２０１９新型冠状病毒特异性I g M /I g
G 抗体检测假阳性回顾性分析１例
贺㊀岩，张迎久，秦晓燕，孙艳艳
(首都医科大学石景山教学医院，北京市石景山医院检验科，北京１０００４３
)D O I :１０．１１７４８/b j m y
．i s s n ．１００６－１７０３．２０２１．０５．０１５收稿日期:２０２１Ｇ０３Ｇ２８；修回日期:２０２１Ｇ０４Ｇ２２通讯作者：孙艳艳.
摘要：目的㊀回顾性分析新型冠状病毒特异性抗体I g M 假阳性一例的影响因素.方法㊀通过采集患者血清进行类风湿因子(r h e u m a t o i d f a c t o rR F ＧI g M ,R F ＧI g A ,R F ＧI g G )㊁补体(c o m p l e m e n tC ３,C ４)㊁抗核抗体(a n t i n u c l e a r a n t i b o d y ,A N A )及抗核抗体谱(a n t i n u c l e a r a n t i b o d y s p e c t r u m ,E N A )㊁核周因子(p e r i n u c l e a r f a c t o r ,A F P )㊁抗环瓜氨酸肽(a n t i Ｇc y
c l i c c i t r u l l i n a t e p e p t i
d
e ,C C P )的测定以探讨造成新型冠状病毒特异性抗体I g
M 假阳性的因素.结果㊀除了酶联免疫吸附法检测该患者R F ＧI g M 弱反应外其余均为阴性，再用散射比浊法测定同一份标本R F ＧI g M 结果低于检测线.由于实验室条件限制没能将所有可能造成假阳性的外源性因素都探查一遍，所以最终没能查出真正的影响因素.结论㊀建议核酸测定最好联合胶体金法和化学发光法两种抗体检测方法.核酸检测与抗体检测的联合可提高诊断效率，当检测结果出现不一致情况时,
一定要综合分析判断再进行结果解读，避免误诊.
关键词：新型冠状病毒肺炎;㊀２０１９新型冠状病毒;㊀I g M 抗体;㊀I g G 抗体;㊀假阳性中图分类号:R ３７３．９㊀㊀文献标识码:A
O n eR e t r o s p e c t i v eC a s e S t u d y o f F a l s eP o s i t i v e f o rN o v e l C o r o n a v i r u s ２０１９Ｇn C o VI g Ma n d I g
GT e s t s H E Y a n ,Z H A N G Y i n g j i u ,Q I N X i a o y a n ,S U N Y a n y
a n (S h i j i n g s h a nT e a c h i n g H o s p i t a l o fC a p i t a lM e d i c a lU n i v e r s i t y ,B e i j i n g S h i j i n g s h a nH o s p i t a l ,B e i j i n g １
０００４３,C h i n a )A b s t r a c t :O b j e c t i v e T o r e t r o s p e c t i v e l y a n a l y z et h ei n f l u e n c i n g f
a c t o r so faf a l s e p o s i t i v ec a s eo f N o v e l C o r o n a v i r u s s p e c i f i c I g Ma n t i
b o d y ．M e t h o d s R h e u m a t o i d f a
c t o r (R F ＧI g M ,R F ＧI g A ,R F ＧI g G ),c o m p l e m e n t (C ３,C ４),a n t i Ｇn u c l e a ra n t i b o
d y (A N A ),a n t i Ｇn u c l
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e c t r u m (E N A ),p e r i n u c l e a r
f a c t o r (A F P ),a n da n t i Ｇc y c l i cc i t r u l l i n a t e p e p t i d e (C C P )w e r ed e t e c t e db y s
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g f a l s e p o s i t i v e I g Ms p e c i f i c f o rN o v e l C o r o n a v i r u s ．R e s u l t s T
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u r b i d i m e t r i c m e t h o d w e r e l o w e r t h a nt h ed e t e c t i o nl i n e ．D u et ot h e l i m i t a t i o no fl a b o r a t o r y c o n d i t i o n s ,a l le x o g e n o u sf a c t o r st h a t m a y c
a u s ef a l s e p o s i t i v e sc o u l d n o t
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．T h ec o m b i n a t i o no f n u c l e i ca c i dt e s ta n d a n t i b o d y t e s tc a ni m p r o v et h e d i a g n o s t i c e f f i c i e n c y ．W h e nt h et e s tr e s u l t sa r e i n c o n s i s t e n t ,i t i s n e c e s s a r y t om a k e c o m p r e h e n s i v e a n a l y s i s a n d j u d g m e n t b e f o r e i n t e r p r e t i n g t h e r e s u l t s t o a v o i d p o t e n t i a lm i s d i a g n o s i s ．K e y w o r d s :C O V I D Ｇ１９;㊀２０１９Ｇn C o V ;㊀I g Ma n t i b o d y ;㊀I g Ga n t i b o d y
;㊀Af a l s e p o s i t i v e ㊀㊀随着新型冠状病毒筛查检测的全面展开,
尽早筛查出无症状感染者是目前C O V I D Ｇ１９防控的关
键.当然C O V I D Ｇ１９确诊的金标准还是核酸检测，但受样本采集部位㊁时机㊁方法以及样品保存㊁运输㊁核酸提取㊁检测试剂检出能力等多因素影响，不少病
例多次核酸阴性而延误诊断[１]
.«新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)»[２]
血清学检测中指出，新
核酸检测结果阳性参考值阴性型冠状病毒特异性I g
M 抗体多在发病３~５d 后开始出现阳性,I g G 抗体滴度恢复期较急性期有４倍及以上增高.但即使检测出S A R S ＧC o V Ｇ２特异性
I g M㊁I g G抗体阳性仍需结合临床及核酸检测等综合诊断.２０１９n C o V I g M和I g G抗体检测对核酸检测容易漏检的问题是很好的互补，将在C O V I D１９的诊断㊁监测和病程转归等方面提供更多的临床数据[３].因此I g M/I g G抗体检测作为新型冠状病毒的辅助检测方法在各个医院全面展开.
