左右产生，而IgG 产生晚于IgM ，但存在于体内的时间较长，其产生水平也是有规律的。在本研究中,2例入院抗体阴性者，在第5天IgM 和IgG 抗体仍然为阴性，分别在第7天和第10天IgM 均转变为阳性,IgG 1例转阳,1例仍为阴性，在18d 转变为阳性。通过检测核酸，发现这2例患者核酸CT 值
都比较偏低，病毒载量较大，应该是处于刚发病状态，随后IgM 和IgG 数值逐渐增大，至入院30d 左右，核酸检测仍为阳性，未出院。其余4例患者，入院时IgM 和IgG 抗体均为阳性，随后数值逐渐增大,IgM 抗体在入院10d 达到峰值，随后开始下降。IgG 抗体数值逐渐增加，有的IgG 数值可增大为开
始数值的10倍左右，随后30d ，已出院患者IgG 抗体开始下降，未出院患者还在增加。
通过研究发现，在疾病发展过程中,IgM 和IgG 抗体是逐渐增加的，当病情发展到一定阶段，病情开始好转时,IgM 会先于IgG 达到峰值，随开始下降，随着病情进一步好转，病毒载量进一步下降时,IgG 也逐渐下降，在体内存在一段时间后也可能会消失。
综上所述，核酸检测联合抗体检测对新型冠状病毒肺炎的诊断具有重要的临床意义。同时对新冠特异性抗体进行动态检测，观察其产生规律与水平，也有助于判断新冠病毒肺炎的病程发展、疗效诊断及预后判断。目前，新型冠状病毒肺炎仍在全球肆虐，本课题将继续后续研究，为新型冠状病毒肺炎诊疗提供更多的临床数据。
参考文献
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技术应用探讨[J ].协和医学杂志,2020,11(6):649⁃653.(收稿日期:2021⁃01⁃10)
---5.712.44
20.34-
-
-
3.11
-9.351.50
3.42
28.14
12.30167.587.68
患者1患者2患者3--
2.42
IgM
IgM IgG IgM
IgG IgG IgM 10.823.49167.90IgG
IgM
IgG
21.7314.2652.1925.10
6.85
138.4622.10
18.11
18.82
18.07
15.54
15.25
患者414.9318.1511.6816.19患者544.1410.49251.93106.78265.281535.81278.74135.75239.31144.56患者6
4.46
27.08
16.21
42.93
14.97
38.4811.81
42.8310.25
39.92表1
新冠抗体IgM 和IgG 数值动态变化情况4种国产新型冠状病毒核酸检测试剂
第三方质控品检测结果分析
王晓玲王雪清董变变熊怡王效红任建平
DOI :10.11655/zgywylc2021.06.059
作者单位:030012太原，山西省中医院检验科通信作者：任建平,Email :**************
新型冠状病毒(SARS⁃CoV⁃2)[1]是已知的可感染人类的第7种冠状病毒[2,3]。SARS⁃CoV⁃2属于β属冠状病毒，可引起人类致死性的呼吸系统疾病[4,5]。目前，新型冠状病毒肺炎患者(COVID⁃19)呼吸道分泌物病原学诊断临床实验室常采用实时荧光定量PCR 法(RT⁃PCR )进行核酸检测，而核酸检测结果常受到核酸检测试剂盒质量、标本采集容器、标本取材、患者用药情况、病毒感染部位、病情发展、核糖核酸(RNA )提取方法等影响[6,7]，导致部分有病毒性肺炎影像学表现、核酸检测阴性的患者无法及时确诊[8]，因此临床实验室对SARS⁃
CoV⁃2核酸检测试剂的选择也成为影响COVID⁃19患者病原学诊断的重要因素之一。
第三方质控品作为实验室室内质控物质，满足样本均匀性和稳定性的要求，而且本研究所应用的第三方质控品提供的靶值可以通过数字聚合酶链式反应(PCR )定量检测数溯源至国际单位制(SI )摩尔。因此,SARS⁃CoV⁃2核酸检测实验室在生物安全、无定值参考品等现有条件下，本研究对不同厂家的SARS⁃CoV⁃2核酸检测试剂的第三方质控品的检测结果进行分析，为实验室开展SARS⁃CoV⁃2核酸检测实验前期，检测试剂的选择提供一定的参考依据。员资料与方法1.1试剂
S/CO
1.1.1
第三方质控品：本研究采用广州邦德盛生物科技有
