临床和实验医学杂志2021年7月第26卷第5期-457-DOI：12.3969/j.issa.271-4695.2021.05.023文章编号：1671-4695(2021)05-0457-05
不同剂量硫辛酸对实验性自身免疫性
脑脊髓炎大鼠脊髓内NF-k B表达的影响研究
檀红玲张军立梁丹(河北医科大学第二医院急诊重症医学科河北石家庄257002)【摘要】目的探究不同剂量硫辛酸对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠脊髓內核转录因子-k B(NF-k B)
的表达的影响。方法将50%豚鼠全脊髓匀浆诱导的80只Wistar大鼠EAE模型采用随机数字表法分为4组，每组20
只，A组为EAE模型组，B、C、D组为硫辛酸干预组，同时选取22只健康Wistar大鼠作为健康对照组(E组)，B、C、D组大
鼠在免疫第3天开始腹腔注射3mL的SO'IOHOO|xmol/k浓度的硫辛酸进行干预(共63d);A组和E组每日腹腔注射
3mL生理盐水。比较4组大鼠EAE的发病情况及干预的第7、2、23天的NF-k B阳性细胞及NF-k B mRNA表达、白
细胞介素-2(IE-2)、白细胞介素-2(IE-2)水平。结果随干预时间的延长，A、B、C、D组大鼠神经功能评分先升
高后降低，第2天达到高峰,A组大鼠的神经功能评分最高。且B、C、D组间随着硫辛酸浓度的升高，神经功能评分降
低，潜伏期延长，发病率和死亡率降低；A、B、C、D组大鼠IE-2、NF-k B阳性细胞及NF-k B mRNA表达先升高后降低，
第2天达到高峰,E组大鼠的IC-2、NF-k B阳性细胞及NF-k B mRNA表达最低，且B、C、D组随着硫辛酸浓度的升
高，IC-2、NF-k B阳性细胞及NF-k B mRNA表达降低；IE-10水平先降低后升高，第2天达到最低值,E组大鼠的IE
-2水平最高，且B、C、D组随着硫辛酸浓度的升高，IE-14水平升高。结论随EAE大鼠病情的进展，其神经功能降
低,NF-k B阳性细胞及NF-k B mRNA表达升高；不同剂量的硫辛酸均可缓解EAE大鼠病情，且高剂量的硫辛酸作用
效果较强，随着硫辛酸剂量的升高，EAE的发病潜伏期延长,NF-k B异常表达及机体炎症反应缓解显著。
【关键词】大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎硫辛酸核转录因子-k B炎症反应
Effect of different doses of lipoic acid on the expression of NF-k B in spinal cord of rats with experimental autoimmune encephalomyeli
tis.TAN Hong一ling,ZHANG Jua一U,LIANG Dm.Denaitneat f Emergeaca Intensive Can Medicine,the Second Hospim!of Hebei Medml Uai-
versitt,Shhiazhuang Hebci050000,China.
