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目录
英文缩写词汇表 (1)
摘要 (2)
Abstract (3)
第一部分内质网应激信号通路介导氟致神经干细胞凋亡
前言 (5)
材料和方法 (7)
结果 (17)
讨论 (18)
第二部分  ROS介导内质网应激参与氟致神经干细胞凋亡
前言 (20)
材料和方法 (21)
结果 (25)
讨论 (27)
小结 (29)
参考文献 (30)
综述 (35)
参考文献 (42)
致谢 (46)
华中科技大学硕士学位论文
英文缩写词汇表
(List of Abbreviation)
ANOV A analysis of variance 单因素方差分析CHOP C/EBP homologous protein C/EBP同源蛋白Caspase 3 cysteine aspartate specific protease 半胱氨酸天冬氨酸酶3
DCFH-DA 2',7'-dichloride fluorescent yellow doubleacetate 2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐
ECL enhanced chemiluminescence 增强型化学发光ERS endoplasmic reticulum stress 内质网应激
GRP78 glucose-regulated protein 78 葡萄糖调节蛋白78 IRE1 inositol-requiring kinase 1 肌醇需求酶1
LSD least significant difference 最小显著差法MDA malondialdehyde 丙二醛
NSCs neural stem cells 神经干细胞
NAC N-Acetyl-L-cysteine N-乙酰半胱氨酸PVDF Polyvinylidene Fluoride Membrane PVDF膜
ROS reactive oxygen species 活性氧
SDS sodium dodecyl sulfonates 十二烷基磺酸钠SOD superoxide dismutase 超氧化物歧化酶TEMED tetramethyl-ethylenediamine 四甲基乙二胺
Tris trihydroxymethyl aminomethane 三羟甲基氨基甲烷UPR unfolded protein response 未折叠蛋白反应
4-PBA phenylbutyric acid 4-苯基丁酸
华中科技大学硕士学位论文ROS介导的内质网应激在氟致神经干细胞凋亡中的作用
学位申请人：张潇
导师：王爱国教授
摘要
目的：氟引起的发育神经毒性近年来受到广泛关注，但其毒作用机制尚未完全阐明。我们前期研究发现，一定剂量的氟化钠（NaF）可抑制小鼠源性神经干细胞株C17.2增殖并促进细胞凋亡，同时伴随着氧化应激和内质网应激的发生。本研究拟采用缓解内质网应激的化学伴侣4-苯基丁酸（4-PBA）和抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）对氟染毒进行干预，旨在明确内质网应激在氟致神经干细胞凋亡中的作用及氧化应激所扮演的角，为进一步阐明氟神经毒性作用机制提供理论依据。
方法：根据前期研究结果，选取60 mg/L NaF对体外培养的C17.2细胞进行染毒处理，采用2 mmol/L 4-PBA或1 mmol/L NAC分别进行干预。染毒24 h后，利用Hoechst 染检测凋亡细胞核形态改变、western blot检测凋亡蛋白Caspase-3酶原以及内质网应激相关蛋白GRP78、IRE1和CHOP的表达水平，并采用流式细胞术检测细胞ROS 水平。
结果：与60 mg/L NaF染毒组相比，4-PBA干预可明显降低内质网应激相关蛋白IRE1和CHOP的表达水平，并抑制Caspase 3酶原剪切活化，减少C17.2细胞凋亡，提示内质网应激信号通路参与氟致C17.2细胞凋亡；此外，与60 mg/L NaF染毒组相比，NAC干预不仅使细胞ROS水平显著降低，还能抑制内质网应激相关蛋白IRE1和CHOP的表达，并减轻其介导的细胞凋亡，表明ROS可能通过内质网应激途径调控氟诱导的神经干细胞凋亡
结论：ROS可作为上游信号分子通过调控内质网应激水平参与氟致神经干细胞的凋亡。
关键词：氟化钠；神经干细胞；活性氧；内质网应激；凋亡
华中科技大学硕士学位论文
The Role of ROS-mediated Endoplasmic Reticulum Stress in Neural Stem Cells Apoptosis Induced by Fluoride
Candidate for M.D.: Xiao Zhang
Supervisor: Professor Aiguo Wang
Abstract
Objective: Developmental neurotoxicity of fluoride has been attracting wide attention in recent years. However, its mechanism has not been fully elucidated. Our previous study found that, sodium fluoride (NaF) can inhibit proliferation and induce apoptosis in neural stem cell line(NSCs) C17.2 derived from mouse, in accompany with oxidative stress and endoplasmic reticulum stress(ERS). In this study, we use chemical chaperone 4-phenylbutyric acid(4-PBA), which could alleviate ER stress, and antioxidant N- acetylcysteine (NAC) as intervention agents to further define the roles of oxidative stress and ERS in the apoptosis of neural stem cells induced by fluoride and provide a theoretical basis for elucidating the toxicity mechanism of fluoride.
Methods: According to previous results, choose a treatment concentration of 60 mg/L NaF for this research. C17.2 cells in vitro are given 2 mmol/L chemical chaperone 4-PBA or 1 mmol/L antioxidant NAC respectively for intervention. After exposure for 24 h, use Hoechst staining to observe morphological changes of apoptotic nucleis; western blot to detect the expression levels of pro-Caspas
e 3 and ERS-related proteins GRP78, IRE1 and CHOP; flow cytometry to detect ROS levels in cell.
Results: Compared with 60 mg/L NaF treated group, intervention with 4-PBA can significantly reduce expression levels of CHOP and IRE1, inhibit cleavage and activation of Caspase 3 to decrease C17.2 apoptosis, suggesting that ERS signaling pathway is involved in apoptosis induced by fluoride. In addition, compared with 60 mg/L NaF group, intervention with NAC can not only decrease the levels of ROS significantly, but also suppress the expression levels of IRE1 and CHOP, mitigate ERS-mediated apoptosis, suggesting that oxidative stress may regulate NSCs apoptosis induced by fluoride via ERS signaling pathway.
reactive声明类型
Conclusion: As an upstream signaling molecule, ROS may participate in

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