doi:10.3969/j.issn.1000-484X.2020.23.002
益生菌对EAE小鼠肠道菌及TLR4/NF-KB信号通路的影响①
王志豪龙婷陈秀李作孝（西南医科大学附属医院神经内科，泸州646000）
中图分类号R744.5文献标志码A文章编号1000-484X（2020）23-2822-07
［摘要］目的：观察实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠肠道菌变化，探讨益生菌对EAE小鼠肠道菌及TLR4/NF-KB信号通路的影响。方法：选择30只SPF级雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、EAE模型组和益生菌组，每组10只。正常对照组不做任何处理,EAE模型组、益生菌组采用MOG35-55多肽制备EAE模型，益生菌组从造模次日起以0.4mL/d的益生菌溶液灌胃，正常对照组、EAE模型组每日灌胃等量生理盐水，观察小鼠发病情况。取脑组织行LFB染；取小鼠粪便定量检测肠道菌数量，计算双歧杆菌与肠杆菌细菌数量的比值（B/E值）;ELISA检测脑组织IL-10、IL-6、TNF-a表达；免疫组织化学法检测NF-KBp65核表达；分别采用RT-PCR和Western blot法检测脑组织中TLR4和NF-KBp65mRNA及蛋白表达。结果：正常对照组小鼠均未发病,EAE模型组、益生菌组发病小鼠出现不同程度的尾部下垂、行走不稳、后肢无力等。益生菌组与EAE模型组相比潜伏期、高峰期延迟，神经功能评分降低（P<0.05）o正常对照组脑组织髓鞘结构清晰,EAE模型组髓鞘纤维结构紊乱，有空泡形成，益生菌组较EAE模型组轻。EAE模型组拟杆菌数量低于正常对照组（P<0.05）；益生菌组双歧杆菌、乳杆菌
数量高于EAE模型组（P<0.05），益生菌组B/E值高于EAE模型组（P<0.05）°EAE模型组IL-10、IL鄄6、TNF-琢表达高于正常对照组（P<0.05），益生菌组表达低于EAE模型组（P<0.05）°EAE模型组NF-KBp65核表达高于正常对照组（P<0.05），益生菌组核表达低于EAE模型组（P<0.05）o EAE模型组TLR4和NF-KBp65mRNA及蛋白表达均高于正常对照组（P<0.05），益生菌组表达均低于EAE模型组（P<0.05）o结论:EAE小鼠肠道菌失调，肠道定植抗力减弱。益生菌可以改善EAE小鼠肠道菌失衡，增强肠道定植抗力，并可减轻脑组织脱髓鞘和炎症反应，具有神经保护作用，其机制可能与 抑制TLR4/NF-KB信号通路有关。
［关键词］肠道菌；益生菌；实验性自身免疫性脑脊髓炎;TLR4/NF-KB信号通路
Effects of probiotics on intestinal flora and TLR4/NF-k B signaling pathway in EAE mice
WANG Zhi-Hao,LONG Ting,CHEN Xiu,LI Zuo-Xiao.Department of Neurology,the Affiliated Hospital of Southwest Medical University, Luzhou646000,China
［Abstract］Objective:To observe the changes of intestinal flora in experimental autoimmune encephalomyelitis（EAE）mice and investigate effects of probiotics on intestinal flora and TLR4/NF-K.B signaling pathway in EAE mice.Methods:30SPF grade female C57BL/6mice were randomly divided into normal control group,EAE model group and probiotic group,with10rats in each group.Norm
al control group did not do any treatment,EAE model group and probiotic group used MOG35-55peptide to prepare EAE model.Probiotic group was intragastrically administered with a0.4mUd probiotic solution from the next day of modeling,nor^nal control group and EAE model group were intragastrically administered with the same amount of normal saline daily,symptoms of mice in each group were observed.Brain tissue was taken for LFB staining.Quantitative detection of intestinal flora by mice feces and calculation of the ratio of Bifidobacteria to