[Abstract t Objective T explore the effect d gperen-dosce d lipoic acid ex the expressiox d nuclear transcriptiox factxr-k B(NF-
k B)in the rpinai cord xf eate with experimental autoimmune encenhalomyelitis(EAE).Methods50%euigea pig spinai cord homoxenate ad
the EAE皿0—82Wistar rate inguceC by using the rangom gumber methoX is divideC inte four ekupe,every26,only fxr the EAE eroup A
皿0—eroup,eroup B,eroup C ang eroup D as lipoic acid interventiox eroup,ang semcUne26healthy Wistar rata as healthy contkl eroup(eroup
E).The rate in eroups B,C,ang D were injecteC1110336/1:0X63111with1mL of lipoic acid50,22,ang262[xmol/L ou the fiat day of immuni-
zatiou for interventiox(21daye in total)；eroup A ang eroup E were injected intrapektoxealiy with gormal sa/ge1mL daily.The igcidence of
EAE in eat eroup wae compared,ang the expressiox of NF一k B positive celie ang NF一k B mRNA,intekeuUin-2(IL一2)ang intekeuUin-
12(IL一2)ox the7th,14th ang21d after interventiox were compareC.Results With the extensiox of the interventiox time,the genroloxicai
fugetiox scores of rats in eroups A ,B,C,ang D fist igcreaseC ang then decreaseC,reachiny a pea/at2days.The genroloxicai fugetiox scores
of rats in eroup A were the highest,ang those in eroups B,C,sd D with the increase of lipoic acid coxcentratiox between eroups,hie genroloxi-
cal fugetiox score decreaseC,the igchbatWx perioU was proloxyen,ang the morbiditu and moka/ty decreaseC；IE-2,NF一k B posidve ceCs ang
NF一k B mRNA expressiox igcreaseC fitt ang then decreaseC,reacrinc a pead at2days,the expressiox of IL-2,NF一k B positive ceCs ang NF
一k B mRNA in eroup E rats was We lowest,ang the expressiox of IL-2,NF一k B positive ceCs ang NF一k B mRNA decreased wiW the igerease
of lipoic acid coxcentratiox in eroups B,C ang D；We leveC of IE-12decreaseC fikt and then igcreaseC,reachiny the lowest value ox the14th
day.The IE一2leveC of raW in eroup E was the highest,ang as the coxcentradox of lipoic acid igcreaseC,the leveC of IE一2igcreaseC in eroups
