细胞核增殖相关抗原 Ki67 在子宫内膜病变中的表达 *
马晓欣 李晓晗① 李 娜 张淑兰 陆景明
中国医科大学附属第二医院妇产科 (沈阳市 110004)
摘 要 目的: 研究 Ki67 抗原在子宫内膜病变中表达的规律及其在子宫内膜癌的发生和预后评估的临床价值。方法: 用免疫组化(SP) 法检测子宫内膜增殖症及非典型增生各 30 例, 子宫内膜癌 90 例; 对照组 30 例, 其中包括增生期及分泌期子宫内膜各 15 例, 观察 Ki67 抗原在不同内膜病变及正常内膜中的阳性表达率。结果: Ki67 抗原在分泌期内膜中几乎没有表达, 在增生期内膜中有弱表达; 在增殖症及非典型增生中有表达, 但与对照组比较, 无统计学意义(P>0.05) , 且两者之间比较, 亦无统计学意义(P>0.05) ; 在子宫内膜癌组织中表达明显增高, 显著高于良性病变组和对照组(P<0.01) 。而且 Ki67 抗原的阳性率随着临床分期及细胞分化级别的升高及淋巴转移的存在而增加。结论: Ki67 抗原与子宫内膜癌发生密切相关, 抗原过度表达提示子宫内膜癌患者预后不良。
proliferation关键词 子宫内膜病变 Ki67 抗原 细胞核增殖相关抗原
中图分类号: R737.33 文献标识码: A 文章编号: 1000- 8179(2005)19- 1104- 03
The Expression of the Proliferation marker Ki67 in Endometrial Disease Ma Xiaoxin Li Xiaohan Li Na et al Department of Obstetrics and Gynecology, the Second Affliated Hospital of China Medecal University, Shenyang
Abstract Objective: To investigate the expression of the proliferation marker Ki67 in endome-trial diseases and its clinical significance for the incidence of endometrial carcinoma and evaluation of prognosis. Method: Experimental group: 150 cases including 30 of endometrial hyperlpasia, 30 of atypical proliferation and 90 of endometrial carcinoma; control group: 30 cases including 15 of prolifer-ative endometrium and 15 of secretory endometrium. The expression of Ki67 in these cases with im-munohistochemistry technology was detected. Results: There was almost no Ki67 expression in secreto-ry endometrium and the expression was mild in proliferative endometrium. In endometrial hyperplasia and atypical proliferation, Ki67 expression can be observed but there was no statistically significance between the two groups (P>0.05).
Compared with control groups respectively, there was no significance too (P>0.05). In endometrial carcinoma, the expression increased obviously,which is higher than benign diseases and control group prominently (P<0.01). The positive rate of Ki67 antigen increased with the increasing of clinical phase and grade of cellular differentiation. Conclusion: Ki67 antigen is related to the incidence of endometrial carcinoma. The over expression of Ki67 indicates a poor prognosis of pa-tients with endometrial carcinoma.
Key words Endometrial disease Ki67 Nuclear proliferation- associated antigen
细胞的增殖与肿瘤的发生、浸润、种植与转移过程相关。评价细胞的增殖状态对研究肿瘤的生物学行为, 判断其危险性具有重要意义。Ki67 是一种与增殖细胞相关的核抗原, 是目前应用最广泛的增殖细胞标志之一, 在乳腺癌、鼻咽癌、膀胱癌等常见, 但在子宫内膜癌报道较少。本文采用免疫组化法检测Ki67 抗原在正常宫内膜, 宫内膜增殖症, 非典型增生及子宫内膜癌中的表达, 探讨其在子宫内膜癌发生、发展中的作用及其作为子宫内膜癌的预后指标的价值。
1 材料与方法
1.1 材料和试剂
