什么是ATP检测?
A TP冷光仪(A TP luminometer)主要是用A TP来进行微生物总含量的检测,所以它不再像传统细菌及微生物培养方法(microbial culture)一般要数天至2星期的时间才能得知细菌的总数。
目前A TP生物冷光反应技术已广泛地应用在各项产业。英国医院及世界各地的酒店(如Shangri-La,Grand Hyatt)、主题公园(如迪士尼公园)及食物加工单位(如可口可乐,北京奥组委)均被普及使用,确保环境不受肉眼见不到的微生物所污染。我国卫生部门早于2005年已把它用作卫生巡查,确保食物加工厂环境符合卫生标准,及时停工以避免大规模食物中毒。
什么是ATP?
Adenosine Triphosphate(三磷酸腺苷,A TP)是一种存在于地球上所有动物、植物和微生物细胞中的物质。当A TP分解为ADP及AMP时会释放出大量能量,这些能量足以推动细胞內所有化学性及物理性活动。正因如此,任何有“生命”的东西都有A TP,并提供细胞新陈代谢及活动所需要的能量。当A TP释放了能量并分解为ADP或AMP后,它不会消失,反而可以凭代谢葡萄糖或脂肪所释放的能量重新结合成A TP。一个葡萄糖的能量可以“叉起”36个ADP成为36个A TP。鉴于A TP的循环使用十分有效率,任何细胞內只有极少量的A TP。同时为令化学反应更稳定,细胞內A TP浓度亦十分固定。研究显示,人体一天会循环分解及再合A TP2000~3000次之多。
A TP存在于所有的生物体內,包括动物、植物、细菌、酵母和真菌等。A TP检测原理
是利用萤火虫发光原理,若有A TP与荧光素接触,荧光素会发出荧光,光子的数量与A TP 量成正比。所以其发光反应的强弱可用于计算A TP数量。同时因细胞的A TP含量比较固定,我们于是可以推敲出细菌总量。
什么是ATP冷光反应技术?
A TP生物冷光反应技术(A TP bioluminescence technique)是一种快速检测方法,用以检测A TP的含量。此法原为美国太空总署于1960年代发展出来的技术(Griffiths,1996),其反应原理与萤火虫发光反应相同,在荧光素(luc iferin)与荧光素酶(luciferase)存在下,A TP与它们作用产生光,而途中能
量完全成光子而沒发出热能,所以又叫生物冷光(Kricka,1988)。
A TP生物发光技术为表面卫生检测提供了快速、精确的检测方法。A TP检测能在1分钟內得到结果,因而在有需要的情况下可以迅速采取纠正措施。A TP检测的是有机物(包括细菌)而不仅仅是细菌,这就意味着A TP检测能对物体表面的清洁度提供更加全面的评定。在实际使用中,A TP检测棒含有荧光素酶和荧光素,通过拭子涂抹表面来采集含有A TP的有机物,并以溶剂破坏细胞壁以释放出胞內的A TP。在A TP的存在下,荧光素酶和荧光素进行反应并产生光子,光子量通过感光仪进行定量检测,根据检测值(相对光单位,RLU)对物体表面的污染物量进行判断。通过与事先设定的临界值进行对比,可以很快知道表面清洁的是否合格,不合格时可以迅速采取相应的纠正措施。
ATP + Luciferin& Luciferase ------化学反应-------> AMP + PP + 冷光
美国太空总署当初发展此项技术的目的,是希望能用以检测外太空是否有生命物质存在,然而近来生物冷光技术却在食品与医药领域中被使用。
A TP存在于地球上的各类生物体中(当然包括了微生物体內)。以细菌而言,一个菌体內A TP含量约为10-18 M;真菌类菌体因体积较大,一个细胞则含10-15~10-16 M。Hygiena System SURE Plus A TP测量仪所量度的数值是相对吸光值(relative light unit,RLU)。RLU 值与A TP数量是成正比例的,能表示A TP总含量的高低。因细菌每一个菌体內A TP含量接
近不变,约为10-18 M,所以应用此种技术检测细菌数时,可以凭RLU检测结果的多寡来藉此反推微生物含量。当用于评估微生物的总数时,不用跟传统方法般要培养微生物耗时7~10天,而是即时可知结果。