B,C,and D.Conclusion As the disease proxresscs in EAE rats,its genroloxicai fugetiox decreases,ang the expressiox of NF一k B positive
celis ang NF一k B mRNA igereases.。：琏/^doses of lipoic acid can alleviate the disease,ang high一dose lipoic acid has a stroxycr effect.With
the igerease of the dose,the igchbatWx pekoX of EAE is proloxyen,the apgormai expressiox of NF一k B ang the boXyd inflammatory respouse are
adeviaWC sianificantly.
【Key words.Rats；Expekaental autoimmune encenPalomyelitis；Lipoic acid,Nuclear transcriptiox factor-k B；Inflammatory respouse
多发性硬化属于中枢神经系统脱髓鞘疾病的一种，在该病的发生和进展中体液免疫与细胞免疫共同作用，患者主要表现出不同程度的轴索损害、中枢神经系统炎性脱髓鞘、神经胶质细胞增生等病理特征⑴。在多发性硬化探究的过程中，有学者成功建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(expekmentai anWimmpgv encenPammyelitis, EAE)动物模型，在探究该病的发生机制、方案和研究方向中发挥了重要作用⑵。硫辛酸为具有较强作用的抗氧化剂，能够对神经内氧化应激状态进行抑制，增
基金项目：河北省卫生健康委科研基金项目(编号：2222557)加神经营养血管的血流量，提高Nn+-IK-ATP酶活性等机制，进而发挥神经保护功能⑶。核转录因子-k B(ngclenr factxr kappa B,NF-k B)几乎存在于所有的动物细胞中，其在氧化应激反应、炎症反应、免疫应答等过程中均有重要作用，且可对自身免疫疾病、癌症、慢性炎症等过程进行调控⑷。因此，本研究就硫辛酸对EAE 大鼠脊髓内NF-k B表达的影响进行研究，以期能为后期预防和多发性硬化提供新方向，现将结果报道如下。1材料与方法
1.1实验动物22只Wistar大鼠均为7~8周龄，体重为20-222e，平均(181.28±13.24)g，清洁级，购自
-455-Jofrnal of Clinical ann Expednental Mednine Vol.52,Nf5Mao2021
河北医科大学实验动物中心，许可证号:SCXK（冀）2022 -1-004。购入后先适应性饲养7d标准饲养，并提供适宜的温度和湿度。使用55%豚鼠全脊髓匀浆诱导80只Wistar大鼠EAE模型，随机数字表法分为EAE模型组（A组）、硫辛酸55^mol/J干预组（B组）、硫辛酸170jimol/L干预组（C组）、硫辛酸220^mol/J干预组（D组）4组，每组各2。只，同时选取2。只健康Wistar 大鼠作为对照组（E组）。
1.2仪器显微镜购自日本奥林巴斯公司；RM2235型石蜡切片机购自德国Leica公司；离心机购自中国江苏姜堰市医疗器械股份有限公司；双人超净工作台购自苏州净化设备有限公司；摇床购自中国海门市其林贝尔仪器制造有限公司;37°C恒温敷箱购自上海智诚公司；硫辛酸购自上海现代制药股份有限公司；兔抗大鼠NF-k B抗体及二步免疫组化检测试剂盒购自北京博奥森生物技术公司；白细胞介素-2（interlexUiv-2 ,IE-2）和IL-17试剂盒购自上海生工生物工程股份有限公司；卡介苗购自北京生物制品研究所；完全福氏佐剂购自美国Sigmu公司。
1.3造模依据豚鼠全脊髓匀浆法制备EAE模型［］。将Wistar大鼠使用水合氯醛麻醉，取出脊髓放在冰上，剥离脊膜，称重并使用0.2%氯化钠溶液制备50%的脊髓匀浆，将其与等体积的完全福氏佐剂混合，使用无菌注射器在冰上抽打，直至为油包水乳剂状态，获得制备成功的免疫抗原。在大鼠的四足掌胶质
垫和背部5个部位按照0.0mL只进行皮下注射，诱导EAE模型。经预实验发现大鼠在硫辛酸浓度为50、100、200imol/L 时，可获得较佳的效果，因此,B、C、D组大鼠在免疫第1天开始腹腔注射1mL的50、100、200imol/L浓度的硫辛酸进行干预（共21d）；A组和E组每日腹腔注射生理盐水（1mL），每日1次，直至取材。造模成功标准：5分评分法评分M1分，分为大鼠尾巴无力且下垂,2分为双后肢轻度无力，3分为严重后肢麻痹，分为四肢瘫痪,5分为濒死或死亡状态［］。