㊀㊀«新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第八版)»[４]诊断标准指出，在疑似病例中同时具备新型冠状病毒特异性抗体I g M/I g G抗体阳性或新型冠状病毒特异性抗体I g G由阴性转为阳性或恢复期抗体滴度较急性期有４倍及以上增高可作为确证病例的诊断指标之一.但是不同方法之间检测结果存在较大差异，而且发现抗体的检测结果易受多种因素影响.本研究报道１例不同部位采集的标本在相隔５d进行了２次核酸检测均阴性，同时２种不同方法相隔５d采血检测抗体，其中发光法I g M两次阳性，确证实验也两次为阳性，详细结果及判定标准见表１.«新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第八版)»[４]诊断标准指出，无明确流行病学史，符合临床表现中任意２条，同时新型冠状病毒特异性I g M抗体阳性，或符合临床表现中的３条才可确诊.此病例只符合I g M抗体阳性，临床表现均不符合，最终确诊为假阳性.为了探查假阳性的影响因素，对患者血清标本做了一系列检测旨为寻C O V I DＧ１９抗体检测的影响因素，为医生的诊断提供可靠依据.
材料和方法
㊀㊀１㊀新型冠状病毒筛查资料
㊀㊀患者为男性,６４岁，现定居北京，一年前肠镜检查发现肠息肉，于２０２１年１月２９日来我院消化科进行肠镜复诊，需要进行新冠筛查.咽拭子新型冠状病毒核酸检测(之江公司试剂，批号P２０２１０１５９)结果阴性；抗体检测，静脉采血测定血清特异性I g M
和I g G抗体(博奥赛斯公司试剂)结果I g M为阳性反应，继续进行抗体验证实验测定I g A阴性，总抗体测定阳性反应，特异性抗体I g M㊁I g G㊁I g A采用间接化学发光法测定，总抗体测定采用的是双抗原夹心法.抗体检测(万孚丽珠公司试剂)采用胶体金层析法，结果I g M和I g G抗体均阴性.核酸和抗体均由本院检测.I g M抗体是初次体液免疫应答中最早出现的抗体，被喻为机体特异性抗感染的 先头部队 ，检测I g M抗体可早期诊断感染.I g G抗体产生较晚，但其血清水平较高㊁维持时间长㊁亲和力高，因此I g G抗体阳性提示感染处于中后期或既往感染[５Ｇ６].与患者联系建议复查并居家暂时隔离观察.２０２１年２月１日患者再次来医院检查，同时进行咽部和鼻咽部两处采集核酸标本进行检测(之江公司试剂，批号P２０２１０１５３)，检测结果均为阴性.再次进行抗体检测，静脉采血测定血清特异性I g M 和I g G抗体(博奥赛斯公司试剂)，结果I g M同样为阳性反应，再次进行抗体验证实验I g A阴性，总抗体测定阳性反应.抗体检测(万孚丽珠公司试剂) I g M和I g G抗体均阴性(详细结果及判定标准见表１).与临床主管医生联系密切追踪３周，患者均未产生临床相关症状.
