低强度脉冲场超声促进人脂肪间充质干细胞的增殖和黏附
陈  扬，黄邓高，高元慧，王顺兰，曹  卉，郑琳麟，何浩伟，罗思琴，肖敬川，张应爱，张淑芳
文题释义：
CCK-8增殖实验：CCK-8试剂化学名是2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H -四唑单钠盐，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄甲臜产物(Formazan)，生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。
转录组测序技术：用高通量测序技术把mRNA 、smallRNA 和noncoding RNA 的序列测出来，全面快速地获取某一物种特定器官或组织在某一状态下的几乎所有转录本，反映出它们的表达水平。
摘要
背景：间充质干细胞是目前组织工程和再生医学研究的热点之一，然而如何在体外进行干细胞的有效扩增以满足临床需求仍是研究者们面临的难题。
目的：探讨低强度脉冲场超声对人脂肪间充质干细胞增殖和黏附的影响。
方法：取第3代人脂肪间充质干细胞，在人脂肪间充质干细胞培养24，48，72 h 时以0，10，30，50 mW/cm 2
低强度脉冲场超声强度进行第1，2，3次刺激，每次刺激时间为5 min ，刺激结束后将细胞置于培养箱继续培养24 h ，然后采用CCK-8实验筛选最佳刺激条件。选用 30 mW/cm 2强度刺激2次后的细胞为实验组进行后续实验，0 mW/cm 2刺激为对照组。流式细胞仪术检测细胞表面标志物；免疫组化染观察细胞增殖相关抗原Ki-67和黏着斑激酶FAK 的表达；RT-PCR 检测细胞增殖通路相关基因Cyclin D1和c-myc 的表达；转录组测序检测转录水平基因的变化。
结果与结论：①30 mW/cm 2强度连续刺激2次是促进人脂肪间充质干细胞增殖的最佳条件；②与对照组相比，30 mW/cm 2
低强度脉冲场超声刺激后细胞表面标志物未改变，增殖相关基因CyclinD1、c-myc 和黏着斑激酶FAK 表达上调；③转录组测序结果显示有27个基因出现显著性差异，其中15个基因上调，12个基因下调；④结果表明，低强度脉冲场超声通过上调CyclinD1、c-myc 基因和FAK 的表达，伴随转录组多个基因的调控，在细胞未分化的状态下，促进人脂肪间充质干细胞增殖。
关键词：干细胞；脂肪间充质干细胞；超声；低强度脉冲场超声；细胞增殖；细胞黏附；基因
Low-intensity pulsed ultrasound promotes the proliferation and adhesion of human adipose-derived mesenchymal stem cells
Chen Yang, Huang Denggao, Gao Yuanhui, Wang Shunlan, Cao Hui, Zheng Linlin, He Haowei, Luo Siqin, Xiao Jingchuan, Zhang Yingai, Zhang Shufang
Affiliated Haikou Hospital of Xiangya Medicine College, Central South University, Haikou 570208, Hainan Province, China
/10.12307.2021.003投稿日期：2020-06-20送审日期：2020-06-28采用日期：2020-07-23在线日期：2020-11-20中图分类号： R459.9；R394.2；R318文章编号：
2095-4344(2021)25-03949-07文献标识码：A
中南大学湘雅医学院附属海口医院，海南省海口市  570208
第一作者：陈扬，男，1979年生，海南省海口市人，汉族，副主任技师，主要从事临床检验诊断和细胞生物学研究。通讯作者：黄邓高，副研究员，中南大学湘雅医学院附属海口医院，海南省海口市  570208
共同通讯作者：张淑芳，研究员，教授，中南大学湘雅医学院附属海口医院，海南省海口市  570208/0000-0002-9927-1622(黄邓高)
基金资助：海南省自然科学基金(819QN386)，项目负责人：黄邓高；海南省自然科学基金(819QN390)，项目负责人：高元慧；海南省重大科技项目 (ZDZX2013003，ZDKJ2017007)，项目负责人：张淑芳；海南省自然科学基金(18A200137)，项目负责人：张应爱
引用本文：陈扬，黄邓高，高元慧，王顺兰，曹卉，郑琳麟，何浩伟，罗思琴，肖敬川，张应爱，张淑芳. 低强度脉冲场超声促进人脂肪间充质干细胞的增殖和黏附[J].中国组织工程研究，2021，25(25):3949-3955.