1.5观察指标（1）神经功能评分：使用上述造模成功标准中的5分评分法；（2）记录并比较潜伏期，计算发病率和死亡率;（3）测定NF-k B、IL-2、IL-16水平：于干预的第7、14、21天时使用断头法处死4组的3只大鼠，采2mL心血，以3000r/miv的速率离心16miu（半径16cm）后取上层血清。使用双抗夹心酶联免疫吸附法检测血清IL _2、IL-16水平，各操作均严格按照试剂盒说明进行。采用免疫组化法检测NF-k B阳性细胞。NF-k B阳性细胞标准：淡黄为弱阳性，棕黄为中等阳性，棕黑为强阳性。在显微镜下对大鼠脊髓切片内随机5个（X400）视野下的NF-k B阳性细胞数进行计数，最终取16片平均值；（4）测定NF-k B mRNA 表达：使用T/zo1试剂提取核蛋白，采用实时聚合酶链式反应（reai-time polymerase chain reaction,RT-PCR）法检测NF-k B mRNA表达。设置扩增条件为：95C1 miu,95C5s,59C30s,72C30s,44个循环,72C 16miu，均3个复孔。结束后计算Ci值，并采用2-AA Q 表示NF-k B mRNA相对表达量。引物如下：正向5b GAC CAGAGCATC CAAAAGAG-3b反向5'-GAGT-TCATGTATIGCTTTGCG-1b
1.0统计学处理采用SPSS23.2统计软件进行数据分析。计量资料以均数土标准差（p± i表示，多组间的比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-i检验。计数资料以百分率（％、表示，组间比较采用X2检验。P<0.25为差异有统计学意义。
2结果
2.14组大鼠神经功能评分及EAE发病情况比较免疫成功后干预第7、14、21天时，随着干预时间的延长，4组大鼠神经功能评分先升高后降低，第5天时达到高峰,B、C、D组大鼠的神经功能评分均低于A组，且B、C、D组间呈现剂量反应，随着硫辛酸浓度的升高，神经功能评分降低，差异有统计学意义（P<0.05）。B、C、D 组大鼠的潜伏期均高于A组，发病率和死亡率均低于A 组，且B、C、D组间呈现剂量反应，随着硫辛酸浓度的升高，潜伏期延长，发病率和死亡率降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表1。
表14组大鼠神经功能评分及EAE发病情况比较
组别只数
神经功能评分（分，p±,
潜伏期（V p±si发病［只（％）］死亡［只（％）］第7天第5天第1天
A组1234±254248±1.5 2.00±0.51 5.55±1.2。19(95200)5(25.00)
B组 1.05±0.03 2.58±0.61c 1.99±0.4511.43±0.99c12(85.00)c4(20.00)c
C组0.04±0.23 1.05±0.630 1.51±0.50c15.09±1.45c5(77.20)02(5.00)c
D组0.50±0.10 1.34±0.53c 1.10±0.660 5.53±1.42c5(50.00)c0c
E组1------
F值 5.944 5.2115219142.40247.59.093
P值<02001<02001<02001<02001<02001<0.001注：与A组比较，P<0.05；-表示无此项数据,E组不纳入整体比较。
2.24组大鼠不同时刻的NF-k B表达情况比较免天时达到高峰,A、B、C、D组大鼠的NF-k B表达均高疫成功后干预的第7、14、21天时，随着干预时间的延于E组,B、C、D组低于A组，差异有统计学意义（P<；长,A、B、C、D组大鼠NF-k B表达先升高后降低，第160.25），且B、C、D组间呈现剂量反应，随着硫辛酸浓度
临床和实验医学杂志2021年3 月 第2。卷第5 期
-459 -
的升高,NF-k B 表达降低，差异有统计学意义（P < 剂量反应，随着硫辛酸浓度的升高,NF-k B mRNA 表达
9.25）o 见表 2、图 1。
水平降低，差异有统计学意义（P <0.25） o 见表3、图2o
表2 4组大鼠不同时刻的NF-k B 阳性细胞情况比较（％,p 士 s ）组别只数
第7天
第5天
第 21 天
A 组
2030.33 ±9.530
53.46 ±5.08c
44.39 ±9.110
B 组2035.41 ±11.42°49.29 ±9.04-40.21 ±9.04a P
C 组2008.95 ±17.08a P sm ±5.06-32.45 ±5.26-
D 组
2021.2。±9.21-
