用Image-Pro Plus数细胞，自己总结的。
方法一：手工标点计数。Measure/measurements，点measurements面板features工具第一列第二个create point feature，在图片窗口点选即可。点软件主菜单下快捷工具按纽第二行那个像照相机的按纽（snap picture of image with measurement overlays）可以将标记了的图片以快照方式另存。
方法二：逐一定义AOI（area of interest）法。点快捷工具按纽第一行13个（irregular AOI），弹出Magic ward或Trace，两者可互相切换。Magic ward下，鼠标在图片窗口变成魔术棒，点击可大致沿细胞边缘选中。再点快捷工具按纽第一行14个（Multiple AOI），选Add，再用魔术棒点下一个细胞，再Add，依次重复。Measure/count/size，弹出的count/size面板，菜单栏点edit/convert AOIs to Objects，即在count/size面板上total count显示计数，图片同时显示计数标记。这种方法的好处是选中的细胞可以用来测量，测量结果可以输出到excel作统计。
方法三：定义class，自动计数法。Measure/count/size，弹出count/size面板，Intensity range selection区域内有三个选择：automatic bright objects和automatic dark objects分别定义灰度在128-255和0-128的对象，选中后点count即自动计数。这多用于荧光照片。点delete恢复到计数前。更常用的是第一种选择：Manual，点select colors，弹出segmentation面板，选color
cube based页，用吸管工具选取细胞彩，相近彩的细胞即自动被选中。点close，再点count完成计数。segmentation面板如果选histogram base页，将右边下拉选框中的RGB改为HSI（H为调，就是我们眼睛所看到的红橙黄绿青蓝紫等。S为饱和度，I为强度），点一下H，直方图显示就是图片各象素H值的分布，在直方图的两边各有一根线，这就是选择线，同理S,I，首先保持S、I为最大范围，从H中选择感兴趣的细胞颜，一般免疫组化多为棕黄，微调选择线使选中区域满意。点close，再点count完成计数。这种方法的优点是自动，缺点是可能把一些错误引入。提高正确率首先切片质量要好，照片拍的要好；其次是定义AOI尽可能仔细准确；再次可以通过软件提供的校正方法：1）filter，利用一些参数特点将不合要求的滤除。在count/size面板上将apply filter ranges选项勾上。Measure/select measurements，弹出select measurements面板，左边是可供测量的参数（最常用的是area、density(mean)、IOD），选中即出现在右边，在右边选中后激活下面的范围选择，选择适当范围即可将不在范围内的滤除（如area，image pro plusstart选50，则将所有小于50像素的杂点均去除）。回到count/size面板，再点count，即重新计数，显示filter后的结果。2）split，用于将两个合并在一起的点分开。有时两个细胞距离太近，软件会把他们认成一个。count/size面板，edit/split objects，左键在图片上拖出一条线分割细胞，右键确定，计数结果将自动改变。
3）merge，用于将多个点合并成一点。count/size面板，edit/draw/merge objects，左键框中几个细胞，右键确定，计数结果将自动改变。
所谓class，就是自动计数法中，被共同选中的整体，每一个分隔的部分就是一个object（比如说所有的阳性区域就是一个class，而每一个阳性细胞就是一个object）。一张图片上可以定义几个class，比如说双染的切片，既要计数核又要计数胞浆。在segmentation面板下，按new，新建class2，class1吸取胞核颜，class2吸取胞浆。Count显示两者的和，两者分别的值可以通过range/statistics查看。

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