研究原著
Research Article
0  引言  Introduction
间充质干细胞是从骨髓中分离出来的一组非吞噬细胞，具有成纤维细胞样贴壁细胞的形态学特征。目前研究者们可以从不同器官中分离出干细胞，如骨髓来源间充质干细胞、脂肪来源间充质干细胞、脐带来源间充质干细胞、软骨和皮肤来源间充质干细胞[1-2]。由于脂肪间充质干细胞来源丰富且易于获得，是组织工程种子细胞的主要来源[3]，然而从100 mL脂肪组织中获得脂肪间充质干细胞的最大数量约为9.06×105个[4]。在临床细胞过程需要大量的脂肪间充质干细胞，最少的细胞输注量为2×106
个[5]，大多数需要108个[5]。因此，探索和开发高效的干细胞体外扩增培养技术是临床应用的关键。
低强度脉冲超声以高频、小振幅和脉冲压力波的形式通过皮肤将机械刺激传递给生物组织，是一种非侵入性方法，已得到广泛应用。一些研究人员已经使用低强度脉冲超声作用于人类造血祖干细胞[6]、人骨髓间充质干细胞[7-8]、人羊膜间充质神经[9]、神经嵴干细胞等[10]，作用于脂肪间充质干细胞的研究较少。另外，低强度脉冲超声作用于不同细胞的强度和刺激时间不一致，刺激后细胞增殖和功能的变化及其具体机制仍不清楚，值得进一步研究。该实验探讨低强度脉冲场超声对人脂肪间充质干细胞增殖和黏附的影响。
1  材料和方法  Materials and methods
1.1  设计对比观察细胞实验。
1.2  时间及地点  2018年12月至2020年6月在海口市人民医院完成。1.3  材料
1.3.1  实验试剂人脂肪间充质干细胞和培养基(广州赛业生物科技有限公司，#HUXMD-01001和#HUXMD-90031)；杜尔贝克磷酸盐缓液(D-PBS，#8119217)、胰酶消化液(Gibco 公司，#1897336)；细胞表面标志物抗体(CD105-PE，# 560839；CD73-PE，# 550257；CD34-PE，# 560941；CD45-PE，# 555481)(BD公司)；Trizol试剂(Life Technologies 公司，# 10296010)；MiniBE
ST Universal RNA 提取试剂盒、SYBR Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)试剂盒(TaKaRa公司，#9767&# RR820A)；CCK-8试剂盒(Dojindo公司，#PH629)；Ki-67 细胞增殖试剂盒(上海生工，#E607238)；FAK抗体(Cell Signaling公司，#71433)；DAPI染料(Life Technologies公司，# 4803S)。
1.3.2  超声刺激设备使用SonaCell(IntelligentNano公司，加拿大，SONACELL)在1.5 MHz时产生低强度脉冲场超声，占空比为20%，脉冲重复1 kHz，输出强度0-80 mW/cm2。超声发生器固定在细胞培养板的底部，在超声探头上涂抹适量超声凝胶，超声波通过超声凝胶进入细胞，然后将细胞和超声发生器置于细胞培养箱一起培养。
1.4  实验方法
1.4.1  人脂肪间充质干细胞的培养实验前准备并预热好人脂肪间充质干细胞培养基和PBS；将第1代人脂肪间充质干细胞从液氮中迅速取出，并转移至提前预热的37 ℃水浴锅内快速融化，然后迅速将细胞悬液转移至准备好的10 mL新鲜培养基内，充分混匀，1 100 r/min离心5 min，弃去上清，使用新鲜的培养基重悬细胞，接种于100 mm培养皿中，然后放入37 ℃，体积分数为5% CO2温箱中培养，24 h后换液，
Chen Yang, Associate chief technician, Affiliated Haikou Hospital of Xiangya Medicine College, Central South University, Haikou 570208, Hainan Province, China Corresponding author: Huang Den
ggao, Associate researcher, Affiliated Haikou Hospital of Xiangya Medicine College, Central South University, Haikou 570208, Hainan Province, China
Co-corresponding author: Zhang Shufang, Researcher, Professor, Affiliated Haikou Hospital of Xiangya Medicine College, Central South University, Haikou 570208, Hainan Province, China
Abstract
BACKGROUND: Mesenchymal stem cells are one of the hot topics in tissue engineering and regenerative medicine. However, how to effectively expand the stem cells in vitro to meet the clinical needs is still a challenge for researchers.
