HIV-1抗体确证不确定和阴性样本HIV-1核酸定量检测结果分析
摘要 目的：探讨HIV-1核酸定量检测在HIV-1抗体确证试验不确定和阴性样本中的应用，为艾滋病及时诊断提供科学依据。方法：对204例HIV-1抗体确证试验不确定和阴性样本进行核酸定量检测，通过随访分别进行HIV-1抗体确证试验和核酸定量检测并结合流行病学资料确定其感染状况。结果：204例样本中，抗体不确定样本9I例，核酸定量检测≥5000CPs/ml 53例，低于检测线38例。抗体阴性样本II3例，核酸定量检测≥5000CPs/ml 2例，低于检测线111例。核酸定量检测≥5000CPs/ml 55中随访检测38例，抗体阳转38例占I00%，核酸定量检测≥5000CPs/ml 38例占100%，失访17例。核酸定量检测低于检测线的149例中，未见阳转病例，核酸定量检测低于检测线149例。结论：核酸检测作为补充试验的其中之一，在HIV-1抗体不确定和阴性样本中采用核酸定量检测有助于更快、更早对个体艾滋病感染者进行诊断。
关键词：HIV-1抗体确证试验、不确定、阴性、HIV-1核酸定量检测、诊断
随着《全国艾滋病检测技术规范》（2020年修订版）和《艾滋病和艾滋病感染诊断》（WS-293-2019）的出台和实施。HIV感染检测手段由HIV抗体确证试验改变为补充试验—HIV抗体确证试验和HIV-1核酸试验。随着扩大检测策略的实施，窗口期和晚期艾滋病患者及非特异性反
应的病例被初筛检测出来，采用单一的HIV-1抗体确证试验，这些艾滋病感染者/艾滋病病例就不能及时得到明确诊断。不仅增加患者的心理压力、影响病人的、增加了艾滋病的传播风险、给艾滋病防治工作带来了很大的困难。但艾滋病核酸检测需要投入的设备、检测环境、人员要求比较高，检测成本与HIV-1抗体确证试验相比也比较高，短时间内在本地区很难普片推广。本研究提出了HIV-1抗体确证试验中的不确定和阴性样本增加HIV-1核酸定量检测。HIV-1核酸定量检测不仅大大缩短了窗口期，还可以直接提供HIV感染的证据。本文对204例HIV-1抗体确证试验不确定和阴性样本HIV-1核酸定量检测结果进行回顾性分析。
1．材料与方法
1.1样本来源2018年HIV抗体筛查阳性、经HIV抗体确证试验检测判定为不确定和阴性的样本204例。
1.2检测方法
1.2.1 HIV抗体确证试验
HIV抗体筛查有反应的样本，采用确证试剂为HIV-1+2型抗体检测试盒（WB，HIVBLOT2.2）
（MP生物医学公司），仪器为Aotem20免疫印迹仪，并严格按照实验室标准操作程序文件进行HIV抗体确证试验。HIV抗体确证试验结果根据试剂盒说明书进行判定。
1.2.2 HIV-1核酸定量检测
抗体确证不确定样本采用单份进行HIV-1RNA定量检测，抗体确证阴性样本采用集合核酸定量检测阳性再进行拆分检测。使用COBASAmplIp-rep/COBAS TaqManHIV-1TestV2.0试剂盒（Roche公司），仪器为COBASAmplIp-rep/COBAS Taq-Man全自动分析系统，最低检测限为20拷贝／ｍＬ；所有试验操作均严格按照试剂盒和仪器说明书进行，所有检测试剂均在有效期内使用。
2．结果
2.1HIV-1抗体确证试验不确定和阴性样本HIV-1核酸定量检测结果≥5000CPs/ml病例随访情况:共有55例病例首次HIV-1核酸定量检测均≥5000CPs/ml，其中24例条带为GP160和P24,20例条带为GPI60,4例条带为GPI60和GPI20,5例条带为P24、2例无特异性条带；随访检测38例，抗体阳转38例占100%，核酸定量检测≥5000CPs/ml，38例占100%，按照艾滋病和艾滋病感染诊断WS-293规定38例病例
判定为HIV感染。失访17例，失访率31%。见表一
表一:55例HIV-1核酸定量检测结果≥5000CPs/ml病例随访情况
条带
例数
HIV-1 RNA(CP/mL)
随访
抗体确证
随访HIV-1 RNA(CP/mL)