Enterobacter bacteria（B/E value）.Expression of IL-10、IL-6and TNF-琢were detected by ELISA.Detection of nuclear expression of NF-KBp65was detected by immunohistochemistry.Detection of TLR4and NF-KBp65mRNA and protein expression in brain tissue by RT-PCR and Western blot.Results:Mice in normal control group did not develop disease, mice in EAE model group and probiotic group developed different degrees of tail sag,unstable walking,and hind limb weakness.Compared with EAE model group,probiotic group had delayed latency and peak period,and decreased neurological function score（P<0.05）.Myelin structure of brain tissue in normal control group was clear,myelin fiber structure was disordered in EAE model group,vacuoles were formed,and probiotic group was lighter compared with EAE model group.Number of Bacteroides in EAE model group was lower than that in normal control group（P<0.05）.Numbers of Bifidobacteria and Lactobacillus in probiotic group were higher than that in EAE model group（P<0.05）and the B/E value of probiotic group was higher than that in EAE model group（P<0.05）.Expressions of
①本文受泸州市人民政府-西南医科大学科技战略合作资金项目（2018LZXNYD-ZK17）资助。
作者简介：王志豪，男，在读硕士，医师，主要从事神经免疫方面的研究，E-mail：*****************
通讯作者及指导教师：李作孝，男，硕士，教授，硕士生导师，主要从事神经免疫方面的研究，E-mail：lzx3235@sina^
IL-10,IL-6and TNF-琢in EAE model group were higher than that in normal control group(P<0.05),and expressions in probiotic group were lower than that in EAE model group(P<0.05).Nuclear expression of NF-KBp65in EAE model group was higher than that in normal control group(P<0.05),and nuclear expression in probiotic group was lower than that in EAE model group(P<0.05).Expressions of TLR4and NF-KBp65mRNA and protein in EAE model group were higher than those in normal control group(P<0.05), and expression in probiotics group was lower than that in EAE model group(P<0.05).Conclusion:EAE mice have intestinal flora imbalance,and intestinal colonization resistance is weakened.Probiotics can improve the intestinal flora imbalance in EAE mice,enhance intestinal colonization resistance,reduce brain tissue demyelination and inflammatory response,which has neuroprotective effects.Its mechanism may be related to the inhibition of TLR4/NF-k B signaling pathway.
[Key words]Intestinal flora;Probiotics;Experimental autoimmune encephalomyelitis;TLR4/NF-k B signaling pathway