同时,由于食物多直接来自动植物,所以食品中亦有大量的A TP。RLU可以在饮食业中用于测量食物处理间(food processing unit)所受污染的程度。污染物包括了细菌、微菌和其他微生物,还包括食物与食物残渣。于是,RLU可成为测量清洁度的量化单位。
目前A TP生物冷光仪检测A TP含量的极限一般约是10-12 M,Hygiena System SURE Plus A TP测量仪检测A TP含量的极限低达10-15 M(1 femtomole)。換言之,欲检测细菌类的微生物,菌数一般需超过1,000,000 CFU,其他品牌的A TP机才能检出(山本,1997),而Hygiena System SURE Plus A TP测
量仪只须1000 CFU便能被触发。也即是说Hygiena System SURE Plus比其他同类仪器敏感1000倍。
1000颗细菌是多少呢?即使表面洁净但未完全消毒的表面,每10×10 cm的面积一般有高达100,000颗细菌。1000颗细菌是十分十分干净。
医疗机构中表面卫生的重要性
近年来医院內获得性感染(Hospital Acquired Infection,HAI)的增多已经引起越来越多人的关注。英国国家审计局(NAO)统计显示约9%的病人属于HAI,相当于全国每年发生100,000人次的感染(NAO,2000)。英国国家卫生系统(NHS)每年在HAI上的花費约10亿英镑,占住院病人預算的9.1%。据估计HAI是做成每年5000人死亡的主要原因,同时也与另外至少15,000个死亡病例有关。
从研究得知任何物件若摆放得过于靠近已受到MRSA细菌感染的病人,它们的表面通常会被MRSA细菌污染(Boyce et al.,1997)。这些病菌就是凭着从一个表面转移到另一个表面的能力,去感染其他病人。所以,除非医院有一个十分有效的方法作出彻底清洁,令所有容易被人接触到的物件表面都免于被细菌寄居甚至繁殖,否则微生物在医院內的传播链并不会断开,细菌依旧可以凭此途径蔓延。
同时,众多研究报告(Dancer,2002;Engelhart et al.,Rampling et al.,2001;Talon,1999)强调医院清洁度不合格是院內获得性感染增多的主要原因。英国政府卫生局也因此要求医院进一步提高卫生
标准。公共卫生实验室服务组织(PHLS)亦发表声明,严正指出若医院坚持执行严谨的感染控制程序,可以消除至少30%的院內获得性感染。(NAO 2000;PHLS,1997)。
清洁的目的不仅是去除表面的污垢,更要清走微生物及其残骸。如果清洁工序不是十分有效,那么随着时间的推移,这些污垢会堆积、进而吸引微生物的嵌入,形成生物膜(Biofilm)。因秽物会降低清洁剂和消毒剂的表面活性,结果不但令清洁变得更加困难,亦因秽物多属有机物质,它们也为细菌的生存提供了营养和良好的环境。所以清洁不彻底是导致细菌繁殖的直接原因。结果就令院內获得性感染不易受控制。
物体表面需要适当的清洗才可保持清洁,但如何确定清洗过的表面确实是洁净却很困难。
用肉眼来确定清洁效果是非常之不可靠,因为肉眼看不見细菌,而看似清洁的表面往往存在着大量的微生物。一项最近的研究显示,82%的病房表面清洁经肉眼评定是合格,但实际上这些看似合格的表面仅有30%通过了微生物检测,更只有24%通过了A TP快速检测(Griffith et al.,2000)。由此可見,以往单凭肉眼来评定清洁效果绝不可靠。
传统微生物培养方法是测定物体表面微生物存在与否的一个十分敏感之方法。然而它需要最少1~2天的时间方能得到结果,而且微生物培养并不能全面揭示表面清洁度状况,它
只显示物体表面是否有能繁殖的微生物存在。同时,用24小时或更长的时间才得到检测结果意味着这种检测方法不能快速指导纠正无效或不彻底的清洁。而在这一期间內,污染还会扩散,细菌也会继续增殖。由于培养只能检测有沒有能够于实验室中分裂繁殖的微生物,因此它存在着一定的缺陷。要知道够在实验室中分裂繁殖的细菌只占所有活体细菌的千分之一。另外,即使无菌体液(如血液)也会充满病毒,传统的微生物培养方法并不能检出病毒。当然,撇除血液中有可能含有病毒,血液本身同时也是细菌生长繁殖的理想培养基。
