⼄肝五项检测
⼄肝五项检测（ELISA法）
⼀、检测⽬的：
⼄型肝炎病毒标志物(HBsAgHBsAb、HBeAg、HBeAb、HbcAb)检测。
⼆、测定原理：
分别采⽤双抗体（抗原）夹⼼法和竞争法。
HBsAg、HBsAb原理：采⽤单克隆抗-HBs(HbsAg)包被反应板，加⼊待测标本，同时加⼊多克隆抗-HBs-HRP(HBsAg-HRP)，当标本中存在HBsAg（HBsAb）时，该HBsAg （HBsAb）与包被抗- HBsAg（HBsAb）结合并与抗- HBsAg-HRP（HbsAb-HRP）结合形成抗- HBsAg（HBsAb）-抗- HBsAg-HRP（HBsAb-HRP）复合物，加⼊TMB底物产⽣显⾊反应，反之则⽆显⾊反应。
HBeAg原理：采⽤抗-HBe包被反应板，加⼊待测标本，同时加⼊抗—HBe-HRP，如待测样本中抗HBeAg时，就与包被抗-HBe、抗—HBe-HRP结合形成复合物，加⼊TMB 底物产⽣显⾊反应，反之则⽆显⾊反应。
HBeAb原理：采⽤抗-HBe、HBeAg包被反应板，加⼊待测标本，同时加⼊HBe-HRP，与抗原形成竞争结合，如待测样本中抗-HBe含量⾼，则抗—HBe-HRP与HBeAg结合少，加⼊TMB底物时显⾊淡，反之则显⾊深。
HBcAb原理：采⽤基因⼯程重组HbcAg包被反应板，加⼊待测标本，同时加⼊HBc-HRP，与抗原形成竞争结合，如待测样本中抗-HBc含量⾼，则抗—HBc-HRP与HBcAg 结合少，加⼊TMB底物时显⾊淡，反之则显⾊深。
三、操作步骤：
1、将试剂从冷藏室中取出，30分钟后平衡⾄室温⽅可开启使⽤。
2、⽤蒸馏⽔将PBST浓缩液20倍稀释，作为洗液。
3、将微孔条固定于⽀架上，按序编号。
4、按具体使⽤试剂盒说明书加样、孵育、洗板、显⾊。
9、⽤酶标仪读数，取波长450nm，先⽤空⽩调零，然后读取各孔OD值。
四、结果判断：
样品OD值／阴性对照平均OD ≥2.1，判断为阳性，否则为阴性。阴性对照OD值低于0.05作0.05计算，⾼于0.05按实际OD值计算。
五、注意事项：
1、冷藏环境中取出的试剂盒应在室温平衡30分钟后⽅可使⽤。
2、使⽤试剂前摇匀，并弃去1-2滴后垂直滴加。
3、结果判定必须在反应终⽌后10分钟内完成。
4、不同批号的试剂不可混⽤。
5、待测标本不可⽤NaN?防腐，如需稀释标本，请⽤⼩⽜⾎清稀释。
6、本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。
六、⽣物安全防护：
1、在检测前，所有标本均应视为“阳性”标本即⽣物危险品。
2、如操作中不慎洒落⾎液，要及时对污染台⾯消毒处理。
3、操作前⼀定要做好⾃⾝防护（穿⽩⼤⾐、带⼝罩、⽩帽、胶⽪⼿套）。
4、HBV对低温、⼲燥、紫外线、70%⼄醇均有耐受性。煮沸100℃10分钟、⾼压蒸汽灭菌121℃15分钟或⼲热160℃2⼩时均可灭活HBV。5-10g/L次氯酸钠30分钟，1：4000福尔马林37℃72⼩时，0.5%过氧⼄酸15分钟均可破坏其传染性。
七、临床意义：
⼄肝病毒⾎清标志物的临床意义
（即常说的⼄肝五项或称两对半）
序号 HBsAg 表⾯抗原抗-HBs HBsAb 表⾯抗体 HBeAg E抗原抗-HBe HBeAb E抗体抗-HBc HBcAg 核⼼抗体临床意义出现率9种常见模式
1 - - - - - 过去和现在未感染过HBV。 1-30%
2 - - - - + (1)既往感染未能测出抗-HBs；(2)恢复期HBsAg已消，抗-HBs尚未出现；(3)⽆症状HBsAg携带着。 5-10%
3 - - - + + (1)既往感染过HBV；(2)急性HBV感染恢复期； (3)少数标本仍有传染
性。①HBV感染已过；②抗HBs出现前的窗⼝期 2-10%乙肝检测结果是reactive
4 - + - - - (1)注射过⼄肝苗有免疫；(2)既往感染；③假阳性 1-6%