多发性硬化（multiple sclerosis,MS）是中枢神经系统自身免疫性疾病，其病因和发病机制尚未明确，可能与病毒感染、遗传因素、环境因素、自身免疫因素等有关，而肠道微生态改变可能就是其中一个重要的环境因素。肠道菌作为肠道微生态的核心组成部分，可通过微生物-肠-脑轴调控中枢神经系统的发育与功能，同时在疾病进展中发挥致病和保护作用。肠道菌参与机体多种生理生化过程，如免疫、营养、神经内分泌等。菌的更替、紊乱与肠道慢性炎症性疾病、MS、帕金森病、抑郁症、焦虑症、脑血管疾病的发生发展密切相关［1，2］o Jangi等［3］研究发现MS患者肠道微生物种属组成、菌生物多样性均与健康人存在差异。Cekanaviciute等⑷也发现用MS衍生的粪便定植的无菌小鼠具有更严重的实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）症状。双歧杆菌乳杆菌三联活菌片作为益生菌代表，具有调节肠道菌平衡、维持肠道微生态稳定的作用，能抑制肠道致病菌，改善肠道功能紊乱。研究表明益生菌对帕金森病、阿尔茨海默病、脑血管病等神经系统疾病具有一定作用⑸o EAE模型是目前研究MS最经典的动物模型，因此，本实验旨在研究EAE小鼠肠道菌的变化，通过益生菌干预改变EAE小鼠肠道菌，观察其对EAE小鼠的影响及作用机制。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1实验动物30只SPF级C57BL/6雌性小鼠（6~8周龄,18~22g）购于北京斯贝福生物技术有限公司，许可证号：［SCXK（京）2016-0002］，饲养于西南医科大学忠山校区SPF级动物房内，自由摄入普通饲料及饮用无菌蒸馏水，饲养室温（24±2）益，每12h明暗交替1次，实验过程符合《实验动物饲养和使用条例》。
1.1.2益生菌及主要试剂双歧杆菌乳杆菌三联活菌片（内蒙古双奇药业公司，批号：S1*******）；MOG35-55多肽（上海吉尔生化有限公司）；完全弗氏佐剂、百日咳毒素、ELISA试剂盒（美国Sigma公司）；卡介苗冻干粉（上海瑞楚生物科技有限公司）;luxol fast blue（LFB）染液试剂盒、兔抗TLR4、NF-KBp65抗体、山羊抗兔二抗（Aspen公司）；双歧杆菌培养基、乳杆菌选择培养基、肠球菌培养基（北京陆桥技术有限责任公司）；梭菌培养基、拟杆菌培养基（青岛海博生物技术有限公司）；肠杆菌培养基、消化链球菌培养基（北京奥博星生物技术有限责任公司）；真杆菌培养基（卡迈舒上海生物科技有限公司）；酵母菌培养基（北京北纳创联生物技术研究院）；引物设计合成（武汉金开瑞生物工程有限公司）;RT-PCR试剂盒（ELK Biotechnology公司）o
1.2方法
1.2.1EAE模型制备、分组及益生菌干预方法
将30只小鼠随机分为正常对照组、EAE模型组、益生菌组，造模前各组小鼠均禁食、禁饮24h，将MOG
35-55溶于PBS，稀释至3mg/ml，卡介苗溶于完全弗氏佐剂，浓度为10g/Lo将上述2种液体1:1混匀至乳化剂。用1ml注射器分别在EAE模型组、益生菌组小鼠背部皮下注射诱导乳化剂0.2ml（脊柱两侧任选4点各0.05ml）制作EAE模型，正常对照组注射等量生理盐水。在造模当天及2d后，造模小鼠均腹腔注射0.5ml百日咳菌稀释液，正常对照组注射等量生理盐水。益生菌组从造模次日开始以0.4ml/d的益生菌溶液灌胃，正常对照组、EAE模型组每天灌胃给予等量生理盐水，发病高峰期（神经功能评分连续3d无变化为高峰期）处死EAE模型组、益生菌组小鼠，正常对照组小鼠观察至第28天处死，取粪便、脑组织进行后续实验。
1.2.2小鼠发病情况观察造模当日起每天早8:00观察并记录小鼠体质量变化、毛发光泽情况，并根据Kono5分评分法进行神经功能评分。评分细则如下：0分为不发病;1分为尾巴无力;2分为轻微后肢无力;3分为严重后肢麻痹;4分为四肢麻痹; 5分为濒死或死亡。
1.2.3LFB染取脑组织侧脑室周围组织常规石蜡切片，片厚6滋m，将石蜡切片脱蜡，放入95%乙醇中醇化5min，然后放入LFB染液中60益水浴24h，醇化、分化、镜检、封片。
1.2.4肠道菌检测分别采集3组小鼠发病高峰期的新鲜粪便样本10g，快速置于粪便厌氧装置, -80益冻存。检测时取0.5g粪便标本，用肉汤10倍梯度稀释(1伊10-7~1伊10-2)o取20滋l菌液滴种于肠杆菌、肠球菌、葡萄球菌、酵母菌、拟杆菌、双歧杆菌、消化链球菌、乳酸杆菌、真杆菌及梭菌的选择性培养基。
前4种为需氧菌，置于37益普通培养箱培养48h，其余为厌氧菌，置于厌氧培养箱中培养72ho采用日本光冈肠道菌分析法进行定性定量检测，以API生化鉴定系统的厌氧菌三级鉴定法鉴定菌种，鉴定细菌至属水平，观察结果并计数，以每g湿粪的菌落形成单位(colony forming unit, CFU)的对数值表示。B/E值为双歧杆菌与大肠杆菌数量的比值，用来反映肠道的功能状况。B/E值> 1表示肠道定植抗力正常;B/E值<1表示肠道定植抗力降低，菌结构发生紊乱。
1. 2.5ELISA检测IL-l0、IL-6、TNF-a表达采用ELISA试剂盒检测各指标水平，按说明书进行操作。