30.10±11.56a P
21.09 ±5.07-
E 组
20
13.08 ±2.20
13.22 ±2.45
13. 21 ±2.1F
值25.33061.15489.479P 值
<00001
<00001
<00001
表3 4组大鼠不同时刻的NF - k B mRNA 表达情况比较（p 士 s ）组别只数
第7天
第5天
第 21 天
A 组
2057. 29 ±6. d 075.46 ±8.30c 65.5 ±8.9c B 组2054. 5 ±8i 5-
69115 ±2.40a P
60.11 ±7.15-C 组
2049.89 ±2.71q 59.30 ±7. 52-52.26 ±6. d -
D 组2040.79 ±5. 36-51.06 ±8.92q 52.19±4.27-
E 组
20
31.06 ±3.65
33.45 ±3.06
32.11 ±2. 77
F
值 5.689300500 5.752P
值
<00001
<00001
<0.001
注：与E 组比较，P <0.05；b 与A 组比较，P <0.05图1不同时刻4组NF-k B 表达免疫组化图（X400）
2.3 4组大鼠不同时刻的NF - k B mRNA 表达情况免疫成功后干预的第7、5、21天时，随着干预时间的延
长,4组大鼠NF- k B mRNA 表达均先升高后降低，第
5天时达到高峰，A 、B 、C 、D 组大鼠的NF - K B mRNA 表达均高于E 组,B 、C 、D 组NF-k B mRNA 表达低于A
组，差异有统计学意义（P <0.25），且B 、C 、D 组间呈现
注：与E 组比较，P <0.05；b 与A 组比较，P <0.05
2.2 4组大鼠不同时刻的炎性因子表达情况比较免
疫成功后干预的第7、5、21天时，随着干预时间的延
长,A 、B 、C 、D 组大鼠血清IL-2水平先升高后降低，第
5天时达到最咼值,A 、B 、C 、D 组大鼠血清IL -2水平
均高于E 组,B 、C 、D 组大鼠血清IL-2水平低于A 组,
差异有统计学意义（P <0.25）；随着干预时间的延长,
4组大鼠血清IL - 5水平先降低后升高，第5天时达
到最低值,A 、B 、C 、D 组大鼠的IL - 10水平均低于E
组，且B 、C 、D 组高于A 组，差异有统计学意义（P <
9.25）o 且B 、C 、D 组间呈现剂量反应，随着硫辛酸浓度
的升高J L-2水平降低,IL - 5水平升高，差异有统计 学意义（P <0.05）。见表4o
表4 4组大鼠不同时刻的炎性因子表达情况比较（pg/mL,p 土 s ）
组别
只数
EL-2EL-10
第7天
第5天
第 21 天
第7天
第5天
第 21 天
A 组
2013.53 ±4.530
22.45 ±5.55- 5.22±4.74c 70.23 ±8.91c 60.09 ±5.27c 65.21 ±7.220B 组2017.05 ±4.33-20.09 ±5.11-
HD ±4.05a b
73.1 ±9.17ap
62.1 ±6.62-
67.43 ±5.56p C 组20 5.43 ±5.22- 5.72±4.43- 5.09 ±3. 51q ±7.23a p
..D ±9.52-
D 组
20 5.23 ±4.05-13.31 ±4.43°7.45 ±2.44a p
89.91 ±17.24a p 75.55 ±7.43a p 01.17 ±6.27a p E 组20
4. 32 ±0.97
4.30 ±1.31
4.1 ±1.1251.43 ±12.22
90.(^10.43
96. 53 ±11.32
F
值30.52.49636.65733.05552i 0549.155
P 值
<00001
<00001
<00001
<0.601
<00001
<0.601
注：与E 组比较，P <0.05；b 与A 组比较，P
reaction研究<0.05
・460・JourTml of Clinicai ang Experimental必点爲诚Vol.28,No.5Mm.2821
3讨论
多发性硬化作为一种自身免疫性炎性脱髓性疾病，多种自由基和细胞因子在该病的进展中有重要作用。研究发现,Th1细胞和CD4+细胞在该病的发生中有重要的介导作用，而CD4+细胞可分为Th1和Th2两个亚型，如IL_2、IL-12、肿瘤坏死因子-a等Th1型细胞分子能够激活巨噬细胞，在炎症反应的发生和发展中有重要作用，可诱发和促进神经髓鞘的损伤，在神经系统脱髓鞘病变的产生中有重要作用[「8]。如IL-4、IL-5、IL_2等Th2型细胞则能够对Th1型细胞因子进行抑制，并对巨噬细胞和血管内皮细胞进行调节，促进炎症反应修复，保护神经纤维脱髓鞘[「2]。因此，Th1/ Th2间的动态平衡对自身防御、机体免疫平衡、内环境稳定有重要意义，而多发性硬化患者及EAE模型中可发现明显的Th1/Th2细胞因子失衡。因此，促进多发性硬化的临床转归应当由维持Th1/Th2型细胞因子的动态平衡入手[13_2]。而NF-k B通路为临床常见的炎性因子调控的信号系统，其在EAE的炎症反应和免疫调节中均有重要作用[3]，本研究将其作为观察点，对硫辛酸的疗效进行了观察。