5 - + - + + 急性HBV感后康复。 0.5-5%
6 + - - - + (1)急性HBV感染；(2)慢性HBsAg携带者；(3)传染性弱。 10-15%
7 - + - - + 既往感染，仍有免疫⼒。HBV感染，恢复期。 5-15%
8 + - - + + (1)急性HBV感染趋向恢复；(2)慢性HBsAg携带者； (3)传染性弱。即俗称的“⼩三阳”。 5-10%
9 + - + - + 急性或慢性⼄型肝炎感染。提⽰HBV复制，传染强。即俗称的“⼤三阳”。 30-40%
16种少见模式
10 + - - - - (1)急性HBV感染早期，急性HBV感染潜伏期； (2)慢性HBV携带者，传染性弱。
11 + - - + - (1)慢性HBsAg携带者易转阴；(2)急性HBV感染趋向恢复。
12 + - + - - 急性HBV感染早期或慢性携带者，传染性强。
13 + - + + + (1)急性HBV感染趋向恢复；(2)慢性携带者。
14 + + - - - (1)亚临床型HBV感染早期；(2)不同亚型HBV⼆次感染。
15 + + - - + (1)亚临床型HBV感染早期；(2)不同亚型HBV⼆次感染。
16 + + - + - 亚临床型或⾮典型性感染。
17 + + - + + 亚临床型或⾮典型性感染。
18 + + + - + 亚临床型或⾮典型性感染早期。 HBsAg免疫复合物，新的不同亚型感染。
19 - - + - - (1)⾮典型性急性感染；(2)见于抗-HBc出现之前的感染早期，HBsAg 滴度低⽽呈阴性，或呈假阳性。
20 - - + - + ⾮典型性急性感染。
21 - - + + + 急性HBV感染中期。
22 - + - + - HBV感染后已恢复。
23 - + + - - ⾮典型性或亚临床型HBV感染。
24 - + + - + ⾮典型性或亚临床型HBV感染。
25 - - - + - 急性HBV感染趋向恢复。
7种罕见模式
26 + + + + + ①⼀种亚型的HBsAg及异型的抗HBs（常见）；②⾎清从HBsAg转化为抗HBs的过程（少见）。
27 - + + + -
28 - + + + +
29 - - + + -
30 + - + + -
31 + + + - -
32 + + + + -
⼄肝五项检测(胶体⾦法)
⼀、检测⽬的
⼄型肝炎病毒标志物(HBsAgHBsAb、HBeAg、HBeAb、HbcAb)检测。
⼆、测定原理
HBsAg、HBsAb、HBeAg均采⽤双抗体(原)夹⼼法原理。
HBeAb、HBcAb采⽤竞争法原理。
三、操作步骤
具体⽅法参照试剂盒说明书。举例如下：
在进⾏任何测试前必须先完整阅读使⽤说明书．使⽤前将试剂板和⾎清／⾎浆标本恢复⾄室温(20～30％)。从原包装铝箔袋中取出试剂盒(注意：在扣开铝箔前应先恢复⾄室温)，在l⼩时内应尽快地使⽤。
1.将试剂盒臵于⼲净平坦的台⾯上，⽤吸管吸取⾎清／⾎浆标本，逐滴垂直加⼊于试剂板的五个加样⼦L中(每孔2。3滴)。
2.加样后⽴刻开始计时，等待红⾊条带的出现，在15分钟时读取测试结果。在20分钟后读取的结果⽆效
．
四、结果判定
由于前三个项⽬HBsAg、HBsAb、HBeAg使⽤双抗体(原)夹⼼法原理，后两个项⽇HBeAb、HbcAb使⽤竞争法原理。因此前⼀：个项⽇与后两个项⽬判读⽅法是不同的．请注意区别。
l .HBsAg、HBsAb、HbeAg
(1)阳性(+)：两条红⾊条带出现。⼀条于测试区(T)内，另⼀条位于质控区(C)。阳性结果表明：标本中含有待测物质。
(2)阴性(⼀)：质控区(c)出现⼀条红⾊条带，在测试区(T)内⽆红⾊条带出现。阴性结果表明：标本中检测不出待测物质。
