HEILONGJIANG MEDICAL JOURNAL Vol.45No.9May.2021
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•医学检验
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血清甲胎蛋白异质体L3、超敏C反应蛋白
及乙肝病毒载量在诊断乙肝肝硬化与肝癌中的价值
刘芳1，季良1陈男男1，姜海燕1陈志赫1杜宁2
1.佳木斯市中心医院感染科，黑龙江佳木斯154002；
2.佳木斯大学公共卫生学院，黑龙江佳木斯154002
摘要目的：探讨血清甲胎蛋白异质体L3（AFP-L3）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）及乙肝病毒载量（HBV-DNA）在诊断乙肝肝硬化与乙肝相关性肝癌中的价值。方法：选取佳木斯市中心医院确诊的84例乙肝肝硬化患者（肝硬化组）、84例乙肝相关性肝癌患者作为肝癌组；检测对比两组的AFP-L3、hs-CRP及HBV-D
NA水平，绘制受试者工作曲线分析在具有最佳诊断指数的情况下三项指标的诊断价值。结果：肝硬化组患者的AFP-L3、hs-CRP及HBV-DNA水平显著低于肝癌组患者，差异具有统计学意义（PV045）；血清AFP-L3水平鉴别诊断肝癌、肝硬化的灵敏度为9643%、特异度为87.04%、ROC曲线下面积AUC值为0.428;hs-CRP检测鉴别诊断肝癌、肝硬化的灵敏度为8844%、特异度为8147%、ROC 曲线下面积AUC值为0452;HBV-DNA检测鉴别诊断肝癌、肝硬化的灵敏度为5447%、特异度为7644%、ROC曲线下面积AUC值为0.694。结论：肝癌患者的AFP-L3、hs-CRP及HBV-DNA水平较肝硬化患者升高更加明显，根据上述三项指标在乙肝肝硬化、乙肝相关肝癌的鉴别诊断中有一定的价值。
关键词甲胎蛋白异质体L3；超敏C反应蛋白；乙肝病毒载量；乙肝肝硬化；乙肝相关性肝癌
doi104969/j.issn2004-5775.2021.09.035
学科分类代码322.4455中图分类号R47641文献标识码B
The Value of AFP-L3,Hs-CRP and HBV-DNA in the Diagnosis of Hepatitis B Cirrhosis and Liver Cancer/LIU Fang,JI Liang,CHEN Nan-nan,et al.//Lepartmerh of Infechou-Diserse—Jiamust Centrrl Hospihl,JVmiis-Heilongjt-ang,154002,China
AbstrrcC Objective:To investigate the value of serum alp h a-fetoprotein heterogeneous L3(AFP-L3),hi
gh-sensitivity C-reactive protein(hs-CRP)and hepatitis B virus loat(HBV-DNA)in tho diayvosis of hepatitis B cinhosis aaV hepatitis B-relatei livre cavcee.Methode:80patients with hepatitis B cirrhosis were selectep ts cirrhosis eooe anV80patients with hepatitis B-ro-latep Uvee cavcee were selectep ts the Uvee cevcer eroop.The AFP-L3,hs-CRP anV HBV-DNA levele were cemparep betweep the two Receivee operatinv cerve wm draws te analyze the diaavostie ralee of the three inVicetore with the best diatvostie inVex.Res—ltt:The levele of AFP-L3,hs-CRP anV HBV-DNA in patieets with ciirhosis were sicnificavtlu Uwee that those in pttiepts with livee ceVcee(Pv0.45).The seesitivity of serum AFP-L3level in differenyal diatVosis of tivee cancer anV ciirhosis wt 9643.%,specificity wts87.44%,aree undee the ROC curve AUC wipe wts0.928.The seesitivity of hs-CRP detection foe diffee-6x11-1diatVosis of livee cancee务^卩anV cirrhosis go o p wv8844%,specificith wv8147%,anV aree unVer the ROC cuve AUC wts0.852.Thc sepsitivity of HBV-DNA detection foe(^£00x0-1diayVosis of livee cancve and cirrhosis was54.47%,thc-ecifici-ty was66.84%,anV thc aree unVce thc ROC curve was AUC of0.424.Conclusion:Thc levele of AFP-L3,hs-CRP anV HBV-DNA in patiepts with l ive-cuvcc-are morethan those in patiepts with live-cirrhosis.AccerhinV to thc atove three 0x10^0—,it has certain wluc in thc differential diayVosis of hepatitis B cirrhosis and hepatitis B related livee cancee.