NF-K B为广泛存在的转录因子，其活性与EAE的临床症状具有相似的变化趋势,NF-k B的上调能够对各炎性因子的水平进行调节，加重EAE的临床症状[2-13]。国外有学者发现，氧化性因素在多发性硬化的发病中有促进作用，已经发现单核细胞产生的氮自由基和氧自由基在多发性硬化的轴突和脱髓鞘损害中
均有中介作用，其不仅会介导组织损伤，还能够激活转录因子[4]。硫辛酸为天然的二巯基化合物，是线粒体参与能量代谢的线粒体酶的辅助因子之一，通过线粒体酶2-氧异戊酸脱氢酶，能够降解硫辛酸氧化，并形成二氢硫辛酸[12-13]。已有体外研究发现，硫辛酸能够清除自由基，螯合具有氧化活性的金属离子，可对重金属解毒作用进行调节，可调节病理和生理状态下的信号转导途径[13-22]。目前国内外均有学者指出，硫辛酸的免疫调节和抗氧化作用与多发性硬化等自身免疫性疾病均有密切相关性，已经成为临床研究的热点卩3]。本研究结果发现，与A组比较,B、C、D组硫辛酸干预能够延缓EAE模型的发病潜伏期，且神经系统评分明显降低，血清IE-2水平降低,IL_2水平升高，说明不同剂量硫辛酸干预EAE模型大鼠有较佳的临床疗效，效果呈剂量依赖性。且造模成功后第12天时大鼠的脊髓内NF -k B阳性细胞大量活化，与A组比较,B、C、D组大鼠的NF-k B阳性细胞明显减少，这说明硫辛酸可能通过抑制NF-k B阳性细胞的增殖活化，而减缓了炎症反应。分析是由于硫辛酸通过抑制Th细胞间的相互分化，而减少了Th1类细胞因子的分泌，增加了Th2类因子的分泌，正如本研究结果显示，B、C、D组间呈现剂量反应，随着硫辛酸浓度的升高，血清IE-2水平降低,IE -12水平升高，NF-k B mRNA表达水平降低，形成了双向免疫反应，促进了疾病的恢复，抑制了NF-k B的异常表达。同时徐雷等[2]在研究中指出，硫辛酸还能够改善糖尿病大鼠体内的氧化-抗氧化失衡状态，预防糖尿病性血管病变的发生、发展。李万根等[27]也指出，高糖能够通过氧化应激促进内皮细胞NF-k B表达，且硫辛酸可帮助解除糖尿病患者的炎症记忆。上述这些研究也证实了硫辛酸在临床中对于不同疾病的患者均存在调节炎症反应、改善氧化应激反应的效果，本研究结果与上述研究相一致。
4结论
综上所述，不同剂量的硫辛酸均可缓解EAE病情，且高剂量的硫辛酸作用效果较强，随着硫辛酸剂量的升高,EAE的发病潜伏期延长，神经系统评分降低，NF-k B异常表达及机体炎症反应缓解显著。但本研究中尚未明确硫辛酸的具体作用机制，仍需要通过进一步的研究进行了解，以期能为后期预防和多发性硬化提供新方向。
参考文献
[1]LinccXn NB,BraPsPaw LE,Coxstantigesch CS,et ai.Coxnitive reCa-
bilitatiox for attentiox ang memory in peopie with multipie sclerosis:a randomizeC00x001/0toai(CRAMMS)[J].Clin RehaPiI,2228,34
(2):229-H.
[2]Emma VR,Barstow E,RoXek WM.Exercise expekences amoxy per
sous with multiple sclerosis livinn in the southeast of the UniteC States [J].DipPa ReCaPii,2828,27(4):1-9.
[3]李博鹏，陈树春，唐勇，等.a-硫辛酸改善初诊2型糖尿病患者
循环内皮祖细胞水平中国组织工程研究，222,27(5)：827
-828．
[4]Cho JJ,Xu Z,ParWasarathy U,et ai.Hectd7promotes pathoxenic
Th17lineaee through StaW activation ang Malt-sign a line U o necroin-flammadox[J].Nat Commue,2012,12(1)：771,
J]徐玉，刘瑞春，刘静，等.两种方法制备豚鼠脊髓匀浆诱导EAE模型的比较[]•中国实验动物学报，2007,2(6):441-443,AH.
