脂血、溶血标本对血液核酸检测的影响评价
陈雪;王欢;李萌;赵欣;季茂胜;张蓝江;董玉芳
核酸检测结果阳性参考值阴性【期刊名称】《云南医药》
【年(卷),期】2017(038)004
【总页数】2页(P397-398)
【关键词】脂血;溶血;核酸检测
【作 者】陈雪;王欢;李萌;赵欣;季茂胜;张蓝江;董玉芳
【作者单位】成都血液中心,四川成都610041;成都血液中心,四川成都610041;成都血液中心,四川成都610041;成都血液中心,四川成都610041;成都血液中心,四川成都610041;成都血液中心,四川成都610041;成都血液中心,四川成都610041
【正文语种】中 文
【中图分类】R331
2015年年底全国血站实现了核酸检测的全覆盖，每一份献血者标本均需要进行HBV DNA、HCV RNA和HIV RNA核酸检测。核酸检测技术能缩短病毒感染标志物检测的窗口期，降低经输血传播疾病的风险[1，2]。由于核酸检测技术的高灵敏度，较易受干扰因素的影响[3]，本文初步探讨脂血、溶血标本对于血液核酸检测的影响。
材料和方法制备脂血样本（甘油三酯浓度为15 009.6mg/L）、溶血样本（游离血红蛋白浓度为682mg/L），加入HBVDNA、HCVRNA、HIVRNA标准品，使得检测的终浓度分别为检测下限的3倍。HBV DNA、HCVRNA、HIVRNA分别准备10份样本。
试剂和仪器：乙型肝炎病毒丙型肝炎病毒人类免疫缺陷病毒（1+2型）核酸检测试剂盒（PCR-荧光法）（厂家RocheMolecular Systems瑞士，批号219656，有效期至2018年02月28日）。仪器：cobass201核酸检测系统。
核酸检测：每份标本上机进行单人份检测。
统计学分析：采用SPSS12.0软件进行t检验，计量资料以均数±标准差标识，P＜0.05认为差
异有统计学意义。
结果1．脂血样本本与对照组比较，制备的脂血血浆中甘油三酯浓度为15 009.6mg/L（为正常参考值范围上限的10倍），脂血血浆中加入HBV DNA，HCV RNA，HIV RNA标准品后，浓度分别为6.9 IU/mL、20.4 IU/mL、150.9 IU/mL。脂血组与对照组重负检测的Ct值比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。
2．溶血标本与对照组比较，制备的溶血血浆中游离血红蛋白浓度为682mg/L（为正常参考值范围上限的20倍），溶血血浆中加入HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA标准品后，浓度分别为6.9 IU/mL、20.4 IU/mL、150.9 IU/mL。溶血组与对照组重负检测的Ct值比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。
讨论近年来实时荧光PCR技术被广泛应用于临床病原体的检测，它灵敏度高、操作简单。但是PCR的重复性和准确性也易受标本中干扰物质的影响，例如标本中存在的血红蛋白可以抑制Taq酶的活性，从而导致定量结果偏低，甚至出现假阴性结果。重度脂血的标本也会通过对荧光的屏蔽和吸收而干扰检测[4，5]。
本研究结果显示，使用罗氏cobas S201血筛系统检测HBV DNA，HCV RNA，HIV RNA，脂血组、溶血组与对照组比较的差异无统计意义，提示当血液标本中甘油三酯的浓度为正常参考值范围上限的10倍，游离血红蛋白浓度为为正常参考值范围上限的20倍时，不会因为脂血、溶血因素导致核酸结果出现假阳性或者假阴性。尽管有文献报道乳糜层用于罗氏cobas S201血筛系统检测，对检测结果无影响[6]，但是实际检测工作中，当脂血标本经过2℃～8℃存放后，有乳糜层析出覆盖于血浆表面时，我们会将乳糜层去除后再进行检测，尽量减少脂肪颗粒对检测造成影响。
尽管本研究结果提示脂血、溶血标本对于罗氏cobas S201血筛系统的检测结果无明显影响，但还是要尽量避免采集性状不合格的标本。加强无偿献血的宣传教育，健康体检时询问献血者的饮食情况，尽量避免采集重度脂血的样本。标本留取过程中，避免标本留取不畅，避免挤压旁袋。标本运输和储存过程中，避免剧烈震荡，注意避免全血直接低温冻存及反复冻融。
【相关文献】
［1］张妍，朱海峰，孙波，等．核酸检测技术在血液筛查中的应用及分析[J]．中国输血杂
志,2012(12):1298-1300.
［2］吴丹霄，吴亚玲，吕航军，等．核酸检测在献血筛查中的应用[J]．浙江预防医学，2015(5):501-503.
［3］邹峥嵘,谢云峥,林俊杰．采供血机构开展病毒核酸检测关键控制点初探[J]．中国输血杂志,2011(03):177-179.
［4］何成涛，马贵明，赵静．血站核酸检测工作的质量控制[J]．临床血液学杂志，2015（6）：1074-1076.
［5］陈晓华，赵田．影响FQ-PCR检测HCV RNA结果的标本因素[J]．中国误诊学杂志，2010（4）：345-346.
［6］张龙穆，杨忠思，袁欣没，等．脂血对血液核酸检测结果的影响评价[J]．中国输血杂志，2016,29(1):55-57.

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