失访
TND
<20
20-5000
>5000
转阳
转阴
不确定
TND
<20
20-5000
>5000
CPI60、P24
24
0
0
24
I6
I6
0
0
0
0
0
I6
8
GPI60
20
0
0
20
I5
I5
0
0
0
0
0
I5
5
GPI60、GPI20
4
0
0
4
2
2
0
0
0
0
0
2
2
P24
5
0
0
5
3
3
0
0
0
0
0
3
2
无特异性条带
2
0
0
2
2
2
0
0
0
0
0
2
0
合计
55
0
0
55
38
38
0
0
0
0
0
38
I7
2.2 HIV-1抗体确证试验为不确定和阴性样本HIV-1核酸定量检测结果低于检测线病例随访情况:149例病例首次HIV-1核酸定量检测均低于检测线。1例条带为GP160和P24，16例条带为GP160，18例条带为P24，2例条带为P17，111例无特异性条带；随访检测78例，抗体阴转9例，条带无进展17例；核酸定量检测77均低于检测线，结合流行病学资料排除HIV感染。失访71例。见表二
表二：149例HIV-1核酸定量检测结果低于检测线病例随访情况:
条带
例数
HIV-1 RNA(CP/mL)
随访
抗体确证
随访HIV-1 RNA(CP/mL)
失访
TND
<20
20-5000
>5000
转阳
转阴
不确定
TND
<20
20-5000
>5000
CPI60、P24
I
I
0
0
0
I
0
0
I
I
0
0
0
0
GPI60
I6
I6
0
0
0
I0
0
3
7
I0
0
0
0
6
PI7
2
2
0
0
0
2
0
2
0
2
0
0
0
0
P24
I8
I8
0
0
0
I3
核酸检测结果阳性参考值阴性0
4
9
I3
0
0
0
5
P66
I
I
0
0
0
I
0
I
0
I
0
0
0
0
无特异性条带
III
I
0
0
0
I
-
-
-
5I
0
0
0
60
合计
I49
39
0
0
0
28
0
I0
I7
78
0
0
0
7I
3．讨论
临床常见疾病引起的非特异性反应者、急性期感染者、18个月以内HIV抗体阳性的婴幼儿、晚期或终末期AIDS病人等，是“HIV抗体不确定”常见的４类人［１］。与抗体检测相比，HIV-RNA定量检测对这４类人都能提前鉴别诊断。在HIV抗体不确定时，采用HIV-RNA定量检测，结合流行病学资料和不同时间两次HIV-RNA定量检测结果，可对个体感染状态进行诊断；对于抗体确证检测阴性样本采用集合核酸进行集合核酸定量检测阳性再进行拆分检测，及时发现急性期感染病例。本文对204例HIV-1抗体确证试验为不确定和阴性样本进行核酸定量检测，首次核酸定量检测结果≥5000CPs/ml样本55例，随访检测到38例抗体确证均为阳性，核酸定量检测均≥5000CPs/ml；首次核酸定量检测结果低于检测线的病例中，随访也未检测核酸阳性病例。
2015检测技术规范新增了补充试验的概念，即通过检测样本中是否存在HIV抗体、抗原或者核酸而确定HIV感染的检测方法，一定程度上解决HIV抗体确证试验存在的局限问题，并对HIV-1RNA定量检测用于HIV-1感染的诊断做了明确的规定。同时艾滋病和艾滋病感染诊断WS293-2019将HIV抗体筛查试验有反应和核酸定量试验>5000CPs/mL作为艾滋病感染的诊
断标准之一；本研究证明首次核酸定量试验>5000 CPs/mL随访检测抗体确证都能判定为阳性或两次不同时期核酸定量试验>5000CPs/mL，均能判定为HIV感染。国外曾有报道，有少数未经且抗体检测阳性的感染者，血液中HIV-1RNA长期处于低水平状态或低于检测限而无法检出［２］。故对HIV-1抗体不确定和HIV-1RNA定量检测结果低于检测限者，不能仅凭核酸定量检测结果而排除感染，应谨慎做出结论，建议结合流行病学资料和其他补充试验结果来进行综合诊断。

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