免疫组化实验方法
一、 材料
免疫组化试剂：多聚赖氨酸、一抗**** 、二抗****（河北博海生物工程开发有限公司）、显剂DAB（河北博海生物工程开发有限公司）
二、 方法
免疫组化方法的具体步骤为：1、取材：取实验组和对照组动物组织尽可能新鲜，PBS(磷酸盐缓冲液)洗，取小于0.5cm×0.5cm×0.1cm组织块，2、固定和包埋：用4%多聚甲醛（0.1MPBS,PH7.2～7.4,含0.1%DEPC）进行固定，经70%乙醇30分钟、80%乙醇30分钟、90%乙醇30分钟两次、95%乙醇30分钟两次、100%乙醇30分钟两次、二甲苯透明30分钟两次、55℃石蜡中30分钟两次、用铜制模具包埋组织块； 3、切片：将厚度5um的组织切片附于经多聚赖氨酸附膜的载玻片上，60℃过夜；4、脱蜡、入水：将切片浸于二甲苯中5分钟两次、100%乙醇5分钟两次、95%乙醇5分钟两次、90%乙醇5分钟两次、85%乙醇5分钟两次、75%乙醇5分钟两次、自来水冲洗、PBS洗两次；5、1%甲醇双氧水,室温10分钟, 蒸馏水洗1次,
0.1MPBS洗3次×5分钟;6、切片上滴加抗原修复液,室温10分钟，0.1MPBS洗3次×5分钟;7、切片上滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟。甩去多余液体，不洗。8、切片上滴加第一抗体，4℃过夜，0.1MPBS洗3次×5分钟。9、切片上滴加生物素化第二抗体（IgG），37℃20分钟，0.1MPBS洗3次×5分钟；10、切片上滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液（S-A/HRP），37℃20分钟，0.1MPBS洗3次×5分钟； 11、DAB显：使用DAB显试剂盒1ml蒸馏水加显剂A、B、C各一滴，混匀，加至标本上，显6分钟，充分水洗；12、苏木素复染细胞核1分钟，充分水洗、1%盐酸酒精分化、1%胺水反蓝、充分水洗、经70%乙醇5分钟、image pro plus80%乙醇5分钟、90%乙醇5分钟两次、95%乙醇5分钟两次、100%乙醇5分钟两次脱水、二甲苯透明5分钟两次、中性树脂封片，13、显微镜观察：选择实验组和对照组的阳性和阴性组织相、进行100×和400×的显微照相。14、图象分析：选择有意义的组织相，经登录、编号、采集、分析、读取数据、最后存盘。
注意：划线部分是否与设计一致
仪器设备
一、显微镜：日本奥林巴斯  BX51T-PHD-J11
二、CMOS: 日本奥林巴斯
三、多功能真彩细胞图象分析管理系统：美国Media Cybernetics 公司Image-Pro Plus 
四、切片机：德国莱卡RM2016
五、电子天平：瑞士METTER AE100型
六、移液器：德国EPPENDORF
七、干燥箱：日本三洋MIR-153型
八、低温冰箱：日本三洋MDF-382E型
九、恒温水浴箱：江苏太仓医用仪器厂DSHZ-300型
十、医用微波炉：浙江临安爱迪仪器厂YWY781B型

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