本技术涉及一种AS3MT基因单核苷酸多态性位点检测试剂盒，使用方法及应用，属于医药卫生技术领域。
为解决现有技术无法预测高白细胞血症的发生的问题，本技术提供了一种AS3MT基因单核苷酸多态性位点检测试剂盒，包括用于检测AS3MT基因上rs3740390多态性位点的特异性引物。通过rs3740390多态性位点的PCR扩增、纯化、单碱基延伸及延伸产物的纯化、测序及结果分析，根据多态性位点的基因型能够快速准确的预测被测样本是否具有高白细胞血症易感性。将本技术应用于预测砷剂APL过程中高白细胞血症的发生，能够实现砷剂的个体化科学用药，有效降低高白细胞血症的发生率和病死率，具有十分重要的临床意义。
权利要求书
1.一种AS3MT基因单核苷酸多态性位点检测试剂盒，其特征在于，包括用于检测AS3MT基因上rs3740390多态性位点的特异性引物，所述特异性引物包括扩增rs3740390多态性位点的引物和单碱基延伸rs3740390多态性位点的引物。
2.根据权利要求1所述一种AS3MT基因单核苷酸多态性位点检测试剂盒，其特征在于，所述扩增rs3740390多态性位点的引物序列为：
上游引物：5’-TCTTGCCTCCTGTACAATGG-3’，即Seq ID No.1；
下游引物：5’-CAGAAAAATGGGAGGCAATG-3’，即Seq ID No.2。
基因多态性3.根据权利要求1或2所述一种AS3MT基因单核苷酸多态性位点检测试剂盒，其特征在于，所述单碱基延伸rs3740390多态性位点的引物序列为：
5’-TTTTTTGTAAATAGAGTGAAGTGCT-3’，即Seq ID No.3。
4.根据权利要求3所述一种AS3MT基因单核苷酸多态性位点检测试剂盒，其特征在于，还包括如下试剂：DEPC水、Quick Taq HSDyeMix、PCR产物纯化酶、单碱基延伸反应酶及相应缓冲液和单碱基延伸产物纯化酶。
5.一种如权利要求1-4任一所述的AS3MT基因单核苷酸多态性位点检测试剂盒的使用方法，其特征在于，步骤如下：
步骤一、收集外周静脉血并从中提取基因组DNA；
步骤二、利用扩增rs3740390多态性位点的引物，以基因组DNA为模板进行AS3MT基因上rs3740390多态性位点的PCR扩增；
步骤三、对步骤二所得PCR扩增产物进行纯化；
步骤四、利用单碱基延伸rs3740390多态性位点的引物，以步骤三所得纯化后的PCR扩增产物为模板进行rs3740390多态性位点的单碱基延伸；
步骤五、对步骤四所得单碱基延伸产物进行纯化；
步骤六、对步骤五所得纯化后的单碱基延伸产物进行测序。
6.根据权利要求5所述一种AS3MT基因单核苷酸多态性位点检测试剂盒的使用方法，其特征在于，步骤二所述PCR扩增的反应体系为：DEPC水16μl、Quick Taq HSDyeMix25μl、基因组DNA模板7μl、上游引物1μl和下游引物1μl。
7.根据权利要求5或6所述一种AS3MT基因单核苷酸多态性位点检测试剂盒的使用方法，其特征在于，步骤三所述PCR扩增产物的纯化方法为取虾碱性磷酸酶与核酸外切酶I按体积比1:1混合配制消化液，在PCR扩增产物中加入消化液，37℃条件下温浴60min，80℃条件下灭活15min。
8.根据权利要求7所述一种AS3MT基因单核苷酸多态性位点检测试剂盒的使用方法，其特征在于，步骤四所述单碱基延伸的反应体系为：步骤三所得纯化后的PCR扩增产物模板2μl、单碱基延伸rs3740390多态性位点的引物2μl、BigDye 0.8μl、Sequencing Buffer 1.6μl和DEPC 水3.6μl。
9.根据权利要求8所述一种AS3MT基因单核苷酸多态性位点检测试剂盒的使用方法，其特征在于，步骤五所述单碱基延伸产物的纯化方法为在单碱基延伸产物中加入虾碱性磷酸
酶，37℃条件下温浴60min，75℃条件下灭活15min。