(3)⽆效：质控区(c)未出现红⾊条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并⽤新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在，应⽴即停⽌使⽤此批号产品，并与当地供应商联系。
(4)注意：在进⾏HBsAg、HBsAb、HbeAg测试时，测试区(T)内的红⾊条带可显现出颜⾊深浅的现象。只要在规定的观察时间内，不论该条带颜⾊深浅，即使只有⾮常弱的⾊带也应该判为阳性结果。
2 HBeAb、HBcAb
(1)强阳性(+)：仅质控区(c)出现⼀条红⾊条带．在测试区(T)内⽆红⾊条带出现。阳性结果表明：标本中含有待测物质。
(2)弱阳性(+)：质控区(c)出现⼀条红⾊条带，在测试区(T)内有⾮常弱的红⾊条带出现。阳性结果表明：标本中含有待测物质。
(3)阴性(⼀)：两条红⾊条带出现。⼀条于测试区(T)内，另⼀条位于质控区(c)。阴性结果表明：标本中检测不出待测物质。
(4)⽆效：质控区(c)未出现红⾊条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质损坏。在此情况下，应重新测试。如果问题仍然存在，应⽴即停⽌使⽤此批号产品，并与当地供应商联系。
五、注意事项
l.请控制判读时间，测试结果应在测定开始后20分钟左右读取，30分钟后读判定⽆效。
2.乳胶法⼄肝五项检测试剂板(⾎清／⾎浆)只是定性的筛选⼄肝病毒⾎清标志物的存在，不能确定⾎样中病毒的含量。
3.由于在技术上和操作上可能出现的失误，同时也由于标本中存在的⼲扰物质，检测结果可能有错误。对可疑结果应作相应的进⼀步检测。
六、⽣物安全防护
1.在检测前，所有标本均应视为“阳性”标本即⽣物危险品。
2.如操作中不慎洒落⾎液，要及时对污染台⾯消毒处理。
3.操作前⼀定要做好⾃⾝防护(穿⽩⼤⾐、带⼝罩、⽩帽、胶⽪⼿套)。
4.HBV对低温、⼲燥、紫外线、70％⼄醇均有耐受性。煮沸100℃10分钟、⾼压蒸汽灭菌121℃15分钟或f热160℃2⼩时均可灭活HBV。5～10g／L次氯酸钠30分钟，1：4000福尔马林37℃72⼩时，O 5％过氧⼄酸15分钟均可破坏其传染性。
七、临床意义
1. HBsAg阳性：⾎清HBsAg阳性，表⽰受检者处于HBV的感染状态。
2. HBsAb阳性：多见于⼄型肝炎处于恢复期，或既往曾感染过HBV，现在已恢复，⽽且对HBV有⼀定的免疫⼒；同
时，HBsAb阳性是对接种⼄肝疫苗后产⽣效果，即接种免疫成功的指标。
3. HBeAg阳性：见于HBV感染的早期，表⽰⾎液中含有较多的病毒颗粒，提⽰肝细胞有进⾏性损害和⾼度传染性；⼄型肝炎加重之前，HBeAg即有升⾼，有助于预测肝炎病情，HBeAg持续阳性，易转为慢性⼄型肝炎；HBeAg和HBsAg均为阳性的孕妇，可以将⼄型肝炎传播病毒给新⽣⼉，其感染的阳性率为70％～90％。
4. HBeAb阳性：多见于HBeAg转阴的检验对象，意味着HBV部分被清除或抑制，病毒复制减少，传染性降低；部分慢性⼄型肝炎、肝硬化、肝癌检验对象可检出HBeAb；在HBsAg和HBsAb阴性时，如能检出HBeAb和HhcAb，也能确诊为⼄型肝炎近期感染。
5. HBcAb—IgG阳性：⾼滴度表⽰正在感染}，低滴度则是既往感染过HBV的指标，
具有流⾏病学的意义。
6. HBcAb—IgM阳性：是诊断急性⼄型肝炎和判断病毒复制活跃的指标，并提⽰检验对象⾎液有较强传染性。同时，HBcAb —IgM阳性还见于慢性活动性⼄型肝炎。
⼄肝表⾯抗原检测(胶体⾦法)
⼀、检测⽬的
⼄型肝炎病毒标志物HBsAg检测。
⼆、测定原理
HBsAg采⽤双抗体(原)夹⼼法原理。
三、操作步骤
具体⽅法参照试剂盒说明书。举例如下：
在进⾏任何测试前必须先完整阅读使⽤说明书．使⽤前将试剂板和⾎清／⾎浆标本恢复⾄室温(20～30％)。从原包装铝箔袋中取出试剂盒(注意：在扣开铝箔前应先恢复⾄室温)，在l⼩时内应尽快地使⽤。
