2020,24(23):113-115.实用临床医药杂志Journal of Clinical Medicine in Practice-113・
全自动核酸检测分析系统
在无偿献血者病毒检测中的应用
刘永霞，刘欢，刘燕，赵妮
（延安大学附属医院输血科，陕西延安，713000）
摘要：目的观察全自动核酸检测分析系统在无偿献血者血液乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）和人类免疫缺陷病毒（HIV）检测中的应用效果。方法选取无偿献血者1229例作为研究对象，每位献血者采集2管静脉血，管用于酶联免疫吸附试验（ELISA）检测，另1管用于核酸检测。结果核酸检测、ELISA检测的HBV阳性率分别为2.03%.0.98%，差异有统计学意义（P<0.05）；核酸检测.ELISA检测的HCV阳性率分别为1.02%、1.14%，差异无统计学意义（P>3.35）；
核酸检测、ELISA检测的HIV阳性率分别为O.M%、®%，差异有统计学意义（P<3.35）。结论全自动核酸检测分析系统应用于无偿献血者血液HBV、HCV和HIV检测中具有较高的筛查准确率，与ELISA检测方法比较各具优势,2种方法联合应用可提高病毒检测的准确性。
关键词：全自动核酸检测；无偿献血者；乙型肝炎病毒；丙型肝炎病毒；人类免疫缺陷病毒
中图分类号：R44&6；R512.6文献标志码：A文章编号：1672-2353（2223）23-113-03DOI：  1.7619/jcmp.222223034
Role of automatic nucleic acid detection
analysis system in detecting of virus
io voluntary blood donort
LIU Yongxin,LIU Huan,LIU Yan,ZHAO Ni
(Department of Blood Transfusion,^filiated Hospital of Yan'an University,Yan'an,Shaanxi,716000)
核酸检测结果阴性Abstruct:Objectivv To oUserve thd effect of automatia nacleia aciC detectiou analysis system in detectiou of hepnitis B vimt(HBV),hepnitis C vimt(HCV)ani human immcnoUeficiecca vi-nit(HS)in blooU samplct of blooU douort.MetOodt A totai of122/vvlcntecn blooU donorn wern selected,two copics of blooO in eacl donor wern collecteC,1copy was nsC foa Enzymc LinkeC Im-mnnosornept Assay(ELISA)a nt anotaca otic way nsC foa nncle-o aciC detectioo.Resyltt Thc poa-itivv ratesoi HBV by nncle-o aciC test ant ELISA test wern2.65%ant0.6/%,resyectiveiy ,teem way sivnificont climerepco(P<0.05).The positivv mtco of nncle-o aciC test ant ELISA in detectinn HCV wern1.02%ant1.
14%,taern wao no sionificont clifferepco(P>0.05).The positivv mtco of nnciic acin test ant ELISA in HU detectioo wern0.04%ant1.06%,them wao signimcont climpv-sco(P<0.05).Conclusion Automatti ucc IC o aciC detectioo analysit system ha-highcr accam-cy mte in screeaino HBV,HCV and HS in volnntam blooO donorn-nnciic aciC detectioo ant ELISA detectioo havv tae-v own1x4101(0-ant tie combindtion of tie two metaoUc cin inprovv tie accaraco of vimt detectioo.
Key wordt:101X11-0nncle-r aciC detectioo;volcntam blooO donorn-hepuitis B vimt-hep-dtitis C vimt;human immcnoOeficieaco vimt
保证血液及血液制品的安全性和提高输血相关传染病的防控能力等是目前临床广泛关注的焦点[1]0中国常用的血液筛查方法是以检测血液中病毒抗原或抗体滴度为原理的酶联免疫吸附试验（ELISA）法，但该方法具有较长的病毒感染检测窗口期，使得窗口期病毒检测结果呈假阴性，降低了对血液病毒的有效防控能力[2-5]o核酸检测法是一种利用核酸扩增技术直接检测病原体核酸
收稿日期：2222-5/-11
通信作者：刘欢,E-maii：****************
的新型血液病毒筛查检测技术，该方法敏感度高，可检测出微量病毒，并将乙型肝炎病毒(HBV)、丙型
肝炎病毒(HCV)和人类免疫缺陷病毒(HIV)感染窗口期分别缩短9~36d、25~60d和7~15d，大大降低了血液传播病毒的感染风险[4-6]02414年起中国将核酸检测法应用于血液病毒筛查工作中，为加强临床输血安全和降低输血相关传染病发生率提供了可能[7]0为了探讨核酸检测法在血液筛查中的临床应用价值，本研究将全自动核酸检测分析系统应用于无偿献血者血液HBV、HCV和HIV检测中，并与ELIVA法检测结果进行比较，现将结果报告如下0
