基金项目：广东省科技计划项目(2008B030301142)；南方医科大学南方医院新业务新技术院级课题(2008009)。*通讯作者,E-m ai:l m
GNAS1基因T393C 多态性与特发性室性心律失常的相关分析
谭珍妮，赖文岩，邓 伟，孙少喜，罗苑苑，李 蘅，彭 健*
(南方医科大学南方医院，广州510515)
摘要：目的 分析G s 蛋白A 亚基基因(GNAS1)T 393C 单核苷酸多态性(SNP )与特发性室性心律失常的相关性。方法 分别选取特发性室性心律失常患者165例及健康对照162例，采用PCR-RFLP 分析GNAS1基因T393C 等位基因型及等位基因频率分布。结果 两组基因型频率分布均符合H ardy -W ei nberg 平衡(P 值分别为0.5454和0.6635)。T 393C 多态性等位基因型频率和等位基因频率在两组间比较具有显著性差异(P <0.01),CC 基因型及393C 等位基因的频率在病例组中显著增高。结论 GNA S1基因T 393C 多态性与特发性室性心律失常有相关性。
关键词：心律失常;GNA S1;T 393C ；多态性，单核苷酸
中图分类号:R 541.7  文献标志码:A  文章编号:1002-266X (2010)20-0007-03
Associ a ti o n bet w een T393C pol y mor phi s m of GNAS1gene and i d i o pathi c ventri c ul a r arrhyt h m i a s
TAN Zhen-ni ,LAI W en-yan,DENG W ei ,SU N Shao -x i ,LUO Yuan-yuan,LI H eng,PE NG J ian
(N anfang H os p ital ,Southern M e d ical Universit y ,Guangzhou 510515,P.R.Ch i n a)
Abstrac t :Ob jec ti ve  To deter m i ne t he relativ it y bet ween T 393C si ng le nuc leo ti de po ly m orph i s m (S N P )of GNAS1wh ich encodes the G s pro te i n A -subun it (G s A )and idi opathic ven tricu lar arrhy th m i as .M ethod s  A to tal o f 165subjects w it h i d i opathic ventricu l a r a rrhy t hm ias w ere se l ected as case g roup and 162hea lt hy subjects as contro l group .T he T393C po l y m o rph i s m o fGNA S1was deter m i ned by PCR-RFLP .R esu lts  A ll observed genetype frequenc i es i n both case group and contro l group w ere i n H ardy -W e i nbe rg equ ili bri um (P =0.5454,0.6635).T he d iffe rences of g enetype frequenc i es and a lle l e frequencies bet ween t wo g roups w ere si gn ifi cant (P <0.01),the CC genetype as w ell as the 393C a llele w ere si gnificantly m ore co mmon i n the case group than i n the contro l g roup .Conc l u si on  T he T393C po l ymo rph is m o f GNAS1m ay be assoc i ated w ith idiopath i c ventr i cular arrhyth m i as .