表１㊀血清特异性I g M和I g G抗体两次筛查结果
试剂品牌实验日期试剂批号实验方法抗体类型结果阳性判断标准万孚２０２１０１２９２０１１４２０４１０胶体金层析法I g M阴性T线肉眼可见丽珠２０１１４２０４１０胶体金层析法I g G阴性T线肉眼可见２０２１０２０１２０１１４２０４１０胶体金层析法I g M阴性T线肉眼可见
２０１１４２０４１０胶体金层析法I g G阴性T线肉眼可见和信２０２１０１２９G２０２０１１００４磁微粒化学发光法I g M４．０７∗c u tＧo f f值ȡ１．０S/c o 博奥G２０２０１１００５磁微粒化学发光法I g G０．１２６c u tＧo f f值ȡ１．０S/c o 赛斯G２０２００７９１２磁微粒化学发光法I g A０．０８１c u tＧo f f值ȡ１．０S/c o
G２０２００７９１２磁微粒化学发光法总抗体测定１１．０１１∗c u tＧo f f值ȡ１．０S/c o ２０２１０２０１G２０２０１１００８磁微粒化学发光法I g M４．０７８∗c u tＧo f f值ȡ１．０S/c o
G２０２０１１００５磁微粒化学发光法I g G０．２０５c u tＧo f f值ȡ１．０S/c o
G２０２００７９１３磁微粒化学发光法I g A０．０９０c u tＧo f f值ȡ１．０S/c o
G２０２００７９１２磁微粒化学发光法总抗体测定９．７３４∗c u tＧo f f值ȡ１．０S/c o
㊀㊀㊀注:∗阳性
㊀㊀２㊀入院临床检查
㊀㊀２０２１年１月２９日就诊消化科，入院体温３６．７ħ，流行病学史调查为无疫区旅行或居住史㊁无感染者接触史㊁未进行新冠疫苗接种.患者一年前肠镜查出肠息肉要求复查，体检未见有皮疹，扁桃体无肿大症状，浅表淋巴结未见肿大，咽部未有充血症状，心率:
７０次/m i n
，心律齐，未及杂音，双肺呼吸音清，双肺C T 平扫结果正常,
腹平软，无压痛和反跳痛，双肾区叩击痛为阴性，肠鸣音存在，检查神经系统未发现异
常.白细胞测定值５．７ˑ１０９
/L ,
淋巴细胞绝对值２．２４ˑ１０９/L ，肝肾功能正常,C 反应蛋白正常㊁
凝血四项测定和感染四项测定均正常.２０２１年２月４日进行胃镜肠镜检查，结肠息肉钳除.２０２１年２月７日，息肉病理结果为黏膜符合增生性息肉.
㊀㊀３㊀新型冠状病毒抗体影响因素探查
㊀㊀新型冠状病毒特异性I g M 和I g G 免疫测定假阳性一般具有以下两方面的原因，一个是试剂盒阳性判断值(c u t Ｇo f f v a l u e )设置；再者就是患者标本中存在导致免疫测定假阳性的内源性或外源性干扰物质.本文着重对内源性和外源性干扰物进行探索.目前我们所知的内源性干扰物质一般包括类风湿因
子㊁补体㊁嗜异性抗体等.外源性干扰物质包括溶血㊁标本被污染㊁储存时间过长和标本凝固.㊀㊀４㊀外源性干扰排除㊀㊀标本为当日采集,３５００g 离心力１５m i n 高速离心，未发生溶血，未有标本凝固，安全柜中操作.㊀㊀５㊀内源性干扰物排除
㊀㊀５．１㊀类风湿因子(R F )I g M ㊁补体C ３㊁补体C ４㊀检测试剂：西门子医学诊断产品有限公司,R F 试剂
批号:５０７８９，补体C ３批号:１５３３４４D ，补体C ４批号:
１５３５４３E .方法：散射比浊法，仪器：西门子B NⅡ特
定蛋白分析器.
㊀㊀５．２㊀类风湿因子(R F )I g M ㊁I g G ㊁I g
A㊀检测试剂：欧盟医学实验诊断股份公司,R F ＧI g
A 批号:E ２００７２９
B O ;R F ＧI g M 批号:E ２００９０２A A ;R F ＧI g
G 批号:E ２００７２４C Q .方法：酶联免疫吸附法，仪器:E V O L I S 全自动酶免分析仪.
㊀㊀５．３㊀A N A (抗核抗体)㊀检测试剂：德国欧蒙医学实验诊断有限公司，批号:C F ２００９１５A A .方法：间接免疫荧光法，仪器:O l y m p u sB X Ｇ５１荧光显微镜.
㊀㊀５．４㊀E N A (抗核抗体谱)㊀检测试剂:
德国欧蒙医学实验诊断有限公司，批号:D ２００８１４A A .方法：欧蒙印迹法，仪器:E U R O B L o t M a s t e r Ⅱ全自动免疫印迹仪.
