Stain-free gel 说明书
TGX and TGX Stain-Free FastCast acrylamide kits 可以用于配制SDS-PAGE or PAGE胶。
它的特点:
1. 分离胶和浓缩胶可以同时加入，30分钟内就可以跑胶。
2. 在不损伤凝胶的情况下，300V电压下电泳只需要20min。
3. 有效的蛋白转移时间小于3min。（使用Trans-Blot® Turbo™ blotter滤纸）
4. 丙烯酰胺溶液在室温（22–28°C）下保质期是一年，凝胶在 4ºC下可以保存4周
5. 用TGX Stain-Free kits可以在5分钟内看到免染胶或者转印膜中蛋白条带。
6. 用TGX Stain-Free kit试剂盒不需要染就可以检测电泳和转染的步骤。
表一：每个试剂盒可以配制的胶的数量
根据表2的说明配制不同的胶
注意：分离胶溶液中加入APS和TEMED后应在8-9min内立即灌胶和插入梳子。为了确保有充足的时间插入竖子，不要一次同时灌10块胶。
说明：
1. 通过加入等体积的resolver A 和resolver B 溶液来配制聚丙烯酰胺凝胶溶液。
2. 向分离胶溶液（resolver solution）中加入所需用量的TEMED和新鲜配制的10% APS后充分混匀，灌胶。不要有气泡产生或者溶液中混入空气。将胶灌至梳子齿下0.5-1cm处。之后立即准备配制和灌入浓缩胶溶液。
Note:插入梳子，并且做标记，确保分离胶灌注的量在梳子下的合适位置。
For the combined resolving gel solutions from the starter kits, add 40 µl of TEMED and 400 µl of freshly made 10% APS.
3. 准备浓缩胶（stacker solution）：加入等体积的stacker A 和 B 溶液 (见 Table 2).
4. 向浓缩胶（stacker solution）溶液中加入所需用量的TEMED和新鲜配制的10% APS后充分混匀。用移液器把胶从中间加入至短玻璃的顶部。缓慢平稳的灌胶，防止浓缩胶混入分离胶中。对齐后缓慢地插入梳子防止梳齿下端进入空气。电泳前胶凝固需要30-45min。
5. 凝固的胶可以用沾有去离子水的湿巾覆盖后放入一个密封的塑料袋中在4°C环境下存放 4 周。
以下是凝胶电泳，免染成像和蛋白印迹的指南。
用样品缓冲样（含有或不含有减少试剂如BME）来配制上样样品，用1x Tris/glycine/SDS的电泳缓冲液来进行TGX凝胶电泳。
表三：手灌胶TGX或免染SDS-PAGE胶在Mini-PROTEAN Tetra cell装置的电泳条件。
resolver什么意思中文Note:当在Mini-PROTEAN Tetra cell装置中只进行1-2块凝胶电泳时，不要把电泳配件模块（companion module）放进电泳槽中。
不要同一时间内在同一个电泳槽进行两种不同类型（化学）凝胶的电泳
表四：用Bio-Rad免染成像仪来进行免染胶的激活。
Note:1.免染胶印迹成像前必须激活胶中的免染成分
2.免染激活方案需要Bio-Rad’s Image Lab™software软件
表五：用Trans-Blot Turbosystem进行蛋白印迹的转印条件。

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