1.将试剂盒臵于⼲净平坦的台⾯上，⽤吸管吸取⾎清／⾎浆标本，逐滴垂直加⼊于试剂板的五个加样⼦L中(每孔2。3滴)。
2.加样后⽴刻开始计时，等待红⾊条带的出现，在15分钟时读取测试结果。在20分钟后读取的结果⽆效．
四、结果判定
HBsAg (1)阳性(+)：两条红⾊条带出现。⼀条于测试区(T)内，另⼀条位于质控区(C)。阳性结果表明：标本中含有待测物质。
(2)阴性(⼀)：质控区(c)出现⼀条红⾊条带，在测试区(T)内⽆红⾊条带出现。阴性结果表明：标本中检测不出待测物质。
(3)⽆效：质控区(c)未出现红⾊条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并⽤新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在，应⽴即停⽌使⽤此批号产品，并与当地供应商联系。
(4)注意：在进⾏HBsAg测试时，测试区(T)内的红⾊条带可显现出颜⾊深浅的现象。只要在规定的观察时间内，不论该条带颜⾊深浅，即使只有⾮常弱的⾊带也应该判为阳性结果。
五、注意事项
l.请控制判读时间，测试结果应在测定开始后20分钟左右读取，30分钟后读判定⽆效。
2.胶体⾦法⼄肝表⾯抗原检测试剂板(⾎清／⾎浆)只是定性的筛选⼄肝病毒⾎清标志物的存在，不能确定⾎样中病毒的含量。
3.由于在技术上和操作上可能出现的失误，同时也由于标本中存在的⼲扰物质，检测结果可能有错误。对可疑结果应作相应的进⼀步检测。
六、⽣物安全防护
1.在检测前，所有标本均应视为“阳性”标本即⽣物危险品。
2.如操作中不慎洒落⾎液，要及时对污染台⾯消毒处理。
3.操作前⼀定要做好⾃⾝防护(穿⽩⼤⾐、带⼝罩、⽩帽、胶⽪⼿套)。
4.HBV对低温、⼲燥、紫外线、70％⼄醇均有耐受性。煮沸100℃10分钟、⾼压蒸汽灭菌121℃15分钟或f热160℃2⼩时均可灭活HBV。5～10g／L次氯酸钠30分钟，1：4000福尔马林37℃72⼩时，O 5％过氧⼄酸15分钟均可破坏其传染性。
七、临床意义
HBsAg阳性：⾎清HBsAg阳性，表⽰受检者处于HBV的感染状态。HBsAg也可从许多⼄肝检验对象体液和分泌物中测出，如唾液、精液、乳汁、阴道分泌物等。
沙眼⾐原体IgG抗体检测（胶体⾦法）
⼀、检测⽬的：
⽤于检测试验⾎清中的沙眼⾐原体抗体IgG。
⼆、检验原理：
⽤沙眼⾐原体抗原固相硝酸纤维素膜，应⽤渗滤式间接法原理，检测⾎清中沙眼⾐原体抗体IgG。
三、样本要求：
1、⾎清样品不能溶⾎，应为新鲜⾎清或2℃～8℃条件保存不超过⼀周。
2、⾼脂⾎症⾎清不能使⽤。
四、检验⽅法：
1、取出试剂盒，室温平衡20-30分钟；
1、滴⼊洗涤液⼀滴于反应板中央孔中，待液体将膜完全湿润；
2、加⼊待测⾎清150µl（若⽤样品吸管则加4滴）于反应板孔中，待液体充分吸
⼊；
3、滴加三滴⾦标液于反应板孔中，待液体充分吸⼊；
4、渗⼊三滴洗涤液于反应板孔中，待液体充分吸⼊。
五、结果解释：
阳性：反应板孔中C端出现红⾊圆斑，T端出现红⾊圆斑，为沙眼⾐原体抗体IgG 阳
阴性：反应板孔中C端出现红⾊圆斑，T端不出现红⾊圆斑，为沙眼⾐原体抗体IgG 阴
失效：反应板孔中C端不出现红⾊圆斑，或C端、T端均不出现红⾊圆斑，为试剂盒失效。
六：检验⽅法的局限性：
1、本试剂试验仅⽤于检测沙眼⾐原体抗体IgG⽽⾮直接检测沙眼⾐原体抗原，因
⽽阳性结果并不能确诊是沙眼⾐原体感染。对患者状况的诊断应结合患者临床体征与症状和试验结果的综合分析。
2、抗体含量低的⾎清样品，不能被检测出来是可能的。部份沙眼⾐原体感染的患
者，不产⽣抗体或产⽣少量的抗体。此时，可能显⽰阴性结果。
3、本试剂不能确定沙眼⾐原体抗体IgG的确切含量。

版权声明：本站内容均来自互联网，仅供演示用，请勿用于商业和其他非法用途。如果侵犯了您的权益请与我们联系QQ:729038198，我们将在24小时内删除。