K ey word s :a rrhy t hm ias ;GNA S1;T 393C ;po l ymo rph is m,si ng l e nuc leo ti de
特发性室性心律失常包括特发性室性心动过速(VT)和频发室性早搏(VPCs)，目前认为，其发生可能机制是儿茶酚胺介导的延迟后除极和c A M P 刺激介导的触发活动[1,2]
。人Gs 蛋白A 亚基基因(GNAS1)生理作用主要是激活腺苷酸环化酶(AC )，通过腺苷酸环化酶)环磷腺苷)蛋白激酶A (AC -c AMP -PKA)传导通路发挥生理作用。其第5号外显子处存在一个沉默单核苷酸突变，使编码异亮氨酸密码子ATT 突变成ATC(T393C)，从而引起AC 活性增强
[3,4]
。我们从c AMP 信号传导通路出发，大胆假设
GNAS1多态性与特发性室性心律失常相关。1 资料与方法
1.1 临床资料 选择2007年9月~2009年8月收集的华南地区汉族人，病例组165例，其中男76例、女89例，年龄18~77(48.2?13.9)岁,VPC s 数目为1093~56173(11797.3?10891.9)个/24h ,VT 发作阵数为0~670(10.9?74.2)阵/24h 。纳入标准:¹静息12导心电图、24h 动态心电图、心电遥测或运动应力测试均提示有频发VPCs ，单源呈二联律或三联律，伴或不伴有短阵VT ;º经心电图、胸片、经胸超声心动图、肝肾功能、心肌酶谱、MRI 和冠脉造影等检查排除了高血压、冠心病、心肌病、瓣膜病等器质性心脏病;»排除了Brudaga 综合征、长QT 综合征、短QT 综合征等遗传性心律失常;¼排除了电解质紊
7
山东医药2010年第50卷第20期
乱和代谢性疾病，如风湿性关节炎、糖尿病等。健康对照组162例，其中男77例、女85例，年龄18~69 (47.9?12.2)岁。纳入标准：无室性心律失常亦符合以上排除标准。两组间在性别、年龄、以及吸烟、饮酒等生活习惯方面差异无显著性。
1.2研究方法取外周血5m,l以0.5mmo l的EDTA抗凝，采用酚)氯仿法提取外周血白细胞脱氧核苷酸(DNA),-20e保存。采用紫外分光光度法测定样本DNA浓度，稀释备用。采用聚合酶链式反应(PCR)扩增GNAS1基因片段，上游引物[5]为: 5c-CTCCTAACTGACATGGTGCAA-3c，下游引物为: 5c-TAAGGCCACACAAGTCGGGGT-3c,PCR反应体系(25L l):
2.5L l10@bu ffer,2.5L l d NTP(2.5 mmo l)，上游引物(20L mo l/L)和下游引物(20 L m o l/L)各0.5L,l2L l基因组DNA(0.25L g),5 U/L TaqDNA聚合酶0.2L,l加去离子水16.8L l使体积至25L l。PCR循环参数:94e预变性5m i n, 94e变性45s,55e退火45s,72e延伸2m in，共循环35次，最后于72e继续延伸7m i n,2%琼脂糖凝胶电泳确定扩增基因片段。酶切反应体系(15 L l):PCR反应产物8L,l FokI(T a K a Ra大连公司) 5U，酶切缓冲液1.5L,l0.1%BSA1.5L,l加去离子水使体积至15L,l反应体系置于37e恒温水浴16h，反应终止后2%琼脂糖凝胶电泳分离酶切产物。选取初步确定了基因型的PCR产物，使用3730测序仪进行双向PC R产
物的测序反应(上海英俊公司)，验证GNAS1基因T393C位点多态性。
1.3统计学方法采用SPSS13.0统计软件，计算两组间基因型频率和等位基因频率，确定其符合H ar dy-W ei n berg平衡，计量资料用
x?s表示，计数资料分析采用V2检验，以P[0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1等位基因特异性PC R产物的电泳及测序结果两组的DNA标本经PC R扩增，产物为345bp的片段。此片段经限制性内切酶FokI消化，产生3种基因型:Fok I++型(完全消化即CC基因型)，其酶切产物为259bp的片段;FokI--型(不能切开即TT基因型)，其酶切产物为345bp的片段;FokI+-型为上述259bp和345bp并存的杂合子，见图1。测序结果见图2。
2.2GNAS1基因T393C多态性分析结果见表1。
2.3H ardy-W einberg平衡检验病例组、对照组基因型频率分布均符合H ardy-W e i n ber g平衡(P值分别为0.5454、0.6635)
。
表1两组T393C多态性基因型频率及等位基因
频率比较[例(%)]
组别
基因型频率
TT TC CC
等位基因频率
T C
病例组45(27.3)90(54.5)30(18.2)180(54.5)150(45.5)对照组69(42.6)77(47.5)16(9.9)215(66.4)109(33.6) P值0.0060.002
3讨论