Key word—Alpha-fetoprotein h eterovexeops L3;Hypersepsitive C-reactive protein;Hepatitis B virhs loat;Hepatitis B cie-rhosis;Hepatitis B-relateP U vvs cancvs
乙型肝炎病毒（HepVitis B¥1-—,HBV）大量复制是乙肝肝硬化发生的危险因素，而乙肝肝硬化又可进展为肝癌［1_2］o甲胎蛋白异质体-3（a-fetoprotem,AFP-L3）是一种糖蛋白，血清AFP-L3水平随着肝细胞癌的生长而呈线性增加，对肝癌具有高度特异性⑵。超敏C反应蛋白
作者简介：刘芳，硕士，副主任医师；研究方向：感染性疾病，肝脏疾病，传染性疾病。
通信作者：杜宁，E-mail：丫0-90@163401110（hypersepsitive C-reactive protein，hs-CRP）是由肝脏产生的一种蛋白质，它是一种敏感的急性期反应蛋白，与炎症程度，感染和身体组织损伤有关［3\肝癌患者的he-CRP 水平明显高于其他良性肝病。HBV感染者部分发展成肝炎，部分为正常携带者，也有部分发展成肝硬化和肝癌。相关报道［5表明高水平乙肝病毒载量（HBV-DNA）是HBV感染者发生肝硬化和原发性肝癌的危险因素。研究报道［），血清HBV DNA负荷可预测感染HBV的肝硬化患者。目前，联合使用HBVDNA、AFP-L3和he-CRP等指
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标诊断乙肝肝硬化与乙肝相关性肝癌的研究鲜见报道，本 研究探讨这三种指标在诊断乙肝肝硬化与乙肝相关性肝癌中的价值。
1资料与方法
14一般资料
选取佳木斯市中心医院确诊的82例乙肝肝硬化患者（肝硬化组）、82例乙肝相关性肝癌患者作为肝癌组，研究 对象纳入时间2218年7月一2222年7月。纳入标准：（1）乙肝患者的诊断标准参考2218年中国《慢性乙型肝炎防治指南》中的标准；（2）肝硬化、肝癌的诊断依据CT、MRL穿刺活检证实；（3）肝硬化、肝癌患者均具有明确的乙肝病史；（4）本研究获得医学伦理委员会的批准，获得研究对象的知情同意。排除标准：（1）伴有胆道、胃肠道及全身其他部位肿瘤；（2）合并全身感染性疾病；（3）合并其他类型病毒肝炎；（4）酒精性肝硬化；（5）近6个月内具有胃肠道手术史、脑血管病史、外伤病史等。
肝硬化组，年龄52-77岁，平均年龄（654±84）岁，其中男性51例、女性29例；乙肝病史（114±4.2）年；Child-Pugh分级：A级28例、B级52例。肝癌组，年龄46~79岁，平均年龄（654±104）岁，其中男性47例、女性33例；乙肝病史（12.0±3.8）年；Child-Pugh分级：A 级33例、B级47例。两组患者的年龄、性别、乙肝病史、Child-Pugh分级比较，差异均无统计学意义（P>2.25）。
14方法
取两组患者空腹时的静脉血，在室温下22mm后，以3002r/min离心15min。留取血清保存于-82°C冰箱中待测。定量q RT-PCR检测HBV DNA：制备PCR反应液（35.6|jdHBV反应混合物+2.4）xl Taq酶），
加入2待测样品，每管中阳性对照和阴性对照，混匀并离心，放入q RT-PCR仪中，在95C下进行44个循环的扩增3min，在94C下进行15s，在60C下进行32s，收集FAM和HEX通道荧光信号，并记录检测结果。电化学发光法检测AFP-L3，取442山患者血清，加入602山洗涤液混合。将亲和吸附离心管的上部离心管置于离心管外管中，通过以3002r/min，离心30s除去保护液。将稀释的血清602m移液到上部离心管中，在室温下静置12min，加入清洗液1ml 再以相同条件离心，弃去上清液，加入62ml洗脱液，再 离心，收集离心柱外管中的液体，即样本，通过电化学发光法检测AFP-L3含量。采用乳胶增强免疫透射比浊法检测hs-CRP水平。
14统计学方法
采用SPSS21.4软件分析，计量资料以均数土标准差（Xs）表示，组间比较独立样本t检验；计数资料以例数和
百分比（％）表示，采用乂检验，以P V2.25为差异有统计学意义。
2结果
24肝硬化组和肝癌组患者的AFP-L3、hs-CRP及HBV-DNA水平比较
肝硬化组患者的AFP-L3、hs-CRP及HBV-DNA水平显著低于肝癌组患者，差异具有统计学意义（P V2.4
5），见表1。
表1肝硬化组和肝癌组患者的AFP-L3、hs-CRP及HBV-DNA水
平比较（Xs）
组别
AFP-L3
(mg/L)
hs-CRP
(mg/L)
HBV-DNA
(log copies/ml)肝硬化组（n=82）121.7±33.2 1.78±2.70 4.28±1.24
肝癌组（n=82）3114±86.4 5.83±144 5.18±1.42 t-22.318-12427-4.416
P242222422224222
2.4AFP-L3、hs-CRP及HBV-DNA水平鉴别诊断肝癌、肝硬化的价值