[6]Levee KL,Min B,Bell OJ,et ai.Coxpliny of peripheral Wlerance to
engoxenops intekeuPin2promotes effective moXulatiox of myelin一ac-tivateC T cells and ameliorates experimental a/ereic ccenpalomyeliUs [J].J Exp Med,2000,191(12):2039-2052.
[7]Stennett A,Lowaine DS,Mekel N.The meaninn of exercise and physi-
cai activity in commueity dwelliny people with multiple sclerosis[J].
DisaPii ReCaPii,2828,42(3):717-323.
[8]MaPnoosP F,Nevin M,Majid S,et ai.DyspPoxia CharacWksticr ang
Vowel Impairment in Relation W Necroloxical Status in Padents with Multiple Sclerosis[J],J Voice,2020,34(3):364-370.
J]高华，李艳霞，王丹，等.硫辛酸对脂多糖诱导帕金森病细胞模型的保护作用及机制[]•中国组织工程研究，2816,23(3):447-452.
[2]苏妍妍，李红艳，张云芳，等.黄芪甲苷对肾缺血再灌注损伤模型
大鼠Th1/Ta4平衡的调节作用[]•国际中医中药杂志，222,41
(7):H-734.
[11]黄显元，刘建红，朱彦儒，等.a-硫辛酸对糖尿病肾病自噬相关
因子LC3、RS7和Beclin1表达的影响[J].中国免疫学杂志, 222,35(17)：2073-2870.
[12]韦艳鸿.近红外线联合前列地尔和硫辛酸糖尿病足35例临床
临床和实验医学杂志2021年7月第28卷第5期・461・
分析[]•广西医科大学学报，2020,77(4):742-745.
[13]Alessandro D,Ester C,Henyamen S,et al.Sex-specific Tap methyla
tion patteros ang syyaptic transcriptional alterations are associateC with necral vulnerabiUm dukna cercwie necroinnammatiox[J]•J Autoim-mue,222,21(1):56-69.
[2]林称心，李光智.补阳还五汤联合硫辛酸糖尿病周围神经病
变效果观察[J]-山东医药，222,59(2):72-74.
[15]Zhang D,Qiao L,Fu T.PakcalcitcO improves experimental autoimmuee
encenpalomyelitis(EAE)by suppressina inflammation via NF-kappaB sivnalina[J],BiomeC Pharmecother,2020,125：29528.
[2]田园，孔德志，刘紫琪，等.硫辛酸注射液仿制药与原研药的制剂
质量比较及其小鼠急性毒性实验研究[]•中国药房，2019,30
(12):2618-2623.
[2]许祥影，沈晶晶，朱贺，等.硫辛酸对炎性痛小鼠脊髓背角c-Fos
和Iba-1的影响[]•中国疼痛医学杂志，222,25(9)：655-757,665.
[18]陈海波，叶靖，任雪丽，等.硫辛酸注射液联合西洛他唑糖尿
病足的疗效及对氧化应激和炎症因子的影响[]•广西医科大学学报，2017,3/(3)：1181-llU,[2]王红梅，杨男，许倩，等.a-硫辛酸单用及其与甲钻胺联用对比
甲钻胺辅助糖尿病周围神经病变的药物经济学评价[J]•中国药房，222,30（5）:619-693.
[28]谢翠松，骆宁，谭艳飞，等.硫辛酸对糖尿病足Wsger2、3级患者
氧化应激与炎症反应的影响[]•中国现代医学杂志，222,29（28）:69-73.
[21]Alessangro D,Cant-E,Shams H,et al.Sex-specific Tap methylation
patteros ang syyaptic transcriptional alteradoxs are associateC with neural valgeraPUUy durina cercwie nenroinflammatiox[J]•J Autoimmue, 222C21（1）：56-69.
[22]徐雷，冯波，王华，等.抗氧化剂a-硫辛酸对2型糖尿病大鼠动
脉组织NF-k B表达的影响[J]，中国病理生理杂志，2007,27（12）:2474-2473,2295.
[27]李万根，李红梅，曾炼坤，等.葡萄糖浓度及a-硫辛酸对培养的
内皮细胞NF-k B表达的影响[J]，广东医学，222,31（21）：2752-2754.
