Image pro-Plus6.0 使用教程
目录
一、入门 (2)
二、AOI技巧(1) (9)
三、AOI技巧(2) (14)
补充:不规则区域计数 (20)
四、编制宏 (23)
五、计数 (27)
六、校正标尺 (33)
七、几何测量 (41)
八、图象分析策略 (43)
九、其他有趣功能 (45)
十、光密度 (51)
十一、免疫组化光密度测量 (56)
十二、macro (58)
十三、荧光强度测量 (64)
柏奥易杰-整理
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一、入门
既然是处理图片,当然是先要打开一张要处理的图片嘛。在你开始学习使用IPP之前,我假定你是会初步使用office及photoshop等常用程序的。如果一点电脑常识也没有,那还是先学点简单的程序再回来玩IPP。
因此我跳过了打开图片,copy、paste、象素的概念之类最基础的知识与操作。这些用不着我来讲。
这张照片中的黄部分是免疫组化染的阳性表达成分。处理目标是通过测量图片中黄部分的"黄"度来反映相应蛋白表达的的"量"。对该图片进行观察,可以看到图片中主要有三种主要颜,一是染成蓝的细胞核,二是呈现出黄的胞浆,三是细胞间的空隙区域,呈现出浅蓝,是为背景。所以首先要把图片中呈现黄的区域给挑选出来,然后才是测量这些挑出来的区域的各种测量参数,如面积、平均半径、周长、光密度等等。这部分需要挑出来进行测量的区域是我们最感兴趣的地方,叫作AOI(area of interest)。AOI 是 IPP 中最有用最重要的概念。如何能够准确地选取 AOI 就是使用 IPP 的关键操作。一旦准确地选取了AOI,下面的测量分析就好办了。在其他的测量软件中,选择这种不规则的区域一般只能用手拖着鼠标来画,而在IPP 程序里,可以通过设置颜范围让电脑来帮助你选择这些不规则区域,这样的选择就准确多了。可以说,使用IPP的要点就是灵活地使用各种AOI工具准确地把那些需要测量的区域给挑选出来。对不同的图片,需灵活地使用各种适当的AOI工具,先用最简单的,当然,简单的工具只能作简单的事,就这张图片来说,用简单工具选黄有点困难,我们先用它来选择蓝的细胞核吧。
点击measure---count/size,弹出分类测量窗口。
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在窗口中选中manual,再点击select color,弹出颜选择窗口segmentation,这个工具是IPP最有特的颜选取工具之一。用好这个工具是使用IPP的要点。
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对于目标颜鲜明的图片,用吸管工具是最简单的。点一下吸管图标,在目标区域点一下,就可以选中该点的颜,当然一下是不可能完全选中所需要指定的全部区域,可以在未选中的地方接着再点,这样多次选取,直到把想选中的区域全部选中为止。
在这张示例图中,选中的蓝细胞核部分被标上了红。用红框圈起来的四个工具按纽分别是:吸管、撒消上一步操作、橡皮擦、全部清除。下在的小方框里则是吸管位置的选取颜。
图片中被标上红的区域被定义为一个class,其中每一个独立的小区块被定义为这个class中的一个object。以此图为例,图中深蓝的部分是细胞核,因此所有的细胞核都被选中成一个class,其中每一个细胞核就是一个object。
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选取完AOI后,点击close回到count/size窗口,下一步就可以对选中的object进行测量操作了。
点击count/size窗口中的measure菜单,点select measure,这是选择要进行何种测量操作,在弹出的测量选择窗口左侧列出了各种可用的测量选项,最常用的测量有:
area 面积 density(mean)
平均光密度 diameter 直
径
image pro plusIOD(integrated optical density)累积光密度在相应的项目上点一下,该测量项目就被选到中间的窗口中了,同时关于该测量的详细说明会显示在最右边。如果想取消某个已选中的测量项目,则在左边窗口中该项目上再点击一下就可以了。
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