1资料与方法
1.1一般资料
选取2414年1—5月在延安市中心血站献血的1229例无偿献血者作为研究对象，其中男655例、女571例，年龄22~55岁，平均(41.14±6.44)岁。每位献血者均采集2管静脉血，1管(7mL真空抗凝管)用于ELISA检测，另外1管(5mL EDTA-K2抗凝带分离胶真空采血管)用于核酸检测0
1.4检测方法
1-4.1ELISA检测：收集7mL静脉血转移至真空抗凝管中，室温条件下，离心22min后保存于2~8七冰箱中备用。采用全自动加样仪自动加样，全自动酶免分析仪分析血液，详细记录检测果0
1.4.4核酸检测：将经离心处理的5mL血样应用全自动核酸提取仪进行处理。汇集管中样本总量为1444加
入1000裂解液和44磁珠，加100r L去抑制剂裂解血液样本，注意防止血样污染。分别加955r L的A、B、C洗液洗脱后，加入120r L结合液，核酸提取仪从96孔深孔板中提取核酸，同时配备扩增核酸的反应液。核酸扩增步骤为加入核酸提取液及新配制的核酸扩增液反应液，随后置于ABV750PCR仪进行扩增分析，详细记录结果，并根据阳性血液样本数目计算血液样本阳性率。
1.3统计学处理
采用SPSS19.0统计学软件分析本研究数据，计数资料的比较使用McNemcr检验，检验水准a=0.05，以P<0.05为差异有统计学意义。2结果
2.42种方法的HBV检测结果比较
核酸检测的HBV阳性率为2.03%(25/1222)，高于ELSA检测的HBV阳性率0.49%(12/1222)，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1o
表1核酸检测与ELISA检测的HBV检测结果比较
核酸检测-
ELISA检测
计
阳性性
阳性22325
阴性1011941224
合计1215171229 ELISA：酶联免疫吸附试验；HBV：乙型肝炎病毒。
2.02种方法的HCV检测结果比较
核酸检测的HCV阳性率为1.22%(15/1222)，高于ELSA检测的HCV阳性率144%(41222)，但差异无统计学意义(P>0.05)，见表2o
ELISA检测
表2核酸检测与ELISA检测的HCV检测结果比较
核酸检测
阳性性
计
阳性7815
性712271512
计1415151229 ELISA：酶联免疫吸附试验；HCV：丙型肝炎病毒。
2.32种方法的HS检测结果比较
核酸检测的HS阳性率为0.24%(3/1222)，低于ELSA检测的HS阳性率1.06%(13/1222)差异有统计学意义(P<0.05)，见表3o
表3核酸检测与ELISA检测的HIV检测结果比较
核酸检测
ELISA检测
计
阳性性
阳性303
性1012161226
计1312161229 ELISA：酶联免疫吸附试验；HIV：人类免疫缺陷病毒。
3讨论
目前，经血液传播疾病有22多种，其中包括艾滋病、乙型肝炎、丙型肝炎等传染性较强的疾病。无偿献血者血液中存在HBV、HCV、HS的概率不断升高⑻，因此做好血液病毒筛查工作对于保证血液及血液制品的质量至关重要。临床上 常选用特异性较高的ELISA法进行血液病毒筛
查，但该方法的影响因素较多［9-11］:①血样污染。非一次性全自动酶免分析仪使用自动加样针，若加样针被阳性血样污染后未彻底清洗，会导致下一次血样检查出现假阳性。②抗原试剂质量不达标也可能影响检测结果。国产抗原试剂一般纯度较低，易造成假阳性，而进口试剂纯度较高，假阳性率相对较低，2种试剂联合检测可提升血样结果的真阳性概率。相关研究［5］显示，应用国产抗原试剂进行ELISA检测时，由于试剂质量不高，检测结果假阳性率可高达0.18%。③样本溶血、自身免疫性抗体和有交叉反应的物质等也会影响检测结果。病毒进入体内至能够被检测到的时间为病毒感染的窗口期,ELISA检测窗口期较长，可使窗口期血液病毒的检查结果呈假阴性，但实际上此时已存在病毒感染，且病毒具有一定复制能力，传染能力较强。
病原体核酸检测技术简称核酸检测技术，利用生物、物理、化学技术对微量靶核酸及其附带的信号进行扩增并转化成光电和可视信号来反映病毒阳性情况。本研究结果显示，核酸检测技术对HBV的检测阳性率高于ELISA检测，差异有统计学意义(P<0.05)，与何培元等研究结论一致。李天驹等［5］报道，核酸检测技术能检测极微量病毒感染几天后的感染情况，灵敏度较高。相关研究［15］显示，核酸检测法不仅能使HBV检测窗口期缩短25d，还能避免ELISA法的HBV筛查假阳性率高现象。虽然核酸检测法并不能完全消除窗口期的影响，但未能被此法检测到时的HBV传染能力较弱，故采用核酸检测法筛查HBV 可大大降低HBV输血传播风险。本研究结果显示，相较于核酸检测技术，ELISA法对血液HIV 具有更高的筛查阳性率，说明ELISA法更适用于血液HIV筛查，这可能与病毒载量低、未能达到核酸检测水平有关。但当机体长期处于病毒感染状态时，血液中抗原和抗体滴度较高，不影响ELISA检测。尽管如此，本研究中ELISA法的HIV检测阳性率仅1.06%，出现漏诊现象的原因主要是窗口期的影响，且HS属于RNA病毒，结构不稳定，故采用ELISA法检测易出现假阴性。核酸检测法是检测病毒核酸,ELISA法则是检测抗原或抗体，2种检测方法的应用原理不同，联合应用时可有效提高血液病毒筛查的灵敏性和特异性，进而提升血液筛查的准确性。相较于ELISA法，核酸检测法需要更高的样本处理和操作技术，实验室条件要求和检测成本更高，且检测 载量低的病毒时易出现假阴性，此时采用ELISA 法检测血液中高血液病毒筛查阳性率。
综上所述，全自动核酸检测分析系统在无偿献血者血液HBV、HCV、HS检测中具有重要作用，与ELISA法比较各具优势，2种方法联合应用可提高病毒检测结果的准确性，进而提升血液筛查的安全性。
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