限公司提供的新型冠状病毒核酸(COVID⁃19RNA )液体性能验证参考品，以2019新型冠状病毒假病毒培养液为原料，用阴性稀释液稀释，添加适量的稳定剂制备而成，与临床样本具有良好的互通性。S1(低值)靶值为1.61×103,S2(中值)靶值为1.45×104；批号2020001；覆盖的特征基因：开放读码框1ab (open readingframe 1ab ,ORF1ab )基因坐标片段包括900⁃1500、1850⁃2000、3535⁃3670、13230⁃13580、15360⁃15494、17150⁃17750、18771⁃18920、20700⁃21000、21400⁃21800、核壳蛋白(nucleocapsid protein ,N )(全长)、包膜蛋白(enve-lope protein ,E )(全长)。其靶值可以通过数字PCR 定量检测
数溯源至SI 摩尔。1.1.2
试验试剂：选取4个不同企业生产的试剂盒，分为A⁃
D 共4组。A 组:A 公司生产的新型冠状病毒(SARS⁃CoV⁃2)(ORF1ab /N )核酸检测试剂盒(PCR⁃荧光探针法)，批号:2020007，以下简称试剂A ;B 组:B 公司生产的新型冠状病毒
(SARS⁃CoV⁃2)核酸检测试剂盒(荧光PCR 法)，批号:2020003，以下简称试剂B ;C 组:C 公司生产的新型冠状病毒(SARS⁃CoV⁃2)核酸检测试剂盒(荧光PCR 法)，批号20200205，以下简称试剂C ;D 组:D 公司生产的新型冠状病
毒(SARS⁃CoV⁃2)核酸检测试剂盒(PCR⁃荧光探针法)，批号S202002001、T2020001128，以下简称试剂D 。1.2方法
1.2.1生物安全防护：第三方质控品为通过pET28a⁃MS2载体克隆表达的含有SARS⁃CoV⁃2N 基因、ORF1ab 基因和E 基因组合的目的片段组成的病毒样颗粒。在使用时应由受过培训的实验室专业人员，在通过“临床基因扩增检测实验室”验收的二级生物安全实验室，二级生物安全防护水平下进行操作，按有潜在生物传染性样本对待，操作和处理均需符合卫
生部《微生物生物医学实验室生物安全通用准则》和《医疗废物管理条例》相关法规要求。1.2.2
检测方法：实验人员严格按照《医疗机构临床基因扩
增检验实验室管理办法》(卫办医政发〔2010〕194号)及《新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南(第五版)》相关文件进行实验操作。①RNA 提取：使用达安基因Smart32核酸提取仪，严格按照试剂说明书进行提取。②核酸扩增：使用ABI7500PCR 仪，根据不同厂家试剂说明书设置反应程序后扩增检测并对检测结果进行阴性、阳性的判定。③质量控制：每批试验均带阴性和阳性对照，阴性和阳性对照检测结果在控，则该批次试验有效，反之无效。
1.2.3实验设计：试剂A 、试剂B 、试剂C 、试剂D 根据说明书提供的检测和循环体系，同时平行检测；连续5d 进行检测,
记录检测结果(Ct 值以及阴阳性判读);1d 内连续重复4次检测，记录检测结果(Ct 值以及阴阳性判读)，以Ct 值计算均值、标准差和变异系数。1.3统计学方法
采用Excel2003及IBM SPSS Statistics 22统计软件，计
数资料以例数(%)表示，进行χ2检验、计算变异系数(CV 批内
、
CV
批间
)。
圆结
果
2.1不同试剂的检测结果分析
本研究采用第三方质控品中值、低值质控品原液、10倍、
100倍、1000倍倍比稀释，依次表示为M0、M1、M2、M3、L0、L1、L2、L3，分别应用试剂A 、试剂B 、试剂C 、试剂D 检测。其中，试剂CORF1ab 位点检测均为阴性，原因不排除第三方质控品覆盖的特征基因序列不包括该试剂ORF1ab 扩增片段，各试剂对第三方质控品不同稀释倍数的假病毒检出比例见表1。
试剂A 135105
N/A 试剂D 5045
10试剂B 14080N/A
试剂C N/A 301525
11020N/A 84.3887.50N/A
31.25160160
N/A 1605511580
13065.6350.0018.7528.13160160160160N/A 150
N/A 145N/A N/A N/A
N/A
1609.38160
6.25基因位点ORF1ab
N 基因
E 基因
表1各试剂检测结果汇总
合计
25
67.7148040.63
640
295320
7.81325
155
260380注:N/A 未检出
针对不同试剂ORF1ab 、N 、E 基因位点检出比例的差异是否具有统计学意义，本研究采用χ2检验。其中试剂A 、试剂
B 、试剂D 对ORF1ab 基因检出比例比较,χ2=29.25,P <0.005，差异具有统计学意义，认为其检出比例不一致；试剂A 、试剂
B 、试剂