㊀㊀５．５㊀抗环瓜氨酸肽C C P ㊀检测试剂：上海科新生物技术有限公司，批号:E C ２０１００２.方法：酶联免疫检测法，仪器:M u l t i s k a nF Ct h e r m o 酶标仪.㊀㊀５．６㊀抗核周因子(A P F )㊀检测试剂：北京和杰创新生物医学科技有限公司，批号:２０２００９０１.方法：间接免疫荧光法，仪器:O l y m p u sB X Ｇ５１荧光显微镜.
㊀㊀５．７㊀肿瘤影响因素㊀患者一年前肠镜查出肠息肉，当时进行癌胚抗原以及甲胎蛋白检测，结果正常.这次入院检查患者无阳性体征，没有任何不适，否认有过敏史，肿瘤疾病,C T 平扫结果正常，彩超无异常结果.２０２１年２月７日息肉病理结果为黏膜符
合增生性息肉，因此排除肿瘤方面的影响因素.结㊀㊀果
㊀㊀影响特异性I g M 和I g
G 抗体的因素，见表２.表２㊀影响特异性I g M 和I g
G 抗体的因素项目简称
方法
实验结果结果判断类风湿因子I g M R F ＧI g M 酶联免疫吸附法６３．８２＜２０类风湿因子I g M R F ＧI g M 散射比浊法＜９．３８＜９．３８类风湿因子I g
G R F ＧI g
G 酶联免疫吸附法＜２０＜２０类风湿因子I g
A R F ＧI g A 酶联免疫吸附法＜２０
＜２０
补体C ３C ３散射比浊法１．２４０．９~１．８补体C ４C ４散射比浊法０．３１９
０．１~０．４抗核抗体A N A
间接免疫荧光法阴性阴性抗核抗体谱E N A 欧蒙印迹法阴性
阴性抗环瓜氨酸肽C C P 酶联免疫检测法＜２５＜２５抗核周因子
A P F
间接免疫荧光法
阴性
阴性
讨㊀㊀论
㊀㊀本病例新型冠状病毒抗体I g M 和总抗体测定两次均阳性，但是二者都不满足持续增高的标准.同时两次I g A 和I g G 为阴性，据有关科研文献报道血清I g
A 的血清学转化时间在发病后的第２天，而I g M 和I g G 的血清学转化时间发生在发病后第５天.检测１８３例新冠确诊患者,I g
A 阳性率９８．９％,I g M 的阳性率９３．４％,I g G 的阳性率９５．１％.I g
A 和I g
G ，在患者发病后的第２周出现明显的增长，并持续增高；而I g
M 持续升高的不明显[７].这三个观点都说明当I g A 和I g G 都为阴性而只有I g M 为阳性几率非常低.关键是临床表现均不符合诊断标
准，所以最终确定为假阳性.为了寻求假阳性的影响因素特此做了上述实验.结果除了用酶联吸附法测R FＧI g M为弱反应性外其余结果均为阴性.据有关文献研究：核酸阴性,I g M弱阳性㊁I g G阴性患者初次感染载量极低的２０１９Ｇn C o V并处于早期，病毒载量低于核酸检测下限，机体产生少量I g M，尚未产生I g G；或由于患者自身类风湿因子阳性等引起的I g M假阳性[６].因此初步判断有可能是R FＧI g M 因子引起新冠抗体I g M阳性反应.为了进一步证实患者抗体I g M阳性反应可能是类风湿因子引起的，用散射比浊法重新检测同一管血清R FＧI g M结果为低于检测线.由此可见此患者新冠抗体I g M阳性也有可能是R FＧI g M引起的.由于本实验室条件限制没能将全部内源性干扰物排除，所以本实验室一系列内源性干扰物实验检测最终没能明确的确定出本病例影响抗体假阳性的因素.
㊀㊀本实验室所做的一系列实验虽然没能最终到明确的影响因素，但通过对本案例抗体假阳性影响因素的探查，提示我们对任何结果可疑患者，要结合其流行病学史㊁临床表现㊁C T检查㊁核酸检测㊁抗体检测的结果再确诊，以免遗漏无症状感染者.当然新型冠状病毒抗体测定作为核酸辅助筛查方法，对无
症状携带者的筛查㊁C O V I DＧ１９流性病学调查研究以及血浆监测评价等意义很大.可是受很多已知未知因素影响可能出现假阳假阴的结果.由于抗体检测存在窗口期以及检测本身的方法学问题，在临床诊断中，不能单纯地依据抗体血清学结果进行判读[８].所以建议核酸测定最好联合胶体金法和化学发光法两种抗体检测方法.核酸检测与抗体检测的联合可提高诊断效率，当检测结果出现不一致情况时，一定要综合分析判断再进行结果解读，避免误诊.也希望通过个案的分析为抗体检测试剂的进一步完善提供一点有用的信息.
参考文献
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㊀㊀２０２１年５月１０日

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