雅培化学发光法在HIV筛查试验中假阳性分析
张晓红;张倩;周学红;耿红艳
【摘 要】目的 分析雅培化学发光法在HIV筛查试验中的假阳性.方法 对本院2011年8月至2012年3月期间所有术前检查病人通过雅培化学发光法进行HIV筛查试验检测.结果 39076例病人血清标本中,共筛检出阳性血清31例,经北京市疾病控制中心通过免疫印迹法(WB)进行确认后,21例为阳性,6例为不确定,4例为阴性.结论 雅培化学发光法HIV抗原抗体联合检测假阳性率(12.90％)较高,因此仍应结合临床资料及确认试验结果综合判断.%Objective To evaluate the false-positive of Abbott chemiluminescence immunoassay (CLIA) in HIV screening test. Methods The total 39076 samples from the pre-operation patients (from August 2011 to March 2012) in Beijing Tongren Hospital were tested for HIV screening through the ARCHITECT I2000. Results 31 samples were screened as the anti-HIV positive. After the HIV confirmation test by Beijing Center for Disease Control, 21 samples were diagnosed as the anti-HIV positive, 6 samples were indeterminate and 4 samples were anti-HIV negative. Conclusion The false-positive rate of ARCHITECT HIV Ag/Ab Combo is high (12.90% ) , the
anti-HIV positive should be diagnosed based on clinical data and HIV confirmation test with regular follow- up.
【期刊名称】《标记免疫分析与临床》
【年(卷),期】2013(020)001
【总页数】4页(P43-46)
【关键词】化学发光法;人类免疫缺陷病毒
【作 者】张晓红;张倩;周学红;耿红艳
【作者单位】首都医科大学附属北京同仁医院检验科,北京100730;首都医科大学附属北京同仁医院检验科,北京100730;首都医科大学附属北京同仁医院检验科,北京100730;首都医科大学附属北京同仁医院检验科,北京100730
【正文语种】中 文
【中图分类】R392-33核酸检测结果阳性参考值阴性
早期诊断和发现HIV感染对预防HIV传播、控制艾滋病(AIDS)的流行至关重要。目前国内外实验室多采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)方法进行抗-HIV抗体的初筛检测［1］。自1985年第1代抗-HIV ELISA检测试剂问世以来，HIV试剂的检测性能不断改进，现已发展到第四代［2］。第三代为双抗原夹心法，第四代是在第三代试剂的基础上增加了P24抗原的检测，即除了能检测HIV(1+2)型抗体外，还能同时检测HIV-1 P24抗原。第四代抗-HIV ELISA试剂检测的“窗口期”(约16～18d)比第三代的窗口期(约22d)缩短4～5天，但由于抗原抗体均包被在微粒上，使检测灵敏度提高，同时也使特异性下降，引起假阳性。如生物梅里埃HIV第四代ELISA检测试剂，假阳性率显著升高［3-5］，有人也为此提出了一些预防及纠正措施［6］。化学发光法(chemiluminescence immunoassay，CLIA)是一种新型的免疫学检测技术，检测样本的S/CO值明显高于ELISA方法，对于抗体效价较低的弱阳性血清样本，化学发光法具有明显优势，有利于早期发现HIV感染［7］。自雅培化学发光法第四代HIV抗原抗体联合检测试剂盒2011年8月在我院投入使用以来，至2012年3月共检测39076例术前检查病人血清标本，现将结果报道如下。
材料与方法
1 标本来源
北京同仁医院2011年8月至2012年3月期间术前检查病人共计39076例，其中男19108例，女19968例，年龄0～98岁。标本收到后立即以4000 r/min离心10min，然后进行检测。
2 试剂
雅培公司生产的HIV抗原抗体联合检测试剂盒，可检测血清中抗-HIV(1+2)型抗体及P24抗原;试剂盒在有效期内使用。
3 仪器
雅培I2000化学发光免疫分析仪，所有操作均按仪器和试剂盒说明书进行，每天以定值参比血清(雅培)作为质控，质控品和定标液均购自雅培公司。
4 评价方法
HIV抗体检测的初筛、复检及确认程序为:对初次用HIV抗原抗体联合检测试剂进行筛查试验呈阳性反应的标本进行二次离心后复检，复检后仍为阳性的标本通过ELISA实验再次进行复检，各次筛查试验严格按照试剂盒说明书及标准操作规程(SOP)进行操作，将复检至少有一
种试剂呈阳性反应的标本送北京市疾病控制中心(CDC)通过免疫印迹法(Western blot，WB)进行确认。
5 判断标准
化学发光法S/CO≥1.00为阳性，＜1.00为阴性;ELISA实验:标本吸光度≥cutoff值为阳性，＜cutoff值为阴性。
6 结果统计
采用方差分析、χ2检验，应用SPSS 11.5统计软件处理数据。