1.2.6免疫组织化学法(IHC)检测NF-K Bp65核表达脑组织切片脱蜡至水，置于EDTA缓冲液中微波加热行抗原修复,3%比。2溶液室温孵育10min(以清除内源性过氧化物酶活性),5%BSA封闭20min 后滴加稀释的一抗(1:50)4益过夜，滴加二抗(1: 1000)37益孵育50min,PBS液漂洗,DAB显，脱水透明封片。在光镜下放大100倍摄取图像，输入图像分析系Image Pro Plus6.0内对图像进行灰度变换，使染阳性区域与背景明显分开，自动测量阳性面积、积分光密度，并计算平均光密度值，进行半定量分析处理，取其均值为光密度值，表示NF-KBp65的相对表达量。
1. 2.7RT-PCR检测TLR4和NF-K Bp65mRNA表达采用TRIpure法提取各组小鼠脑组织RNA并行反转录，根据M-MLVReverse Transcriptas试剂盒说明书操作得到cDNA模板，利用QuFast SYBR Green PCR Master Mix荧光染料PCR扩增R-MBP 的基因片段。PCR扩增引物序列，TLR4F：5'-ACACTTTAT
TCAGAGCCGTTGGT-3',R：5'-CAGGTC-CAAGTTGCCGTTTC-3',NF-K Bp65F：5'-ACTATGAG-GCTGACCTCTGCC-3',R：5'-TCTGGATTCGCTGGCTA-ATG-3'，内参M-GAPDH F:5'-TGAAGGGTGGAGC-CAAAAG-3',R：5'-AGTCTTCTGGGTGGCAGTGAT-3'°反应程序为：95益30s,95益5s,58益30s,72益30s,40个循环。反应液为:2xMaster Mix5.0滋l，引物工作液(2.5滋mol/L) 1.0滋l，上、下游引物各1.0滋l,ddH2O2.0滋l,Rox1.0滋lo采用2-驻驻Ct法计算目的基因相对表达量，ACt=Ct目的基因-Ct内参基因,△驻Ct=驻Ct实验组-驻Ct对照组o
1.2.8Western blot检测TLR4和NF-K Bp65蛋白表达向各组小鼠脑组织加入裂解液提取总蛋白, BCA法测定蛋白浓度，经SDS-PAGE电泳、转膜、封闭后，除去封闭液，加入用稀释液稀释好的一抗4益孵育过夜。回收已稀释的一抗,TBST清洗3次，每次5min，加入二抗稀释液，室温孵育30min,TBST 在室温下摇床上清洗4次，每次5min，滴加新鲜配制的ECL混合溶液到膜的蛋白面，暗室中曝光，根据不同的光强度调整曝光条件，显影、定影，采用Al-phaEaseFC软件处理系统分析目标条带的光密度值。
1.3统计学分析采用SPSS25.0统计软件进行统计学分析，实验数据用x±s表示，组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)，两两比较采用t检验，发病率比较采用卡方检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。
2结果
2.1各组小鼠一般情况及神经功能缺损评价正常对照组小鼠均未发病。EAE模型组小鼠造模成功后精神萎
靡、毛发光泽度降低、脱毛、食欲下降、体质量减轻，症状逐渐加重，出现尾部下垂、步态不稳、后肢行走无力甚至瘫痪。益生菌组小鼠也表现出与EAE模型组小鼠同样的症状，但较EAE模型组症状轻。益生菌组小鼠发病潜伏期、高峰期较EAE模型组均有延长，神经功能评分较EAE模型组降低(P< 0.05)o各组小鼠发病潜伏期、高峰期及高峰期神经功能障碍评分结果，见表1、图1o
2.2各组小鼠脑组织病理变化正常对照组小鼠脑组织LFB染髓鞘结构清晰。EAE模型组、益生菌组小鼠均出现不同程度的脱髓鞘，髓鞘结构排列稀疏、紊乱，可见不同程度的低染区域及空泡状结构，益生菌组上述变化较EAE模型组轻。见图2o
2.3各组小鼠肠道菌变化在培养的10种肠道主要细菌中,EAE模型组与正常对照组相比，拟杆菌数量减少(P<0.05)o益生菌组与EAE模型组相比，双歧杆菌、乳杆菌数量增加(P<0.05)o益生菌组与EAE模型组相比,B/E值上升(P<0.05)o见表2°
2・4 各组小鼠IL-1茁、IL-6、TNF-琢表达情况 EAE 模型组与正常对照组相比,IL-1茁、IL-6、TNF-琢表达 上升(P <0. 05)，益生菌组和EAE 模型组相比，IL- 1茁、IL-6、TNF-琢表达降低(P <0. 05) °见表3 °
2. 5各组小鼠NF-KBp65核表达情况 EAE 模型 组(69. 09±
3. 23)和正常对照组(20. 41±1.47)相比，
NF-KBp65核表达上升(P <0. 05)；益生菌组(52. 69土 1.96)与EAE 模型组相比,NF-KBp65核表达降低
(P <0.01)o 见图 3o 2.6
各组小鼠TLR4,NF-KBp65 mRNA 表达情况 EAE
模型组与正常对照组相比，TLR4和NF-KBp65 mRNA 表达上升(P <0. 05)；益生菌组与EAE 模型
组相比，TLR4和NF-KBp65 mRNA 表达降低(P <
0. 05)o 见表4o
表1两组发病潜伏期、高峰期、高峰期神经功能障碍评分
比较(x ±s ,n = 10)
Tab ・ 1 Comparison of latent period , peak period and
neuro-functional deficiency scores in two groups (x ±s ,n = 10)
Note : Compared with EAE model group , 1 ) P <0. 05.
