(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710413213.0
(22)申请日 2017.06.05
(71)申请人 重庆医科大学附属第一医院
地址 400016 重庆市渝中区袁家岗友谊路1
号
(72)发明人 余昕烊　漆洪波　张华　
菲利普·贝克　陈竺　赵亚兰　
刘正飞　童超　
(74)专利代理机构 北京国昊天诚知识产权代理
有限公司 11315
代理人 许志勇
(51)Int.Cl.
A01K  67/02(2006.01)
(54)发明名称
一种快速构建妊娠期糖尿病小鼠动物模型
的方法
(57)摘要
本发明公开了一种快速构建妊娠期糖尿病
小鼠动物模型的方法，包括以下步骤：(1)(1)将7
周雌性小鼠给予高脂饲料喂养，一周后合笼，查
看阴栓，出现阴栓当天登记为妊娠0.5天，并行口
服葡萄糖耐量试验(OGTT)，以排除孕前糖尿病，
并记录体重；(2)孕期继续给予高脂饲料喂养，于
妊娠16.5天再次行OGTT，与标准饲料喂养的小鼠
对比，模型组出现葡萄糖耐量降低为模型成功。
本发明建立了一种与人类GDM最相似的稳定、可
靠的小鼠模型，而且造模时间短，经济成本低，实
用性强，可复制，表型显著，符合人类GDM的临床
特征。权利要求书1页  说明书3页  附图3页CN 107173314 A 2017.09.19
C N  107173314
A
1.一种快速构建妊娠期糖尿病小鼠动物模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将7周雌性小鼠给予高脂饲料喂养，一周后合笼，查看阴栓，出现阴栓当天登记为妊娠0.5天，并行口服葡萄糖耐量试验，以排除孕前糖尿病，并记录体重；
(2)孕期继续给予高脂饲料喂养，于妊娠16.5天再次行OGTT，与标准饲料喂养的小鼠对比，模型组出现葡萄糖耐量降低为模型成功。
2.根据权利要求1所述的一种快速构建妊娠期糖尿病小鼠动物模型的方法，其特征在于，步骤(1)中小鼠合笼一周仍未妊娠，则舍弃。
3.根据权利要求1所述的一种快速构建妊娠期糖尿病小鼠动物模型的方法，其特征在于，所述的雌性小鼠采用C57雌性小鼠。
4.根据权利要求1所述的一种快速构建妊娠期糖尿病小鼠动物模型的方法，其特征在于，所述的高脂饲料采用Research  Diet，D12451高脂饲料。
5.根据权利要求1所述的一种快速构建妊娠期糖尿病小鼠动物模型的方法，其特征在于，所述的高脂饲料喂养采用自由取食方式。
权　利　要　求　书1/1页CN 107173314 A
一种快速构建妊娠期糖尿病小鼠动物模型的方法
技术领域
[0001]本发明属于药理学领域，具体是一种快速构建妊娠期糖尿病小鼠动物模型的方法。
背景技术
[0002]妊娠前糖代谢正常或有潜在糖耐量减退、妊娠期才出现或确诊的糖尿病，又称为“妊娠期糖尿病(GDM)”。妊娠中、晚期，孕妇体内抗胰岛素样物质增加，如胎盘生乳素、雌激素、孕酮、皮质醇和胎盘胰岛素酶等使孕妇对胰岛素的敏感性随孕周增加而下降。为维持正常糖代谢水平，胰岛素需求量必须相应增加。对于胰岛素分泌受限的孕妇，妊娠期不能代偿这一生理变化而使血糖升高，使原有糖尿病加重或出现GDM。GDM患者糖代谢多数于产后能恢复正常，但将来患II型糖尿病机会增加。糖尿病孕妇的临床经过复杂，母子都有风险，应该给予重视。
[0003]目前建立的妊娠期糖尿病模型主要有转基因型、自发型及诱发型等动物模型。目前转基因小鼠模型及自发性小鼠模型因体现出类似Ⅰ型糖尿病或Ⅱ型糖尿病的研究，如ob/ ob小鼠或db/db小鼠模型。目前最受广泛应用的自发性GDM小鼠模型LepRdb/+小鼠模型也被证实失去GDM表型。现应用最多的是诱发型，最受青睐的是链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病模型和高脂诱导肥胖模型，前者原理为STZ药物对实验动物的胰岛β细胞毒性作用损伤胰岛β细胞，使胰岛素分泌不足，引起类似于1型糖尿病的表型(胰岛素分泌不足)，且胎鼠体质量降低，不符合GDM的特征；后者原理为高脂或高糖饲料喂养，致使小鼠妊娠前肥胖或Ⅱ型糖尿病，交配后制造出肥胖或2型糖尿病合并妊娠的小鼠模型，而非妊娠后首次发生的糖
尿病，不符合GDM的特征。我们通过首创造性地通过极短时间高脂饲料诱导C57小鼠，确保妊娠前小鼠无糖尿病，妊娠后小鼠出现血糖增高，胰岛素抵抗、体质量增加等GDM病理生理改变等，是与人类GDM非常相似的小鼠GDM模型。