应用范围
●医院,尤其是隔离病房及手术室Hospital,especially isolation ward and operation
theatre
●食物加工厂Food processing facilities
●卫生评级及监察机构Hygiene surveillence
●酒店及高级食肆Hotel and High-end restaurant
与其它评估方法相比,ATP即时监控具有一些明显优势:
●即时监控:荧光素酶+荧光素+A TP反应为即时反应,读数可以在数秒之內得到。
这样就可以立即采取纠正措施。
●可靠性和一致性:A TP荧光仪可以确定出任何微生物残渣的存在。而且由于它使用
Hygiena独有的液体稳定试剂,因而检测结果准确、重複性好,为评估提供了可靠
依据。
●危险性评估:A TP荧光仪可以检测到已经受微生物孳生的表面,此潜在高危区域须
加强清洁消毒以防止发生交叉污染的地方。
●使用简便:非专业技术人员也可轻松使用A TP荧光仪、测试剂拭子和软件。
●结果易于判读:标本检测结果以相对光单位(RLU)来显示,它代表了污染物产生
的光的总量。RLU读数越小表示表面越洁净。1 RLU约等于1飞摩尔(femtomole,1千万分之一摩尔)的A TP,大约是1000株菌体。检测结果可以直接与合格(Pass)/不合格(Fail)数值进行比较。略微超出合格值的则显示警告符号(﹗)。
检测项目
●医护人员手部清洁检测
●器械清洁检测
●工作环境清洁检测
选择检测的表面
最好的方式是检测每个物体的表面,但这样太耗时间。所以通常的做法是选择关键检测部位。关键部位是指最有可能传播病菌的区域。由于存在于这些表面的细菌是引起院內感染的主要原因之一,因而应重点关注。判断检测表面是否重要主要取決于两个因素:
●该部位怎样被污染?
●如果该部位被污染后,它会在细菌传播的过程中起到什么样的作用?
如果一个表面虽然很容易被污染,但却很难被触及到,那么它就比那些受污染可能性较小但却是经常被触及、且靠近病人的表面的物件感染风险还要低。从科研和现场实验得到的数据显示出最具危险性的地
方是频繁与手接触的表面,如门把手、厕所坐便器冲水池和废物箱盖。由于接触的频率很高,因而细菌在此积淀、寄居及繁殖的机会很高。其后也很容易由此附着于人手,这使得细菌很容易传播到更加广泛的区域及病人组別中。同样,诸如电话听筒和键盘等也属于关键部位。还有离病人越近的表面,它的危险度就越高。这些关键部位包括病人床架或用于调整病床位置的控制板等。最近的证据显示水龙头及水池也被细菌污染(Griffith et al.,2002)。这就意味着即使洗手比例能达到100%,洗手后还是存在着危险。因此很显然,保证这些设施免受污染是必须的。
另外,除考虑经手接触所导致的细菌传播外,若医院厨房设施的清洁未够彻底,更有可能引起医院內食物中毒。
设置限定值(临界值)
设定一个通用的关键部位洁净度限定值(临界值)(Critical Cleanliness)是不可能的。因为不同物体的表面其形状和功能各不相同,某一个表面要求达到的清洁度标准未必适合另一个表面(如內窥镜相对于门抦)。
关键部位的限定值(临界值)应通过从未经及已经适当清洁过的表面得到的RLU结果比较后才能设定。
假设
定值(临界值)设定应当反映出监测需达到的清洁目标。如果目标是确保适当的清洁,则限定值(临界值)应略高于“清洁”结果,例如16 RLU。如果目标是改进清洁度,则临界值应稍低于“清洁”结果,例如13 RLU。
常规审查
为评估病房的卫生状况,对关键部位应在清洁和干燥后才进行检测。如果检测结果未能通过临界值,则要立即采取纠正方法。这种质量控制方式就是常规审查。
继续改进
因为A TP生物发光技术能提供数字结果,对这些结果进行收集、划分可以进行“趋势分析"。这样做可以使用户看到隨时间变化的清洁效果。如果趋势显示卫生标准下降,就应程序测试员需要学什么
版权声明:本站内容均来自互联网,仅供演示用,请勿用于商业和其他非法用途。如果侵犯了您的权益请与我们联系QQ:729038198,我们将在24小时内删除。
发表评论