OBJECTIVE: To investigate the effect of low-intensity pulsed ultrasound on the proliferation and adhesion of human adipose-derived mesenchymal stromal cells.
METHODS:  The human adipose-derived mesenchymal stromal cells of the passage 3 were cultured for 24, 48 and 72 hours. The first, second and third times of stimulation were performed with 0, 10, 30, and 50 mW/cm2 low-intensity pulsed ultrasound intensity, and each stimulation time was 5 minutes. After the stimulation, the cells were placed in the incubator for 24 hours. CCK-8 test was us
ed to screen the best stimulation conditions. The cells stimulated twice with 30 mW/cm2 were selected as the experimental group for follow-up experiments, and 0 mW/cm2 for the control group. Flow cytometry was used to detect cell surface markers. Immunohistochemistry was used to observe the expression of proliferation related antigen Ki-67 and focal adhesion kinase FAK. RT-PCR was used to detect the expression of Cyclin D1 and c-myc. Transcriptome sequencing was used to detect the changes of transcription genes.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) 30 mW/cm2 continuous stimulation twice was the best condition to promote the proliferation of human adipose-derived mesenchymal stem cells. (2) Compared with the control group, cell surface markers remained unchanged after 30 mW/cm2 low-intensity pulsed ultrasound stimulation, and the expression of proliferation-related genes CyclinD1, c-myc and focal adhesion kinase FAK were up-regulated. (3) Transcriptome sequencing results showed that there were significant differences in 27 genes, among which 15 genes were up-regulated and 12 genes were down-regulated. (4) It
is concluded that low-intensity pulsed ultrasound promotes human adipose-derived mesenchymal stromal cells proliferation in undifferentiated cells by upregulating the expression of CyclinD1, c-myc and FAK, accompanied by regulation of multiple transcriptome genes.
Key words: stem cells; adipose-derived mesenchymal stem cells; ultrasound; low-intensity pulsed ultrasound; cell proliferation; cell adhesion; gene Funding: the Natural Science Foundation of hainan Province, No. 819QN386 (to hDg), No. 819QN390 (to gYh), No. 18A200137 (to ZYA); Major Scientific and Technological Project in hainan Province, No. ZDZX2013003 (to ZSF), No. ZDKJ2017007 (to ZSF)