发明内容
[0004]本发明的目的在于提供一种快速构建妊娠期糖尿病小鼠动物模型的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
vimeo 0006解决方法[0005]为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
[0006]一种快速构建妊娠期糖尿病小鼠动物模型的方法，包括以下步骤：
[0007](1)将7周雌性小鼠给予高脂饲料喂养，一周后合笼，查看阴栓，出现阴栓当天登记为妊娠0.5天，并行口服葡萄糖耐量试验，以排除孕前糖尿病，并记录体重；
[0008](2)孕期继续给予高脂饲料喂养，于妊娠16.5天再次行OGTT，与标准饲料喂养的小鼠对比，模型组出现葡萄糖耐量降低为模型成功。
[0009]作为本发明进一步的方案：步骤(1)中小鼠合笼一周仍未妊娠，则舍弃。[0010]作为本发明进一步的方案：所述的雌性小鼠采用C57雌性小鼠。
[0011]作为本发明进一步的方案：高脂饲料采用Research Diet，D12451高脂饲料。
[0012]作为本发明进一步的方案：高脂饲料喂养采用自由取食方式。
[0013]与现有技术相比，本发明的有益效果是：
[0014]不同于既往GDM小鼠模型造模时间长，表型不符合GDM的临床特征等缺点，本发明建立了一种与人类GDM最相似的稳定、可靠的小鼠模型，而且造模时间短，经济成本低，实用性强，可复制，表型显著，符合人类GDM的临床特征。
附图说明
[0015]图1为一种快速构建妊娠期糖尿病小鼠动物模型的方法的过程示意图。
[0016]图2为本发明中GD0.5小鼠血液葡萄糖浓度图。
[0017]图3为本发明中GD0.5小鼠AUC图。
[0018]图4为本发明中GD0.5小鼠体重图。
[0019]图5为本发明中GD16.5小鼠血液葡萄糖浓度图。
[0020]图6为本发明中GD16.5小鼠AUC图。
[0021]图7为本发明中GD18.5小鼠空腹血糖水平图。
[0022]图8为本发明中GD18.5小鼠空腹胰岛素水平图。
[0023]图9为本发明中GD18.5小鼠胰岛素抵抗指数图。
[0024]图10为本发明中GD18.5小鼠体重图。
具体实施方式
[0025]下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。
[0026]一种通过高脂饮食构建妊娠期糖尿病的小鼠动物模型，包括以下步骤：
[0027](1)购入7周C57雌性小鼠，随机分为模型组和对照组，模型组给予高脂饲料喂养，对照组给予动物实验室标准饲料喂养，一周后合笼，查看阴栓，出现阴栓当天登记为妊娠0.5天(GD0.5)，并行GD0.5口服葡萄糖耐量试验，以排除孕前糖尿病，并记录体重。所述的高脂饲料采用ResearchDiet，D12451高脂饲料；喂养采用自由取食方式。实验结果显示：GD0.5两组小鼠血液葡萄糖浓度(图2)及AUC(图3)差异
无统计学意义，体重比较亦无统计学差异(图4)，符合GDM表型特征。若小鼠合笼1周仍未妊娠，则舍弃，最终模型组和对照组各6只。[0028](2)孕期继续给予模型组高脂饲料喂养，对照组实验室标准饲料喂养，于妊娠16.5天(GD16.5)再次行口服葡萄糖耐量试验。结果显示：模型组30分钟、60分钟、90分钟、120分钟血糖高于对照组，差异有统计学意义(图5)。AUC比较模型组明显高于对照组，差异有统计学意义(图6)，模型组妊娠晚期糖耐量异常，符合GDM的表型特征。
[0029](3)于妊娠18.5天(GD18.5)处死小鼠，记录体重、空腹血糖水平、空腹胰岛素水平并计算胰岛素抵抗指数。结果显示：模型组孕晚期体重明显高于对照组(图10)，差异有统计学意义；虽然空腹血糖水平无明显差异(图7)，但HFD小鼠空腹胰岛素水平(图8)及胰岛素抵抗指数(图9)均较对照组显著增加，有统计学差异。上述表型均符合GDM的特有临床特征。[0030]本发明的原理是：通过极短时间高脂诱导C57小鼠可以高效地创建GDM小鼠模型，为未来GDM的研究提供更快、更好、更相似的动物模型新选择。
[0031]上面对本专利的较佳实施方式作了详细说明，但是本专利并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本专利宗旨的前提下
做出各种变化。

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