Groups
Latent period
(d)Peak period
(d)Neuro-dysfunction scores EAE model 9. 12±1. 1214. 25±1. 16
3. 50±0. 92
Probiotic
14. 17±0. 951)
18. 14±1.061)2. 14±0. 891)
图1神经功能缺损评分变化示意图
Fig ・ 1 Schematic diagram of changes in neurological defi image pro plus
cit scores
图2 各组小鼠脑组织LFB 染情况(伊200)
Fig ・2 Demyelization in brain tissues of mice in different
groups by LFB staining ( x200)
Note : A. Normal control group ； B. EAE model group ； C. Probiotic group.
2.7 各组小鼠TLR4、NF-KBp65蛋白表达情况 EAE
模型组与正常对照组相比,TLR4和NF-KBp65蛋白
表达上升(P <0. 05)；益生菌组与EAE 模型组相比,
TLR4和NF-KBp65蛋白表达降低(P<0.05)°见
表5、图4o
表2各组小鼠肠道菌值和B/E 值比较(x ±s ,n = 10, lg
CFU/g 湿粪)
Tab ・ 2 Comparison of intestinal flora value and B/E value
of mice in each group (x±s , n = 10, lg CFU/g wet feces )
Index Normal control EAE model Probiotic
Enterobacter
6. 564±0. 174 6. 594±0. 099 6. 496±0. 086Enterococcus 5. 311±0. 072 5. 353 ±0. 081
5. 303 ±0. 065
Staphylococcus
1.601±0. 077
1.659±0. 084 1.596±0. 066Yeast 1. 474±0. 077 1.526±0. 090
1.462±0. 056
Bacteroides
5. 147±0. 060 4. 134±0. 1391) 4. 239±0. 145Bifidobacteria 5. 328±0. 115
5. 212±0. 185
6.533±0. 0932)
Peptostreptococcus
3.606±0. 068 3. 553 ±0. 091
3. 620±0. 063
Lactobacillus 2. 511±0. 133 2. 413 ±0. 100 3.078±0. 0912)
Eubacterium
2. 662±0. 056
2. 698 ±0. 077
2. 651 ±0. 064
Clostridium 1. 817±0. 068 1.778±0. 099 1. 850±0. 092B/E value
0. 812±0. 041
0. 790±0. 095
1.006±0. 0732)
Note : Compared with Normal control group , 1 ) P < 0. 05； compared with
EAE model group,2) P <0. 05.
表3 各组小鼠脑组织IL-1p x IL-6、TNF -琢含量比较(x ±s ,
n = 10, ng/L )Tab ・ 3
Comparison of IL-1p , IL-6, TNF -琢 contents in
brain tissue of each group of mice (x±s , n = 10, ng/L )
Groups
IL-10IL-6TNF -琢
Normal control 8. 29±0. 9455. 88±4. 55 3. 31±1. 89EAE model
18. 78±2. 521)90. 26±3.461)
7. 37 ±2. 351)Probiotic 14. 44±2. 702)
72. 04±2. 662)
4. 54±1. 862)
Note : Compared with Normal control group , 1 ) P < 0. 05； compared with
EAE model group,2) P <0. 05.
图3 各组小鼠脑组织NF-KBp65细胞核表达的IHC 检测
结果(伊200)
Fig. 3 IHC results of nuclear expression of NF-KBp65
cells in brain tissue of mice in each group ( x200)
Note ：A. Normal control group ； B. EAE model group ； C. Probiotic
group.
groups of mice (x ±s ,n = 10)
表4 各组小鼠TLR4和NF-KBp65 mRNA 表达(x 土s ,n =10)
Tab. 4 Expressions of TLR4 and NF-KBp65 mRNA in each
Groups
TLR4
NF-KBp65
Normal control 1.03±0. 186 1.05±0. 202EAE model 2. 09±0. 1821) 2. 26±0. 1451)
Probiotic 1.43±0. 1822)
1. 69±0. 1752)
Note : Compared with Normal control group , 1 ) P < 0. 05； compared with
EAE model group , 2 ) P <0. 05.
each group of mice (x ±s ,n = 10)
表5 各组小鼠TLR4和NF-KBp65蛋白表达(x±s ,n = 10) Tab. 5 Expressions of TLR4 and NF-KBp65 proteins in
Groups
TLR4NF-KBp65Normal control 0. 06±0. 0120. 04±0. 006EAE model
0. 62±0. 0711)0. 47±0. 0471)Probiotic
0. 31±0. 0482)
0. 17±0.0182)
Note : Compared with Normal control group , 1 ) P < 0. 05； compared with
EAE model group , 2 ) P <0. 05.