结 果
1 免疫印迹法确认试验结果
39076例术前检查病人中，使用雅培化学发光法共筛检出抗-HIV抗体阳性31例标本，检出阳性率为0.08%，表明北京仍属于HIV低流行地区。经ELISA实验复检后，又通过北京市CDC免疫印迹法进行确认，结果见表1。
表1 31例阳性标本CLIA、ELISA及WB试验结果阳性 阴性 不确定CLIA 31 0 0 ELISA 27 4 0 WB 21 4 6
化学发光法筛检出的31例阳性病人中，5例为女性，26例为男性。5例女性病人中，2例确认试验为阳性，其余3例为不确定;26例男性病人中，4例为阴性，3例为不确定，其余19例确认试验为阳性。由表1可得，化学发光法的假阳性率为12.90%。
2 检测结果的χ2检验
本研究在复检和确认试验中，因为检测的样本数n＜40，故将所得检测结果进行行列四格表的Fisher确切概率χ2检验。结果表明:Fisher确切概率为1.687，P＞0.05，表明两种试验方法与WB确认试验之间检测结果差异无统计学意义。
3 化学发光法(CLIA)检测不同S/CO值与免疫印迹法(WB)结果比较
比较结果见表2。
表2 31例阳性标本CLIA及WB试验结果CLIA S/CO值 WB阳性 WB阴性 WB不确定1.0 ～10.0 0 2 210.0 ～100.0 0 1 3100.0 ～500.0 11 1 1≥500.0 10 0 0
由上表可看出，以WB检测结果为“金标准”，化学发光法检测S/CO值≥500.0时，100%为HIV阳性。也就是说，当雅培CLIA检测结果S/CO值＜500.0时，WB确认试验结果有可能为阴性或不确定。S/CO值越低，WB检测结果为阴性的可能性越大。
讨 论
多项研究表明，与其他化学发光法HIV检测试剂相比，雅培化学发光法HIV检测试剂表现最佳的灵敏度和特异度［8］，所以本实验室采用雅培化学发光法进行HIV初筛试验。以WB确认试验为金标准，CLIA实验的阳性符合率较ELISA实验低，假阳性率较高;但通过χ2检验，表明两种方法与WB确认试验之间检测结果差异无统计学意义(P＞0.05)。
关于雅培化学发光法在筛查试验中的假阳性，我们的检测结果与韩国Kim的研究结果一致［9］。Kim采用雅培化学发光法共检测155339例病人血清，发现543例为HIV阳性;其中36例为CDC已经确认的HIV感染者，剩余507例进行免疫印迹法确认试验，346例为假阳性，157例为HIV感染者，4例为不确定，假阳性率明显高于我们的结果。另外，男性HIV感染的阳性预测值明显高于女性。Kim结果表明，假阳性标本的S/CO 值平均为2.94(1.00～34.59)，HIV 感染的标本S/CO 值平均为385.97(7.28～739.98);4例不确定标本中，最大S/CO值为390.0，
最小S/CO为10.0。为了使敏感性接近100%，最大S/CO值为6.6，也就是说，当S/CO值＜6.6时，所有结果均为阴性。我们的实验中，确认试验阴性的最大S/CO值(140.24)和确认试验阳性的最小S/CO值(126.36)均大于Kim的结果。与Kim不同的是，假阳性标本中，有2例为小于12岁儿童;不确定标本中，3例为可疑病人，其余3例为大于60岁女性。
结合以上病例分析，雅培化学发光法检测出的HIV假阳性可能与以下因素有关:① 存在其他抗体的干扰(如类风湿系列:ASO、RF、ANA等)，导致抗-HIV假阳性［10］。本研究中两例儿童病人在外院(雅培化学发光法检测)抗-HIV呈阳性反应(S/CO 5.39和3.33)，送北京市CDC经确认后为阴性;今到我院就诊，出现同样结果(S/CO 5.58和3.21)。② 标本性状的影响:标本乳糜、严重溶血或纤维蛋白原较多，甚至是交叉反应都会影响检测结果。日常工作中一些乙肝阳性病人会出现抗-HIV假阳性(S/CO为1～2)。鉴于以上情况，使用同种方法复检时应将标本混匀二次离心后再进行复检或重新抽血进行复检。③确认试验的特异度较高，主要基于HIV不同抗原组分的分离以及浓缩和纯化，另外硝酸纤维素膜上包被的为P24抗原，可检测出血清中相应的P24抗体;而雅培化学发光法第四代试剂可检测出P24抗原。在HIV感染初期“窗口期”，P24抗原大量出现，通过化学发光法可检测出HIV感染，但由于P24抗体未出现，所以确认试验有可能为“不确定”或“阴性”。本研究过程中，一例确认试验为不确定的病人化学发光
法S/CO为390.74，另一例确认试验为阴性病人化学发光法S/CO为140.24，这两例病人均有可疑病史。这种情况下，可建议采用HIVRNA进行复检，或2周后再次通过WB进行确认。
目前国内部分实验室采用罗氏化学发光法进行HIV初筛检测，假阳性标本与确认试验阳性标本重叠部分的 S/CO 值为10.00 ～60.00［11］，也就是说，有2.6%的抗HIV假阳性结果和29.0%确认阳性标本在此S/CO值范围内;所以，低S/CO的标本还需进行确认试验。另外，Kiely提出，化学发光法有时高S/CO值也可能为HIV假阳性，因此进行确认试验还是有必要的［12］。
综上所述，化学发光法具有灵敏度高、特异度高、重复性好、线性范围宽、安全无毒、无放射性污染等优点，尤其是反应快速，每个测试仅需28min，非常适合夜间急诊;但同时也存在一些不足，比如假阳性率较高，所以我们要慎重对待。对每一位疑似病人，应结合临床资料及确认试验结果综合判断，必要时需要病人定期复检。另外，今后应把血清学检测和HIV核酸检测进一步结合起来，实施优势互补，以便最大限度地预防艾滋病的传播。

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