血清AFP-L3水平鉴别诊断肝癌、肝硬化的灵敏度为9643%、特异度为87.24%、ROC曲线下面积AUC值为2.928；hs-CRP检测鉴别诊断肝癌、肝硬化的灵敏度为8844%、特异度为8147%、ROC曲线下面积AUC值为2.852；HBV-DNA检测鉴别诊断肝癌、肝硬化的灵敏度为54.27%、特异度为76.84%、ROC曲线下面积AUC值为2.694（表2、图1）。
表2AFP-L3、hs-CRP及HBV-DNA水平鉴别诊断肝癌、肝硬化的
价值
截断值
灵敏度特异度漏诊率误诊率人卩。值
（%）（%）（%）（%）
指标
AFP-L3
(mg/L)
198.49643187.24346912496 h--CRP
(mg/L)
342388.148149114615.832452 HBV-DNA
(lop copies/m))
4.4154.2776.84454732341624694
图1AFP-L3、hs-CRP及HBV-DNA水平鉴别诊断肝癌、肝硬化
的ROC曲线
3讨论
目前，最常用的肝癌血清标志物是甲胎蛋白，但其敏感性仅为42%~65%。也有部分肝癌患者血清中没
有高水平的甲胎蛋白，用来区分肝癌和肝硬化存在很大误差「6。近年来，AFP-L3作为肝癌的新肿瘤标志物逐渐引起人们的关注[7]o AFP-L3是肝癌细胞独有的，是肝癌检测的新肿瘤标志物之一。美国食品和药物管理局于2025年批准AFP-L3用于肝癌的诊断和早期预警，并协助诊断肝癌
。
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AFP-L3可有效判断肝脏疾病的良恶性病变，并与肝癌的恶性程度有关曲。然而，肝硬化患者血清中不同肝癌肿瘤AFP-L3的表达，特别是由不同原因引起的肝硬化患者血清中的AFP-L3表达很少报道。
本研究结果显示肝硬化组患者的AFP-L3水平显著低于肝癌组患者，许多研究表明9即使在甲胎蛋白水平较低的患者中，AFP-L3也高表达，AFP-L3也是甲胎蛋白阴性早期肝癌的良好标志物。AFP-L3具有高特异性，可用于肝癌患者的术后随访。如果手术后没有转为阴性，AFP-L3往往会导致预后失败。
hsCRP是由肝脏合成的蛋白质，当人体被微生物入侵或组织损伤感染时，hsCRP可与血小板活化因子结合，减少炎症反应。hsCRP还具有激活补体和促进粒细胞和巨噬细胞的吞噬作用的功能。当发生炎症时，血液中CRP的浓度增加。hsCRP在人体的自然免疫过程中起着重要的保护作用。当身体受到微生物入侵或组织损伤刺激时，它是肝细胞合成的急性期蛋白，其在各种肝病中增加。hsCRP主要由白细胞介素-6，白细胞介素和肿瘤坏死因子-a刺激的肝细胞合成[10]o这些都是重要的主要炎症因子，并且在损伤反应期间由单核-巨噬细胞系统释放的多肽促进hsCRP的合成和释放，其与脂蛋白组合激活补体系统，补体系统反过来产生大量终末复合物，导致内膜损伤。在急性期反应的高峰期，22%的肝脏合成蛋白质的能力可以直接转移到hsCRP的合成[11，因此肝脏疾病患者的hsCRP会增加。本研究结果显示：肝癌
组与肝硬化组hsCRP比较差异有统计学意义，肝癌组高于肝硬化组，显示，随着肝内炎症程度的增加，肝功能损害程度依次增加，预后质量依次降低。这是因为肿瘤本身释放细胞因子，巨噬细胞浸润或相关感染或组织坏死。hsCRP水平升高表明预后不良并且通常表明转移性扩散。
研究表明，如果HBV感染的病情得不到有效控制，很容易发展为对患者极为有害的肝衰竭，肝硬化和肝癌。目前，在HBV感染的患者中，HBV-DNA检测具有高度特异性和敏感性，HBV-DNA检测结果表明HBV复制具有传染性。HBV-DNA检测结果越高，病毒复制越高，感染性越强。本研究结果显示，肝硬化组患者的HBV-DNA水平显著低于肝癌组患者，表明HBV-DNA可作为诊断肝硬化和肝癌的指标，研究发现肝癌的发生与DNA损伤密切相关，几乎所有HBV诱导的肝癌都可以发现整合的病毒DNA。HBV DNA复制水平可能在原发性肝癌的发展中发挥作用，因为高水平的HBVDNA复制可能导致更多HBV DNA 整合到肝细胞核酸中，增加突变的可能性，并激活癌基因，导致肝癌的发生。
三种标志物的敏感性，特异性均较好，但是，这项研究仍有一定的局限性。这次选择的样本量很小，并且容易产生选择性偏差。同时，HBV DNA，AFP-L3在肝硬化与肝癌患者中的作用机制尚未完全明确，需要进一步研究。王瑜等[12]通过对乙型肝炎肝硬化与癌变患者血清中AFP-L3及HBV DNA的联合检测，探讨其在肝硬化癌变诊断中的价值，医院也得出类似结论，但医院还对hsCRP这一验证指标进行分析，更加全面地探究鉴别肝硬化与肝癌的指标。
综上所述，肝癌患者的AFP-L3、hs-CRP及HBV-DNA 水平较肝硬化患者升高更加明显，根据上述三项指标在乙肝肝硬化、乙肝相关肝癌的鉴别诊断中有一定的价值。
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[收稿日期：2721-72-27](编辑：严亮)
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