C 、试剂
D 对N 基因检出比例比较,χ2=17.88,P <0.005，差异具有统计学意义，认为其检出比例不一致；试剂C 、试剂D 对
E 基因检出比例比较,χ2=0.22,P =0.641，差异无统计学意义。
2.2不同试剂可检测的最低浓度
针对本研究中第三方质控品的核酸检测而言，试剂A 、
试剂B 针对ORF1ab 基因位点可检测的最低浓度为14.5
copies /ml ，试剂C ORF1ab 基因位点检测不出，试剂D 可检测
最低浓度为1.45×104copies /ml ；试剂AN 基因位点最低检测
浓度为145copies /ml ，试剂B 为1.61×103copies /ml ，试剂C
为1.45×104copies /ml ，试剂D 为1.61×103copies /ml 。试剂A 、试剂B 检测位点不包括E 基因，试剂C 、试剂D 针对E 基因
0.54
%CV %5.69%N/A
1.41
%CV %2.65核酸检测结果多久出
%CV %CV %0.440.9
M0
ORF1ab M3ORF1ab 0.53  2.01  5.87  4.87N/A N/A N/A
N/A
M2ORF1ab 0.44
1.347.41  5.88N/A
N/A
N/A N/A
M1ORF1ab 0.37
1.54  3.82
2.2N/A
N/A
N/A
N/A 1.33
2.39
N/A
2.55
4.06N/A
3.54
2.77
L0ORF1ab L1ORF1ab 0.61
2.440.87  4.33N/A
N/A    2.660.19E
N/A N/A N/A
N/A
N/A
N/A
N/A
N/A 0.82  3.87
3.771.4510.777.240.890.91N E
N/A N/A N/A
N/A    4.6917.56  2.9
1.31N 0.37  1.69N/A
N/A
N/A N/A
N/A
N/A E
N/A
N/A
N/A N/A
N/A N/A N/A N/A N 0.46  3.08N/A
N/A
N/A
N/A N/A N/A E
N/A
N/A
N/A N/A N/A N/A N/A N/A N N/A
N/A
N/A
N/A
N/A N/A
N/A
N/A
E
N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A
N/A
N    1.280.940.7110.06N/A
N/A
2.64  1.83E
N/A
N/A
N/A
N/A
N/A N/A N/A
N/A
N    1.630.74N/A
N/A N/A
N/A N/A N/A
E
N/A
N/A
N/A N/A N/A
N/A
N/A
N/A L2ORF1ab    1.470.740.540.82N/A N/A N/A
N/A N N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A L3ORF1ab N/A
N/A
N/A
N/A
N/A
N/A
N/A
N/A N N/A
N/A
N/A
N/A
N/A
N/A
N/A
N/A
第三方质控点
检测位点表2
各试剂批内批间精密度汇总
注:N /A ：未检出E
N/A
N/A
N/A
N/A
N/A
N/A
N/A
N/A
位点的检测结果在最高浓度1.45×104copies /ml 下检出比例均为50.00%。
2.3不同试剂批内批间精密度2.
3.1
不同试剂批内精密度：试剂A 、试剂B 、试剂C 、试剂D
检测第三方质控品SARS⁃CoV⁃2核酸,1d 内连续4次实验，记录Ct 值，计算批内精密度，见表2。结果显示试剂A 批内重复性较好(CV
批内
<2%)，试剂B 批内重复性最大达到7.41%,
试剂C 、试剂D CV 批内
<5%。
2.3.2
不同试剂批间精密度：试剂A 、试剂B 、试剂C 、试剂D 连续5d 检测不同浓度第三方质控品，记录Ct 值，计算批间精密度，见表2。结果显示试剂A 、试剂D 批间重复性较好
(CV 批间
<4%)，试剂C 批间重复性最大达到17.6%，试剂B
CV
批间
≤10%。
猿讨
论
SARS⁃CoV⁃2核酸检测中的质量控制要求在每批次扩增
过程中设立1个弱阳性质控和3个阴性质控，而且3份阴性质控需随机放在临床检测标本中间，但是，各厂家试剂的阳性质控品有的是含有检测位点的假病毒，有的是体外转录RNA ，有的是DNA 质粒，内标设置也参差不齐[9]。本研究通过