大量的临床观察发现，特发性室性心律失常在运动或异丙肾上腺素静点后易诱发,B阻滞剂、钙通道阻滞剂或腺苷可终止心动过速，其机制多认为与儿茶酚胺介导的延迟后除极和c AMP刺激所介导的触发活动有关。心率变异性研究分析提示，室性心律失常发作前交感与迷走神经张力平衡指数(LF/H F)明显增加。动物和临床实验[6,7]均证实交感神经活动异常是特发性室性心律失常发生的重要机制。
G蛋白在受体)G蛋白)效应物信号传导通路上起着重要的中介作用。交感神经兴奋释放肾上腺素能神经递质，在心脏中主要与心肌细胞膜上的B肾上腺素能受体(B-AR)结合，活化的B-AR与Gs蛋白A亚基偶联，一方面活化AC，使细胞内c AMP增多，激活的第二信使c AMP将激活蛋白激酶A(即AC-c AMP-P KA 传导通路)，导致慢Ca2+内流，同时促进钙从肌浆网中释放；另一方面可以通过c AMP或直接作用于电压依赖性L型钙离子通道，增加其开放频率，从而增加通过
8
山东医药2010年第50卷第20期
基因多态性
肌膜T管进入细胞内的钙离子内流,N a+-Ca2+交换导致一过性内向电流和相应延迟后除极。这正是触发特发室性心律失常的电生理机制。故我们推断GNAS1基因多态性可能与特发性室性心律失常的发生有关。
本研究采用病例)对照的研究方法，发现T393C 多态性基因型频率和等位基因频率分布在两组间差异显著，病例组中CC基因型和393C等位基因频率明显增高，提示GNAS1基因T393C多态性与特发性室性心律失常有关。可能解释是，编码异亮氨酸密码子ATT 突变成ATC后，导致Gs蛋白功能发生改变，使AC活性增强，从而导致c AMP含量增高和增强蛋白激酶A 活性，促进延迟后除极和触发活动，与M ao等[4]报道一致。有关GNAS1T393C多态性对特发性室性心律失常影响的研究资料尚很缺乏，要阐明这种机制仍需深入研究。我们将进一步研究GNAS1基因T393C多态性与性别、B受体阻滞剂药物疗效等之间的关系，为临床药物提供科学依据。
参考文献:
[1]I wai S,C a n tillon DJ,K m i RJ,et a.l R i ght and l eft ven t ricular outfl o w
tract tac hycard i as:evi dence for a co mm on el ectrophys i ol ogicm echanis m [J].J Card i ovasc E l ectrophys i o,l2006,17(10):1052-1058.[2]Ya m a w ake N,N i sh i zak iM,H ayash iT,et a.l Au tono m i c and phar-
m acological responses of i d iopat h ic ventricu l ar tachycard i a arising from t he l eft ventricu l ar outfl o w tract[J].J C ard i ovasc E l ectrophys-
i o,l2007,18(11):1161-1166.
[3]JiaH,H ingoran iAD,Shar m a P,et a.l Associati on of the G(s)a-l
pha gene w it h essen ti al hypert en sion and res ponse t o beta-b lockade [J].H ypertens i on,1999,34(1):8-14.
[4]M ao Y M,L i u Z Q,C hen BL,et a.l E ffect of393T>C pol y m or-
ph is m of GNAS1gene on dobuta m i ne res ponse i n C hinese healthy sub jects[J].J C li n Phar m aco,l2009,49(8):929-936.
[5]Y asudaK,M ats unaga T,M oritan iT,et a.l T393C po l y m orph is m of
GNAS1associated w ith t he au t ono m i c nervous s yste m i n young,
h ealt hy Japanes e s ub j ects[J].C li n Exp Phar m acolPhysi o,l2004,
31(9):597-601.
[6]Zh ou J,Sch erlag BJ,Y a m anas h iW,et a.l Experi m en t al m odel
si m u l ati ng ri ght ven tri cu lar outfl o w tract tachycard i a:a novel tech-n i que to i n iti ate RVOT-VT[
J].J Card i ovas c E lectrophysio,l 2006,17(7):771-775.
