简介DMEM和1640培养基的区别
经典的培养基有很多种,其中 DMEM、 RPMI 1640、 MEM 、 DMEM/F12 都是应⽤最⼴泛的培养基。其他 如 M199 、 IMDM 、 L15培养基等也⽤于某些细胞的培养。其具体的特征及应⽤如下:
1、BME细胞培养基
基础Eagle培养基(Basal Medium Eagle),1955年Eagle设计,BSS+12种氨基酸+⾕氨酰胺+8种维⽣素。简单、便于添加,适于各种传代细胞系和特殊研究⽤,在此基础上改良的细胞培养基品种有MEM、DMEM、IMDM等。
2、MEM细胞培养基
⼜称低限量Eagle培养基(Minimal Essential Medium),1959年在Eagle's基础培养基(BME)上修改⽽来,删去赖氨酸、⽣物素,氨基酸浓度增加,适合多种细胞单层⽣长,有可⾼压灭菌品种,是⼀种最基本、试⽤范围最⼴的培养基,但因其营养成分所限,针对⽣产之特定细胞培养与表达时,并不⼀定是使⽤效果最佳或者最经济的培养基。
3、DMEM细胞培养基
minimalDMEM是由Dulbecco改良的Eagle培养基,起初是为⼩⿏成纤维细胞设计的。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍,维⽣素浓度是MEM的4倍,采⽤双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作⽤。最初的配⽅中葡萄糖含量为1000 mg/L,后来为了某些细胞的⽣长需要,将葡萄糖含量⼜调整为4500 mg/L,这就是⼤家常说的低糖和⾼糖了。
低糖适于依赖性贴壁细胞培养,特别适⽤于⽣长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。⾼糖更适合⾼密度悬浮细胞培养,也适⽤于附着性较差,但⼜不希望它脱离原来⽣长点的克隆培养,也可⽤于杂交瘤中⾻髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。例如CHO细胞表达⽣产⼄肝疫苗、CHO 细胞表达EPO。
4、IMDM细胞培养基
Guilber 和Iscove将Dulbecco' Medium 改良为 Iscove's Medium,⽤于培养红细胞和巨噬细胞前体。此种培养液含有硒、额外的氨基酸和维⽣素、丙酮酸钠和HEPES。并⽤硝酸钾取代了硝酸铁。IMDM还能够促进⼩⿏B淋巴细胞,LPS刺激的B细胞,⾻髓造⾎细胞,T细胞和淋巴瘤细胞的⽣长。IMDM为营养⾮常丰富的培养液,因此可以⽤于⾼密度细胞的快速增殖培养。
5、RPMI-1640细胞培养基
Moore等⼈于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制,针对淋巴细胞培养设计,含BSS+21种氨基酸+维⽣素11种等。现也⽤于悬浮细胞培养,如哺乳动物、特殊造⾎细胞、正常或恶性增⽣的⽩细胞,杂交瘤细胞的培养,其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上⽪细胞等均可参考使⽤。
6、HamF10细胞培养基
1963年Ham设计,含微量元素,可在⾎清含量低时⽤,适⽤于克隆化培养。F10适⽤于仓⿏、⼈⼆倍体细胞,特适于⽺⽔细胞培养。
7、DMEM/F12细胞培养基
Ham's F12是为在低⾎清浓度下克隆CHO细胞⽽设计的,现在也⼴泛应⽤于克隆形成率的分析及原代培养。F12还可以与DMEM等体积混合使⽤,得到⼀种⾼浓度与成分多样化相结合的产物,这种培养基已应⽤于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。由于营养成分丰富,且可以使⽤较少⾎清,故也常作为⽆⾎清培养基的基础培养基。
8、M199细胞培养基
1950年Morgan等设计的具有确定化学成分的细胞培养液,即M-199。除BSS外,含有53种成分,为全
⾯培养基,主要⽤于鸡胚成纤维细胞培养。此培养液必须辅以⾎清才能⽀持长期培养。M-199可⽤于培养多种种属来源的细胞,并能培养转染的细胞。现⼴泛⽤于病毒学、疫苗⽣产。
9、McCoy5A培养基
1959年MeCoy为⾁瘤细胞设计,BSS+40种成分。可⽀持多种(如⾻髓、⽪肤、肺和脾脏等)的原代移植物的⽣长,除适于⼀般的原代细胞培养外,主要⽤于作组织活检培养、⼀些淋巴细胞培养以及⼀些难培养细胞的⽣长⽀持。例如Jensen⼤⿏⾁瘤成纤维细胞、⼈淋巴细胞、HT-29、BHL-100等上⽪细胞。
10、L15 细胞培养基
L-15培养液适⽤于快速增殖瘤细胞的培养,⽤于在CO2缺乏的情况下培养肿瘤细胞株。此培养液采⽤磷酸盐缓冲体系,氨基酸组成进⼀步改良,并由半乳糖替代了葡萄糖。
⾄于选择何种培养基并没有⼀定的标准,有⼏点建议可供参考:
(1)建⽴某种细胞株所⽤的培养基应该是培养这种细胞⾸选的培养基。可以查阅参考⽂献,或在购买细胞株时咨询。也可以在⼀些⽣物公司的⽹站上搜索,如Invitrogen⽹站上有⼀个Cell Line Database的⼯具,选择你感兴趣的细胞类型,它就会弹出推荐的培养基、⾎清和转染试剂等,有时还有优化好的
转染步骤,很⽅便。
(2) 其它实验室惯⽤的培养基不妨⼀试,许多培养基可以适合多种细胞。
(3) 根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如⼩⿏细胞株多选RPMI1640 。
(4) ⽤多种培养基培养⽬的细胞,观察其⽣长状态,可以⽤⽣长曲线、集落形成率等指标判断,根据实验结果选择最佳培养基,这是最客观的⽅法,但⽐较繁琐。
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