淀制备方法的合格率均较高。但是B 组制备冷沉淀的融化时间短于A 组的融化时间，凝血因子Ⅷ与纤维蛋白原较不稳定，在冷沉淀制备过程中受融化时间、温度的影响较大，因此在制备冷沉淀时，应选择人为因素影响较小的方法，确保冷沉淀质量，以达到较好的临床效果。A 组采用离心法制备冷沉淀，将原料血浆置于4±2℃冰箱中过夜融化（约14h ），不易控制温度，融化时间较长，易导致纤维蛋白析出，影响Ⅷ因子的活性，凝血因子Ⅷ与纤维蛋白原回收率降低[18]。虹吸法采用冰冻血浆解冻箱融化血浆，可准确控制温度在4±2℃，融化环境较好。本研究的局限性在于采集的样本量较少，后续还会对更多样本进行统计分析，且对冷沉淀制备工艺进行完善和创新，以期获得更为理想的制备工艺。
综上所述，两种制备冷沉淀凝血因子的方法均符合国家标准，但与离心法相比，采用虹吸法制备的冷沉淀Ⅷ因子含量、纤维蛋白原含量更高、更安全高效，对提升临床效果有重要应用价值，建议血
站进一步应用推广。
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