How to cite this article: CheN Y, hUANg Dg, gAo Yh, WANg SL, CAo h, ZheNg LL, he hW, LUo SQ, XiAo JC, ZhANg YA, ZhANg SF. Low-intensity pulsed ultrasound promotes the proliferation and adhesion of human adipose-derived mesenchymal stem cells. Zhongguo Zuzhi gongcheng Yanjiu. 2021;25(25):3949-3955.
当细胞汇合至80%-90%，使用0.25%胰酶-EDTA消化并传代，取第3代细胞做后续实验。
1.4.2  CCK-8 实验筛选最佳超声刺激强度和时间取第3代人脂肪间充质干细胞，将细胞浓度调整为2×107 L-1，取1 mL接种于12孔板，培养24 h后更换新鲜的培养基，分别以0，10，30，50 mW/cm2低强度脉冲场超声强度进行第1次刺激，然后在培养48，72 h时进行第2，3次刺激，每次刺激时间为5 min。刺激结束后将细胞置于培养箱继续培养24 h，吸
去全部的培养基，加入新鲜培养基200 μL，同时加入CCK-8试剂20 μL，置于培养箱内继续培养4 h，
取100 μL培养基上清至96孔板中，使用酶标仪于450 nm处检测吸光度值。1.4.3  Ki-67细胞增殖和FAK细胞黏附实验根据上述实验的结果选用30 mW/cm2强度刺激2次后的细胞进行后续实验，将30 mW/cm2组设为实验组，0 mW/cm2组设为对照组。在室温下，细胞用40 g/L多聚甲醛固定45-60 min，PBS清洗3次，然后于新配置的0.1% Triton X-100(溶于柠檬酸钠)室温孵育5-10 min，PBS清洗3次；加入3% BSA封闭液孵育30-45 min，PBS洗3遍；加入抗Ki-67抗体(1∶25)或抗FAK抗体(1∶100)，4 ℃孵育过夜；第1天将细胞从4 ℃转至室温孵育60 min，PBS清洗3次；加入相应的二抗(1∶100)避光孵育60 min，PBS洗3次，DAPI进行细胞核染5 min，置于荧光显微镜下观察。
1.4.4  细胞表面标志物检测根据上述实验的结果选用30 mW/cm2强度刺激2次后的细胞进行后续实验，将30 mW/cm2组设为实验组，0 mW/cm2组设为对照组。使用0.25%胰酶-EDTA消化细胞，D-PBS清洗2次，细胞重悬于D-PBS中，细胞浓度为1×108 L-1，每个流式管取样1 mL，3 000 r/min离心5 min，弃去上清，加入适量荧光标记的单克隆抗体(CD105-PE、CD73-PE、CD34-PE和CD45-PE)，室温避光孵育30 min，最后用0.3 mL D-PBS重悬细胞，上流式细胞仪检测，运用BD FACSDIVA软件进行分析。
1.4.5  RT-PCR检测细胞增殖相关基因的表达根据上述实验的结果选用30 mW/cm2强度刺激2次后的细胞进行后续实验，将30 mW/cm2组设为实验组，0 mW/cm2组设为对照组。采用Trizol法和RNA提取柱纯化法试剂盒提取细胞总RNA。参照PrimeScrip RT Master Mix (Perfect Real Time)试剂盒说明书，配
制反转录反应液，轻柔混匀后进行反转录反应，合成cDNA第一链。参照SYBR Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)试剂盒说明书配制荧光定量PCR反应液，充分混匀后放置于实时荧光PCR仪中进行荧光定量PCR反应。实验条件：预变性95 ℃，30 s；PCR反应(循环数：50)95 ℃，5 s；55 ℃，30 s；
72 ℃，30 s；熔解曲线Melt Curve Stage(循环数：1)：95 ℃，60 s；55 ℃，30 s；95 ℃，30 s。引物设计见表1。
1.4.6  转录组实验根据上述实验的结果选用30 mW/cm2强度刺激2次后的细胞进行后续实验，将30 mW/cm2组设为实验组，0 mW/cm2组设为对照组。采用RNeasy Mini试剂盒标准操作流程进行样品的总RNA抽提，然后mRNA富集或rRNA去除、片段化、一链和二链cDNA合成、末端补平、3'端加A、接头连接、PCR扩增、文库质控、文库标准化和簇生成，最后上机测序和数据分析。测序原始数据经过去接头序列和低质量序列等方式处理，使用软件为Fastp。质控后的数据比对到人类(Homo sapiens)基因组上(hg38)，使用软件为HISAT2 v.
2.0.5。利用Sringtie软件进一步对匹配上的reads进行注释与定量，利用R包edagR进行标准化与差异统计。1.5  主要观察指标①人脂肪间充质干细胞的增殖情况；②人脂肪间充质干细胞的增殖相关抗原Ki-67和黏着斑激酶FAK 的表达；③人脂肪间充质干细胞的Cyclin D1和c-myc基因表达；④人脂肪间充质干细胞的转录水平基因表达。
1.6  统计学分析所有实验均重复3次以上，数据以x-±s表示，采用SPSS 20.0软件分析。首先对数据行正态性检验，若不符合正态分布，通过正态性转换后再下一步处理。两组数据分析采用独立t 检验，多组数据采用单因素方差分析(one way-ANOVA)，P < 0.05为差异有显著性意义。
