7.29IPTG诱导蛋白表达
37度IPTG诱导蛋白表达
1.将两个工程菌的种子液取1ml转接至50ml的离心管中,37度揺菌2到3小时,至OD 值为0.6,每个菌做3个重复。
2.将转接后的两种菌液IPTG诱导表达,分别设置3个浓度梯度,GLCNASE(周质空间表达蛋白)的浓度梯度分别为0.01mM(每10ml菌液加1M的IPTG0.1μL),0.05mM(每10ml菌液加1M的IPTG0.5μL),0.1mM(每10ml菌液加1M的IPTG1μL)。GLCNACASE(胞内表达蛋白)的浓度梯度分别为0.1 mM(每10ml菌液加1M的IPTG1μL),0.5mM(每10ml菌液加1M的IPTG5μL),1mM(每10ml菌液加1M的IPTG10μL).
3.每管加10mlLB培养基和10μl浓度为100mg/ml的AMP,使混合溶液的终浓度为
100μg/ml.GLCNACASE在30度揺菌4小时,6小时,8小时分别取样,GLCNASE分别揺菌2小时4小时6小时分别取样保存。
4.配制SDS_PAGE蛋白电泳用胶,存放在4度冰箱备用。
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