10.一种如权利要求1-4任一所述的AS3MT基因单核苷酸多态性位点检测试剂盒在预测高白细胞血症易感性中的应用。
技术说明书
一种AS3MT基因单核苷酸多态性位点检测试剂盒，使用方法及应用
技术领域
本技术属于医药卫生技术领域，尤其涉及一种AS3MT基因单核苷酸多态性位点检测试剂盒，使用方法及应用。
背景技术
高白细胞血症是血液科急危重症，是指患者外周血白细胞数大于10×109/L。患者易出现颅内出血、脑梗死、成人呼吸窘迫综合症、肿瘤细胞溶解症等危及生命的并发症，易导致早期死亡。
急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia，APL)是一种造血干细胞恶性克隆性疾病。单剂砷剂在初发和复发的APL患者中具有低复发率并且高缓解率的特点，现已成为APL的一线首选药物。但砷剂APL是一把双刃剑，在取得显著疗效的同时，临床应用过程中部分患者会出现高白细胞血症，严重威胁患者的早期生存率及生存质量。
研究证明，砷剂产生的及毒副作用取决于其产生的活性代谢产物，但是患者个体间对于砷的甲基化代谢能力存在较大的差异，这种差异会直接影响个体在过程中产生的效果和并发症的发生。APL患者对砷剂的个体化差异及并发症的发生给APL的临床合理用药带来了极大的挑战。
随着临床药物基因组学的发展，通过患者相关基因的单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphism,SNP)的检测，就可以实现预测药物的疗效和毒性的目的，进而优化药物方案。As3MT基因位于10号染体的10q24.32区域，该基因中已鉴定出多种遗传多态性，包括SNPs和数目可变串联重复序列。根据流行病学研究发现，AS3MT基因的多态性与砷在体内的代谢以及疾病的发生具有密切的联系。尽管关于AS3MT基因多态性与砷甲基化代谢的研究在基因组学上取得了瞩目的成就，但是As3MT基因多态性位点与APL患者应用砷剂过程中发生高白细胞血症的关系却知之甚少。
技术内容
为解决现有技术无法预测高白细胞血症易感性的问题，本技术提供了一种AS3MT基因单核苷酸多态性位点检测试剂盒，使用方法及应用。
本技术的技术方案：
一种AS3MT基因单核苷酸多态性位点检测试剂盒，包括用于检测AS3MT基因上rs3740390多态性位点的
特异性引物，所述特异性引物包括扩增rs3740390多态性位点的引物和单碱基延伸rs3740390多态性位点的引物。
本技术所述的AS3MT基因上rs3740390位点为人类基因组10号染体中自5’末端起第102878723位核苷酸；所述的rs3740390位点的核苷酸为C/T。
进一步的，所述扩增rs3740390多态性位点的引物序列为：
上游引物：5’-TCTTGCCTCCTGTACAATGG-3’，即Seq ID No.1；
下游引物：5’-CAGAAAAATGGGAGGCAATG-3’，即Seq ID No.2。
进一步的，所述单碱基延伸rs3740390多态性位点的引物序列为：
5’-TTTTTTGTAAATAGAGTGAAGTGCT-3’，即Seq ID No.3。
进一步的，还包括如下试剂：DEPC水、Quick Taq HS DyeMix、PCR产物纯化酶、单碱基延伸反应酶及相应缓冲液和单碱基延伸产物纯化酶。
本技术提供的AS3MT基因单核苷酸多态性位点检测试剂盒的使用方法，步骤如下：
步骤一、收集外周静脉血并从中提取基因组DNA；
步骤二、利用扩增rs3740390多态性位点的引物，以基因组DNA为模板进行AS3MT基因上rs3740390多态性位点的PCR扩增；
步骤三、对步骤二所得PCR扩增产物进行纯化；

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