2  结果  Results
2.1  筛选最佳刺激条件在人脂肪间充质干细胞培养24，48，72 h时以0，10，30，50 mW/cm2低强度脉冲场超声强度进行第1，2，3次刺激，每次刺激时间为5 min，刺激结束后将细胞置于培养箱继续培养24 h，然后采用CCK-8检测细胞增殖活性，结果发现刺激2次后，各组细胞增殖活性均高于对照组(P < 0.05)，其中30 mW/cm2组增殖活性最大，在第3次刺激后，10，30 mW/cm2组增殖能力高于对照组(P < 0.05)，同样30 mW/cm2组增殖活性最大。因此选用30 mW/cm2强度刺激2次后的细胞进行后续实验。将30 mW/cm2组设为实验组，0 mW/cm2组设为对照组。镜下观察30 mW/cm2组的细胞数量增多，而细胞形态不变，见图1。
2.2  细胞增殖相关抗原Ki-67和黏着斑激酶FAK的表达如图2所示，与对照组相比，30 mW/cm2组的FAK和Ki-67表达均增高。
2.3  人脂肪间充质干细胞表面标志物的表达采用流式细胞术检测低强度脉冲场超声刺激后人脂肪间充质干细胞表面标志物(CD73、CD105、CD45和CD34)的表达。由图3和表2可见，与对照组(0 mW/cm2)
比较，30 mW/cm2组细胞表面标志物的表达无显著变化。
2.4    人脂肪间充质干细胞的Cyclin D1和c-myc基因表达采用RT-PCR检测增殖信号通路基因CyclinD1和c-myc的表达。表1 ｜RT-PCR引物设计
Table 1 ｜Design of RT-PCR primers
基因引物序列(5'-3')
GAPDH-F ATC ACC ATC TTC CAG GAG CGA
GAPDH-R TTC TCC ATG GTG GTG AAG ACG
CyclinD1-F AAT GAC CCC GCA CGA TTT C
CyclinD1-R TCA GGT TCA GGC CTT GCA C
c-myc-F AAA CAC AAA CTT GAA CAG CTA C
c-myc-R ATT TGA GGC AGT TTA CAT TAT GG
研究原著
32
1
0 mW/cm 2                                                    30 mW/cm 2
相对增殖率
0 d          1 d          2 d          3 d
0 mW/cm 2
10 mW/cm 230 mW/cm 250 mW/cm 2b a a
a
c 图注：a P  < 0.05，b P  < 0.01，c
P  < 0.001
图1｜低强度脉冲场超声刺激后人脂肪间充质干细胞形态(×100)和增殖活性
Figure 1｜Morphology and proliferation activity of human adipose-derived mesenchymal stem cells after low-intensity pulsed ultrasound stimulation (×100)
proliferation30 m W /c m 2                  0 m W /c m 2
DAPI                                          FAK                                        Ki-67                                            Merge
图注：黄箭头所示黏着斑激酶FAK 阳性表达；白箭头所示细胞增殖相关抗原Ki-67阳性表达图2｜低强度脉冲场超声刺激后人脂肪间充质干细胞的Ki-67和FAK 表达(×100)
Figure 2｜FAK and Ki-67 expression of human adipose-derived mesenchymal stromal cells after low-intensity pulsed ultrasound stimulation (×100)
30 m W /c m 2                        0 m W /c m 2
图3｜低强度脉冲场超声刺激后人脂肪间充质干细胞表面标志物的表达
Figure 3｜Expression of surface markers on human adipose-derived mesenchymal stromal cells after low-intensity pulsed ultrasound stimulation
1.5
1.00.50
相对表达  CyclinD1      c-myc
0 mW/cm 230 mW/cm 2
a
a
图注：与对照组(0 mW/cm 2)比较，a
P  < 0.05
图4｜低强度脉冲场超声刺激后人脂肪间充质干细胞的Cyclin D1和c-myc 基因表达
Figure 4｜Expression of Cyclin D1 and c-myc genes of human adipose-derived mesenchymal stromal cells after low-intensity pulsed ultrasound stimulation
图4结果显示，与对照组(0 mW/cm 2
) 比较，