所有标本均取自中国医科大学附属二院妇科1990 年 8 月～2003 年 8 月经宫腔镜检查、诊刮及开腹手术子宫切除的子宫内膜组织, 入选病例已除外肝肾疾病, 前 2 周未用激素。实验组: 子宫内膜增殖症 30 例, 非典型增生内膜 30 例, 子宫内膜癌90 例。子宫内膜癌组年龄 34～76 岁, 中位年龄 62岁。Ⅰ期 46 例, Ⅱ期 21 例, Ⅲ期 20 例, Ⅳ期 3 例; 按组织学类型分, 子宫内膜样腺癌为 86 例, 腺鳞癌 3例, 浆液性乳头状腺癌 1 例; 有淋巴结转移 17 例, 无淋巴转移 73 例; 高、中、低分化(G1, G2, G3) 各 30 例。
对照组: 增生期和分泌期宫内膜各 15 例。所有标本经 10%甲醛常规固定, 石蜡包埋。所有诊断均经病理证实。试剂: 单克隆抗体 Ki67 及 SP 试剂盒均由广州中山公司提供。
1.2 方法
免疫组化采用 SP 法, 取石蜡标本, 4μm 连续切片后, 先经病理确认, 再常规脱蜡到水, 3%双氧水温孵育 10min、水洗, 热修复(0.01M pH7.4 EDTA) 后降至室温水洗, 0.05M PBS 浸泡 2min, 10%正常血清封闭, 滴加一抗 Ki67 工作液1:50, 4℃孵育过夜后升至室温, 0.05M PBS
洗 3 次, 每次 5min, 滴加二抗(生物素标记) 在 37℃孵育 35min, 0.05M PBS 洗 3 次, 每次 5min, 二氨基联苯胺(DAB) 显 5min, 自来水充分水洗, 苏木素对比染 10min, 水洗返兰 30min, 脱水后封片。以 PBS 代替一抗作阴性对照, 已知阳性组织片作阳性对照。
1.3 判断标准
Ki67 阳性应为核境界清晰的棕、棕褐颗粒, 每张切片随机计数 5～10 个高倍视野 1 000 个细胞中阳性细胞所占百分比。≤5%为- , 6%～25%为+(图 1), 26%～50%为++(图 2), ≥51%为+++(图 3)。
1.4 统计学方法
采用 SPSS 统计软件包进行 χ2检验。P<0.05 为差异有显著性。
2 结果
2.1 Ki67 抗原在正常子宫内膜及不同病变组织中的表达
Ki67 抗原表达呈现子宫内膜癌>非典型增生>增殖症>正常增殖期内膜>正常分泌期内膜。见
表 1。
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2.2 Ki67 抗原表达与子宫内膜癌的关系
子宫内膜癌中 Ki67 阳性率与子宫内膜癌的病理组织分化程度、临床分期、淋巴结转移密切相关(P<0.01)。见表2。
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图 1 免疫组化 Ki67 染阳性(+) , 标记在细胞核内免疫组化 SP 法×200
图 2 免疫组化 Ki67 染阳性(++) , 标记在细胞核内免疫组化 SP 法×200
图 3 免疫组化 Ki67 染阳性(+++) , 标记在细胞核内免疫组化 SP 法×200
3 讨论
肿瘤的生长是一个复杂而有序的多阶段生物学过程。Ki67 被认为是癌变人高危个体的生
物学标志物之一[1]。Ki67 即细胞核相关抗原, 是增殖性细胞核的标记物, 仅分布于细胞核内, 它出现在除 G0期和 G1期所有细胞周期中的特异性非组化蛋白, 与细胞的合成代谢有关[2]。它表达于增殖细胞中, 在静止细胞中很少表达, 它在子宫内膜病变的发生发展中起到重要的作用。
肿瘤增殖活性 Ki67 的检测对于判断肿瘤的恶性程度, 预见其生物学行为有重要的意义。ertens[3]报道, 由于卵巢激素的周期性变化, 使子宫内膜亦出现周期性变化, Ki67 在增生期内膜中有表达, 而在分泌期内膜表达则显著减少。在卵巢肿瘤中 Ki67 与卵巢肿瘤良恶性, 组织学分级及预后有关[4]。还有人认为 Ki67 在卵巢肿瘤组织中随组织学分级、临床分期的升高而增加, 与卵巢癌组织大小呈正相关, 与淋巴结转移无关[5]。而在胰腺癌中 Ki67 标记指数与组织分级, 临床分期, 淋巴转移密切相关[6]。近年来,Ki67 主要用于观察恶性肿瘤的生长, 在良性听神经肿瘤中也有该指标的表达, 且与其生长指数成正相关, 与病程成负相关[7]。本研究采用免疫组化法对正常宫内膜(分泌期及增生期), 子宫内膜增殖症, 非典型增生, 子宫内膜癌 Ki67 抗原的表达进行检测, 其结果显示: Ki67 抗原在正常子宫内膜、子宫内膜增殖症、非典型增生阳性表达率依次呈逐步升高趋势,两组比较无统计学意义。而在内膜癌组织中, Ki67抗原表达明显增高, 显著高于良性病变组和对照组且有统计学意义, 这与 Morsi
等学者有相同的实验结论[8]。表明在子宫内膜癌发生之前并无 Ki67 抗原广泛表达, 因此 Ki67 可作为鉴别肿瘤良、恶性的辅助指标。
同时本实验还显示: 随子宫内膜癌的临床分期的增加、淋巴结转移的有无, Ki67 阳性表达率呈上升趋势; 且肿瘤细胞分化级别越差, 其恶性度越高,Ki67 增殖活性越强, 说明 Ki67 抗原可作为评价子宫内膜癌增殖、分化状态的重要指标, 有助于判断肿瘤的侵袭力。由此可见, Ki67 在子宫内膜癌发生、发展的过程中起到了重要的作用。它不仅能客观反映内膜癌的增殖活性, 并能估计癌细胞发生浸润、转移的潜能。因此认为 Ki67 为子宫内膜癌发生﹑发展, 预后及诊断的良好指标之一。对于早期预测子宫内膜癌的复发、恶化及的选择有重要的临床意义。
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8 Morsi HM, Leers MP, Jager W, et al. The patterns of expression of an apoptosis- related CK18 neoepitope, the bcl- 2 proto- onco-gene, and the Ki67 proliferation marker in normal,hyperplastic,and malignant endometrium[J]. Int J Gynecol Pathol, 2000, 19(2):118~126
(2004- 11- 09 收稿)(2005- 01- 07 修回)( 王展宏校对)

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