[7]H as de m i r C,A lp A,Ayd i n M,et a.l Hum an m odel si m ulati ng ri ght
ven tri cu l ar outfl o w tract tachycard ia by h i gh-frequency sti m u l ation i n the left pul m onary artery:au tono m ics and i d i opat h ic ventricu l ar ar-rhyt hm ias[J].J C ard i ovasc E l ectrophysio,l2009,20(7):759-763.
(收稿日期:2009-12-26)
#个案报告#
散发型Creutzfel d-t Jakob病1例
苏学宁
(天津市第五中心医院，天津300450)
患者男,76岁，因/左肢无力1个月伴间断抽搐20d0于2007年8月29日入院。入院前1个月开始出现左侧肢体活动不利，脑M R I示白质稀疏、右基底节腔隙灶，予抗血小板聚集等无好转。入院前20d出现左
上肢阵发性强直，每次发作持续约3m in，发作加重渐扩展至左下肢，伴阵发幻视。入院查体：神志清，反应迟钝，记忆力及计算力下降，言语欠清晰，左肢肌力Ô+级，右肢肌力Õ级，双侧Barbinsk i征阴性。清醒脑电图示右中额、右中央、右顶频发高波幅尖慢波。拟诊脑梗死、部分性运动性癫痫发作。予卡马西平0.2 g口服,2次/d，左肢抽搐减轻。入院10d后复查M R I发现右岛叶、左额极皮质表面绸带状高信号。后认知障碍迅速加重，出现无动缄默，四肢肌张力高。腰穿脑脊液常规、生化、抗酸、革兰及墨汁染未见异常。入院1个月后左口角、左手指阵发肌阵挛，复查脑电图示各导联每隔0.8~2s重复出现高波幅双侧同步周期性尖慢波(PS W C)，以右侧为著。入院50d后肌阵挛扩展至对侧，复查M R I发现FLA I R和T2W I示双侧尾状核、壳核对称性高信号，脑萎缩明显加重。诊断：散发型C reutzfeldt-Jakob病。于2008年2月3日因肺感染死亡。
讨论:Creutzfe l dt-Jakob病是病理性朊蛋白所致的海绵状脑病，临床分为散发型(s C J D)、遗传型、医源型和变异型, sCJ D占85%~90%。sCJ D每年发病率约为百万分之一，发病年龄多为60~80岁，无性别差异，多数进展迅速。初期可表现为注意力下降、淡漠、个性改变、记忆减退等。中期表现进行性痴呆，可伴视空间定向障碍、失语或失用、视觉失认或皮质盲、小脑性共济失调、锥体系(轻偏瘫、腱反射亢进、病理征阳性)和锥体外系(强直、震颤、舞蹈)表现等，约90%出现肌阵挛，可见于四肢和面部，开始为一侧，后来对侧亦出现，为皮质性肌阵挛，常与脑电图中的周期性放电相关，有时同步出现，为此病特征性表现。晚期出现无动缄默，多因继发感染死亡。2/3的s CJ D病例脑电图出现下述变化：早期为
弥漫性减慢；中期和晚期在弥漫性慢波背景上每隔0.5~ 2.0s重复出现的PS W C为此病特征性改变。CT和M R I可见逐渐进展的脑萎缩,MR I的DW I、FLA I R、T2W I还可见尾状核、壳核和(或)大脑皮质的异常高信号，在疾病早期常不对称，随病程进展趋于对称；大脑皮质受累时DW I和FLA I R 优于其他序列，早期表现为皮质表面绸带状高信号。DW I高信号最早出现在起病后3周。脑脊液14-3-3蛋白可显著升高，但14-3-3蛋白阴性不能排除sCJ D，阳性时需除外脑炎、脑梗死、多发性硬化等。以对症和支持为主。提示临床工作中对有快速认知功能下降、癫痫发作、局灶神经功能缺损的患者应注意sCJ D的可能，及时检查并隔期复查脑M R I(尤其DW I)和脑电图，以便早期诊断。
9
山东医药2010年第50卷第20期

版权声明：本站内容均来自互联网，仅供演示用，请勿用于商业和其他非法用途。如果侵犯了您的权益请与我们联系QQ:729038198，我们将在24小时内删除。