30 mW/cm 2组的CyclinD1和c-myc 表达上调(P  < 0.05)，差异有显著性意义。2.5  转录组实验结果
2.5.1  差异分析  基因的差异表达分析
使用edgeR 软件进行。首先根据基因的原始reads 数生成相对表达量，其单位为CPM(每百万计数)；然后根据分组情况计算差异表达基因。差异表达倍数通过log2转换。显著差异表达基因的筛选阈值为P 值< 0.05且|log2(FC)|≥ 1。图5A 为基因散点图，图5B 为显著差异表达基因热图。与对照组相比，低强度脉冲场超声刺激组有15个基因上调和12基因下调，差异有显著性意义。2.5.2  差异基因GO 通路注释及富集  使用分组差异基因比较中显著(q 值 < 0.05)结果进行GO 的注释与富集。注释和富集分析的方法为R 语言clusterProfiler 扩展包，同时使用FDR 方法进行多重假阳性矫正。GO 显著富集(P 值 < 0.05)的主要通路进行注释。结果显示差异基因主要富集的前30类生物学组分为分子功能(序列特异性DNA 结合和核酸绑定转录因子活性等)、生物学进程(RNA 合成和代谢进程、核酸模板转录调节和染体结构等)和细胞组分(包括细胞核内腔、核浆和蛋白复合体等)，见图6A 。
2.5.3  差异基因KEGG 通路注释及富集使用分组差异基因比较显著(P  < 0.05)的结果进行KEGG 的注释与富集。注释和富集分析的方法为R 语言clusterProfiler  扩展包，同时使用FDR 方法进行多重假阳性矫正。对KEGG 显著富集(P < 0.05)的主要通路进行注释并绘制柱状图。实验结果显示，相关基因主要富集到微环
境信号转导、氨基酸代谢、细胞体和细胞运动性等功能，见图6B 。
3  讨论  Discussion
研究显示低强度脉冲场超声能促进人脂肪间充质干细胞的增殖和黏附。CCK-8检测结果显示30 mW/cm 2
强度刺激2次为最佳增殖条件，增殖后的细胞形态与间充质细胞保持一致，呈梭形贴壁生长
[11-12]
。低强度脉冲场超声刺激后
细胞表面标志物CD105和CD73呈阳性表达，CD34和CD45呈阴性表达，与对照组细胞表面标志物无显著差异，符合
间充质干细胞的特征
[13-14]
。以往研究认为高强度的低强度脉冲场超声和长时间的刺激会促进干细胞向成骨和成脂分 化
[15-16]
。在此研究中30 mW/cm 2
的低强度脉冲场超声刺激下，
与对照组相比，细胞表面标记物未见差异，提示30 mW/cm 2
的低强度脉冲场超声在人脂肪间充质干细胞未分化的情况下
促进细胞增殖，同时维持干细胞的特性。
以往关于低强度脉冲场超声促进不同干细胞增殖途径主要有MAPK/ERK 、ERK1/2和PI3K-AKT 信号通路
[8-10]
。 BUDHIRAJA 等[7]、XIE 等[8]和REN 等[17]都认为低强度脉冲场超声是通过上调CyclinD1的表达促进细胞增殖。CyclinD1是细胞周期信号传导的早期组成部分，其与细胞周期蛋白依赖
性激酶致一系列转录激活和细胞周期信号分子的表达，驱动细胞进入细胞周期的下一阶段
照组相比，有研究显示无外源培养条件下培养的人脂肪组织源性干细胞c-myc 脉冲场超声刺激后度脉冲场超声刺激促进细胞增殖是通过上调c-myc 通过磷酸化作用促进细胞增殖的主要调控因子录，帮助完成细胞周期进程；其二是通过磷酸化表2 ｜两组人脂肪间充质干细胞表面标志物表达        (x -±s ，n =3，%)Table 2 ｜Expression of surface markers in human adipose-derived
mesenchymal stromal cells in the stimulation and control groups
组别
CD73CD105CD45CD340 mW/cm 2组99.03±0.1595.00±0.79  1.36±0.50  1.06±0.5030 mW/cm 2组
98.87±0. 25
95.46±1.19
1.00±0.36
1.20±0.30
A
图注：图中A 为散点图，红和蓝分别代表上调和下调
基因。Group1为对照组，Group2为30 mW/cm 2组；
B 为热图，对照组包括zhuanluzu01，zhuanluzu02和zhuanluzu03， 30 mW/cm 2组包括zhuanluzu11，zhuanluzu12和zhuanluzu13。红和绿分别代表上调和下调基因
图5｜低强度脉冲场超声刺激后人脂肪间充质干细胞转录组差异基因分析
Figure 5｜Analysis of gene differences in transcriptome sequencing results of human adipose-derived mesenchymal stromal cells after low-intensity pulsed ultrasound stimulation
图注：图中A 为GO 富集分析图；B 为KEGG 富集分析图图6｜两组差异基因的GO 和KEGG 富集分析
Figure 6｜GO and KEGG enrichment analysis of differentially expressed genes in the stimulation gro
up and the control group A

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