对不同厂家试剂检测均匀性、稳定性的第三方质控品的结果分析，对不同检测试剂盒的选择提供一定的参考依据，发现不同核酸检测试剂对第三方质控品检出限、精密度的差异，正确解释检验结果。
研究发现,4种SARS⁃CoV⁃2核酸检测试剂中，试剂A 、试剂B 针对第三方质控品ORF1ab 位点均可以在低值质控稀释1000倍后测出，且批内、批间精密度较好。试剂C 和试剂D 可以检测SARS⁃CoV⁃2ORF1ab 、N 、E 三个位点，其中针对本研究中第三方质控品,N 、E 基因位点的检出比例相当，试剂C 批内、批间精密度略高于试剂D ；但是由于第三方质控品的局限性，试剂CORF1ab 检测位点不能检出，原因可能是第三方质控品构建假病毒过程中没有覆盖试剂C 的目的片段，因此并不能判断试剂C 对ORF1ab 基因位点的检测能力。
而尽管第三方质控品不可能替代临床标本以及标准物质进行试剂性能验证实验，但是在尚未开展SARS⁃CoV⁃2核
微生物培养检测技术快速检测肺炎支原体感染的诊断价值
陈志毅刘英
DOI :10.11655/zgywylc2021.06.060作者单位:047300山西省壶关县中医院检验科(陈志毅)；山西
省大同市第一人民医院检验科(刘英)
肺炎支原体(Mp )的体积介于病毒与细菌之间，为一种原核细胞生物。Mp 是引起人类呼吸道感染的常见病原体，在进入体内后会快速繁殖，引起肺炎的发生[1]。目前临床诊断Mp 感染的方法比较多，包括酶联免疫吸附试验、金标免疫层析试验、分子生物学试验、微生物培养检测等，其中后者为早期诊断方法，所需要的检测时间比较长。本研究对医院2017年
6月至2020年9月期间诊治的90例疑似Mp 患者的微生物培养检测结果进行分析。现报告如下。员资料与方法
1.1研究对象：本研究在医院伦理学委员会监督下进行，所有纳入的患者都在自愿条件下签署了知情同意书。选择2017年6月至2020年9月在本院诊治的疑似肺炎支原体感染患
者90例作为研究对象。纳入标准：患者临床存在气喘、气促、发热、咽痛、胸痛等呼吸系统临床症状，肺部体征以X 线炎症为主，白细胞计数正常或者增高；患者在检测过程中主动配合；患者年龄6~60岁；临床资料以及检测数据等均完整无缺。排除标准：检测前服用过影响检测结果的药物者；妊娠与
哺乳期妇女；合并其他呼吸系统疾病患者；患有心、肺、肝、肾等严重脏器疾病患者；合并老年痴呆等精神障碍者。其中男性48例，女性42例；年龄7~56岁，平均(34.9±2.2)岁；病程2d 至3个月，平均(12.5±2.8)d ；平均体质量(65±11)kg 。1.2微生物培养检测方法：支原体基础培养基购自上海生工
公司，包括20%小牛血清20ml 、青霉素0.5ml (20万U /ml )、50%葡萄糖0.4ml 、2.5%0.5μl 、0.4%酚红0.5μl ，调节
pH 至8.0，将灭菌棉签取样的咽拭子标本接种于2ml 支原体培养基中,37℃培养，每天观察结果，若培养基变黄并透明澄清，可转种固体基进行血吸附试验判断阳性；如标本培养21d 后，连续传代2次，培养基仍无颜改变的为阴性。对分离的菌株进行耐药性检测，根据美国临床与实验室标准委员会颁布的操作规范进行，涉及的抗菌药物包括红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、米诺环素、左氧氟沙星、泰利霉素等。1.3
血清学检查：采用日本富士公司生产的Mp 抗体检测试
剂进行血清学检测，采集所有患者的外周血2~3ml ，分离血清后进行检测。实验方法及结果判定参照说明书进行，实验同时设定对照。血清最终稀释倍数≤1∶40为阴性,≥1∶80为阳性。1.4
分子生物学检查：取患者的咽拭子样本，采用QIAGEN
酸检测的实验室，缺乏标准物质、生物样本的情况下，实验室仍然可以在二级生物安全防护下，以可溯源、保证样本均一性及稳定性的第三方质控品作为检测样本，对不同检测试剂的选择提供一定程度的参考依据。
SARS⁃CoV⁃2核酸检测结果作为疑似病例确诊的病原
学证据之一，对临床COVID⁃19患者诊断具有重要的参考价值[8],SARS⁃CoV⁃2核酸检测存在假阳性是综合因素导致的[7]，随着SARS⁃CoV⁃2核酸检测试剂盒的不断改进，实验室SARS⁃CoV⁃2核酸检测性能验证方案的实施，室内与室间质控体系的逐步完善以及对SARS⁃CoV⁃2致病机制、疾病病程的深入研究,SARS⁃CoV⁃2核酸检测灵敏度、特异度、精密度
将会大幅提升，更加有助于COVID⁃19的防控与监测。
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