Liaoning Normal University
（2011届）
本科生毕业论文(设计)
题    目： 紫丁香ISSR-PCR反应体系优化研究
学    院： 生命科学学院
专    业： 生物技术
班级序号： 3班5号
学    号： 20111132010006
学生姓名： 韩莹莹
指导教师： 张恒庆
  2015年5月

reaction研究目  录
前言    - 3 -
1.材料与方法    - 5 -
1.1材料    - 5 -
1.1.1试验材料    - 5 -
1.1.2主要试剂与仪器    - 5 -
1.2方法    - 5 -
1.2.1紫丁香基因组DNA的提取及检测    - 5 -
1.2.2 ISSR-PCR反应体系    - 6 -
1.2.3 ISSR-PCR反应体系退火温度的确定    - 7 -
1.2.4 ISSR-PCR反应程序    - 7 -
1.2.5 ISSR-PCR产物的电泳检测    - 7 -
2.结果    - 8 -
2.1 DNA模板浓度对ISSR扩增效果的影响    - 8 -
2.2 TaqDNA聚合酶量对ISSR扩增效果的影响    - 9 -
2.3 Mg2+浓度对ISSR扩增效果的影响    - 9 -
2.4退火温度对ISSR扩增效果的影响    - 10 -
2.5dNTPs浓度对ISSR扩增效果的影响    - 11 -
2.6引物浓度对ISSR扩增效果的影响    - 12 -
3.分析与讨论    - 13 -
致      谢    - 15 -
参考文献    - 16 -
紫丁香ISSR-PCR反应体系优化研究
中文摘要:
以紫丁香为试验材料,采用改良CTAB法提取基因组DNA,为了获得最佳的紫丁香ISSR-PCR反应体系,本试验利用梯度试验对ISSR-PCR扩增结果有影响的dNTPs的浓度、TaqDNA聚合酶量、Mg2+浓度、退火温度、模板浓度、引物浓度共6个因子进行摸索和优化。确定了25μL时优化的反应体系:10×PCR buffer（不含Mg2+）2.5μL、模板DNA10ng/μL、dNTPs0.2 mmol/
L、Taq DNA聚合酶1.0U、引物0.6mmol/L(筛选自UBC set.9)、Mg2+2.0mmol/L、退火温度49℃。
关键词:紫丁香;ISSR-PCR;体系优化
Optimization of ISSR-PCR Reaction System of Natural Syringa oblate
Abstract:
Using Syringa oblata as material, genomic DNA of Syringa oblata was extracted by modified CTAB method,for optimizing ISSR-PCR reaction system of adient test was used to explore and optimize of ISSR-PCR system which included dNTPs concentration、TaqDNA polymerase amount、Mg2+ concentration、annealing temperature、DNA concentration、primer concentration.The twenty-five μL optimized reaction system contained 10×PCR buffer(without Mg2+)2.5μL、DNA 1.0 μL、dNTP 0.2 mmol/L、TaqDNA polymerase1.0U、primer0.6mmol/L(sift from UBC set.9)、Mg2+2.0mmol/L、annealing temperature49℃。
Key words:Syringa oblate ;ISSR-PCR;optimization of ISSR-PCR reaction
前言
    紫丁香（Syringa oblata）在植物分类学上属于被子植物门（Angiospermae）、双子叶植物纲（Dicotyledoneae）、捩花目（Contortae）、木犀科（Oleaceae）、丁香属（Syringa）,俗称丁香、华北紫丁香、百节、紫丁白、情客、龙梢子,原产我国华北地区。紫丁香在中国已有1000多年的栽培历史,其花小芬芳,紫、紫红或蓝,春季盛开时,硕大而艳丽的花序布满全株,观赏效果甚佳,是我国著名的观赏花木之一。同时,紫丁香还具有较高的药用价值,其鲜叶制成的溶液,对弗氏痢疾杆菌进行体外抑菌试验,效果较强,用于防治菌痢,既经济,又便于推广。因此,应当加强对其种质资源、遗传多样性的保护，实现可持续地开发利用。目前我国紫丁香的研究主要集中于栽培、生理等方面, 而分子生物学方面的研究少有报道,进行更为深入的基于分子生物学ISSR-PCR体系化的研究，有很广阔的应用空间和实际意义，可以广泛应用在如植物品种鉴定保护、遗传基因定位、作图等方面，对保护遗传多样性以及进化有深远影响。
    目前我国紫丁香的研究主要集中于栽培、生理等，如:有关紫丁香开花授粉的生物学特性、
花粉生活力和贮藏特性[4]以及花粉挥发性物质[5],国外有人对欧丁香进行过组培研究并在茎尖培养中获得成功,国内有李容等人进行过丁香杂交胚的组织培养研究,而分子生物学方面的研究少有报道,进行更为深入的基于分子生物学分子标记的研究，有很广阔的应用空间和实际意义，可以广泛应用在如植物品种鉴定保护、遗传基因定位、作图等方面，对保护遗传多样性以及进化有深远影响。
    分子标记的概念有广义和狭义之分，广义的分子标记是指可遗传的并可检测的DNA序列或蛋白质。狭义分子标记是指能反映生物个体或种间基因组中某种差异的特异性DNA片段。特异引物的PCR标记所用引物就是针对已知序列的DNA区段设计的，可在常规PCR复性温度下进行扩增，对基因组DNA的特定区域进行多态性分析。ISSR-PCR标记技术就是在此基础上通过SSR标记技术发展而来的。

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