图4 Western blot 检测各组小鼠脑组织蛋白表达Fig ・ 4 Western blot analysis of brain tissue protein expre
ssions in each group of mice
Note ：1. Normal control group ；2. EAE model group ；3. Probiotic group.
3讨论
肠道微生态是人体最大且最复杂的微生态系
统，其核心部分是肠道菌，在漫长的协同进化过程
中，肠道菌与宿主形成了紧密的共生关系。肠道 菌与中枢神经系统密切相关，并对肠道的功能调 节和稳态维持起重要作用。鉴于肠道微生物和宿
主的复杂关系，近年来提出了一种新的理念，即微生 物-脑-肠轴，由中枢神经系统、自主神经和肠神经系
统共同形成神经-内分泌网络，可局部调控、整合和
处理信息［6］o 越来越多的研究证明肠道微生物
和宿主的共生相互作用能诱导自身免疫性疾病的发 生发展，如MS 和EAE ⑺。MS 是一种自身免疫性疾
病，其自身免疫起源尚不清楚，诱发炎症因素在中枢 神经系统或外周亦不明确，Oksenberg 等⑻研究表 明，在单卵双胞胎中，MS 占25%，遗传和环境因素
都可能导致该病发生，而肠道菌就是其中1个不
可忽略的环境因素。
本研究表明，EAE 模型组的拟杆菌含量明显低
于正常对照组，这与Jangi 等［3］采用16S 基因测序法
研究MS 患者肠道菌变化结果基本一致。拟杆菌
正常寄居于人和动物的肠道、上呼吸道和生殖道，长
期应用广谱抗生素、激素、免疫抑制剂等均可导致肠
道菌失调或免疫功能紊乱，从而引发内源性感 染［9］ o EAE 模型组B/E<1表明EAE 小鼠肠道菌
平衡失调，肠道定植能力下降。肠道菌紊乱可破 坏肠道屏障，增加其通透性，使各种细菌及其代谢产 物易于透过肠道屏障作用于全身，参与多种疾病的
发病及病理生理过程；而肠道定植能力是机体免疫
的重要组成部分，其水平下降可增加肠道感染风险。 Riccio 等［10］研究表明，饮食可以影响复发-缓解型和
原发性MS 的严重程度，高盐、动物脂肪、红肉、碳水
化合物可能会加重症状，蔬菜、水果、益生元和益生
菌可通过保持健康的肠道菌以减轻症状。由此说
明通过改变共生肠道菌的组成、数量、结构可能影 响MS 的病程［11］o 双歧杆菌、乳杆菌是肠道微生物
中最重要的益生菌，对维持肠道菌平衡发挥重要 作用，双歧杆菌是一种生理性有益菌，具有抗肿瘤、
增强免疫、改善胃肠道功能等多种重要的生理功
能［12］o 其可在肠黏膜表面形成生物学屏障、机械屏
障，可降低肠道pH 值，此外还可减少肠道内有害物
质如过氧化氢、羟基苯等的产生［13，14］o 乳杆菌可降
低肠道pH 值，为有益菌提供适宜的生存环境，并
能抑制潜在致病菌的生长，有助于维持肠道内环境 稳定；同时能恢复细胞因子，维持细胞因子平衡［⑸；
此外，乳杆菌还可减少肠道中炎症介质的释放，调节 肠道免疫功能，进而减轻肠道炎症反应［16］o 提示益
生菌可抑制肠道内源性及外源性潜在致病菌对肠上 皮细胞的黏附和定植；同时，益生菌还能通过争夺营
养、调节肠道pH 值、产生具有广谱抗菌作用的物质
等多种生物拮抗功能，对肠道内致病菌起抑菌或杀
菌作用，对维持肠道菌的稳态、调节肠道功能至关
重要［17］o 本研究结果显示，益生菌组小鼠肠道中双 歧杆菌、乳杆菌、B/E 值明显高于EAE 模型组，表明 益生菌能有效改善EAE 小鼠肠道微生态环境，提高
肠道定植抗力
°
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