TranSWen实验具体步骤及方法
1.取对数生长期的细胞，常规消化（可以无血清饥饿12~24h ,去除血清对Cell 侵袭能力的影响）
2.用含1%FBS的培养基重悬细胞，调整细胞密度为（2~5 ） *10 5∕ml ,细胞要 多一点
3.取IOOUl细胞悬液接种于transwell小室的上室,下室加入600Ul含10%FBS image pro plus的培养基（避免小室下面产生气泡）
4.培养细胞24h∕48h后取出小室置烧杯内涮洗24孑中加入800Ul甲醇/孔。
5.吸干上室液体,4%多聚甲醛室温固定10~30min ,
另一 24孔板中加入800ul染液/孔
涮洗后，吸干上室固定液，移入0.1 %结晶紫染液,室温染20min （结 晶紫：常规工作液浓度0.1%）
6.小室用流动水轻轻冲洗浸泡3次进行脱染
7.吸干上室液体,用棉签（棉花扯松一点再擦）轻轻擦掉上室底部膜表面未迁 移细胞
8.显微镜下随机观察5个视野细胞,并进行照相
9.数据处理
撤血清：换无血清培养基培养细胞，清除血清的影响
铺基质胶：将基质胶适当稀释，铺在上层小室中，胃细胞培养箱中聚合过夜 J    加入上室后■等待30min
铺下室培养基：含20% FBS的培养基，
I
制备细胞悬液：胰酶消化细胞,制备细胞悬液
I
铺细胞：将上层小室放入下层小室，细胞计数后将细胞铺在上层小室中，
I
继续培养：细胞培养箱中培养，具体时间视不同细胞而定
I
擦去上层细胞：用棉签擦去上层小室里的细胞和基质胶
I
固定细胞：甲醇固定细胞5nnirτ
I
染与拍照：吉姆萨染液染细胞后拍照’
使用软件分析迁移的细胞数（可以使用image PrO PlUS或mage j几 将?次独立重复的数据都分析完后逬行统计分析并绘制柱状图

NegCtrt    TAp63
TAp63 inhibits CeIl migratiOrT
al. Br.J.Cancer.2014.
APiCal Chamber
BaSOlateral
Chamber

使用软件分析侵袭卿胞数（可以使用Inldge PrO PlUS^Image j） 将3次独立重复的数据都分析詰进微时析并鞠默图
AES influences CanCer CeIl invasion. The invasive ability Of(A) MDA-MB- 231 and (B) He
pG2 CelIS 48 h after IranSfeCted With SiCOntrOlI SiAES Or SiRND3, WaS assayed USing a MatrigeI-COated TranSWelL The CeIIS that SUCCeSSfUIIy invaded into the Matngel Were quantified 48 h after plating. Data are represented as the means ± SD for three independent experiments, tp<0.05, a Signifieant difference from the COntrOl oligotransfected cells.

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