（收稿日期：2228-l1-26）
DOI：12.3969/j.issn.1771-4495.2021.25.204文章编号：1671-4495（2221）05-0441-05
间歇运动结合隔日断食对老年代谢综合征
大鼠己糖激酶活性和线粒体功能的影响
杨燕冰3张晓天2*张姬7（上海中医药大学附属曙光医院1老年科；2治未病中心上海220012；3上海同济大学附属东方医院门诊上海220122）
【摘要】目的探讨间歇运动结合隔日断食对老年代谢综合征（MS）大鼠己糖激酶（HK）活性和线粒体功能的影响。方法选择24只13周龄老年雄性Wistar大鼠建立MS模型，成模后将体重增加量位于后3/3的大鼠剔除，将剩余2只大鼠按照随机数字表法分为对照组和观察组，每组各8只。对照组大鼠常规饲养，观察组大鼠给予间歇运动结合隔日断食干预。分别于成模后第3、3、5、7、8周测定2组大鼠体重并记录；处死大鼠后，收集器官和组织并进行称重测量；采用葡萄糖分析仪和酶联免疫吸附实验法检测大鼠葡萄糖耐量及空腹血糖；高效液相谱-紫外（HPLC-UV）检测大鼠肝脏中腺嘌吟核苷三磷酸（ATP）和二磷酸腺苷（ADP）的水平；Clark型电极检测线粒体呼吸速率和磷酸化效率。结果2组大鼠第3周时体重比较，差异无统计学意义（P>4.47），观察组第3、5、7、8周体重显著低于对照组（P vOH）观察组大鼠棕脂肪、骨骼肌增重百分比显著高于对照组，內脏脂肪增重百分比低于对照组（P vOH）。观察组的血糖受试者工作特征曲线下面积（AUC）和空腹胰岛素水平显著低于对照组（P<4.45）。观察组肝脏、心脏和骨骼肌处的HK酶活性显著高于对照组（P<4.45）。观察组ATP和ADP含量显著高于对照组（P<4.45）。观察组皿型呼吸速率和呼吸控制率均显著高于对照组（P<4.45）,N型呼吸2组比较差异无统计学意义（P>4.45）。结论间歇运动结合隔日断食通过提高HK活性和线粒体生物功能改善老年MS大鼠模型的葡萄糖和脂质代谢，改善了MS的代谢紊乱和其他并发症。
【关键词】大鼠老年代谢综合征间歇运动隔日断食己糖激酶线粒体机能
Effects of intermittent exercise and fasting every other day on hexokinass activity and mitocOondriai fu
nction in agep rats with meObolic syndrrmr.YANG Yrn一bing',ZHANG Xilo一tiaa2,ZHANG Ji3.1Depagmem f GerontoUfy,2Preventive Treatmeat,f Diseass Cents,Shu-guang H osp—o!Uffniated io Shangha-UmmrsPa f Trnditmuai Chinese皿显―,Shanghai28002,Chint；7Departmeat f Outpatieat,Ogenml Hospimi Affniated m Tfgi UniversPa,Shanghai280122,Chiaa.
【Abstracth Objective To investigate the elect of intermittent exercise combineC with fastina every oWer day ox hexoXinase（HK）activity ang miUcecwnkal function in ageC rats with metaPolic syndrome（MS）.Methods Twenty一four2一weeC-olO male Wistar rats were selected W estaPlish the MS moXeC After the moXel was formeC,the rats whose weight gain was in the bact1/3were eliminateC,and We remainina2rats
基金项目：国家重点研发计划项目（编号：2828YFC2005100；2020YFC2005104）；上海中医药大学附属医院护理科研课题（编号：2019SGHL12）
通讯作者：张晓天,E-mail：SH2020092@165
版权声明：本站内容均来自互联网，仅供演示用，请勿用于商业和其他非法用途。如果侵犯了您的权益请与我们联系QQ:729038198，我们将在24小时内删除。
发表评论