LightCycler® Nano简单操作及维护
建立新的实验,打开已经做过的实验或者已经建立的实验模板,保存任何修改到目前文件中,保存为另外的文件,关闭当前的文件,查看仪器序列号及联机。
连接电源,仪器盖子的状态颜首先呈蓝,然后变为绿,说明仪器自检通过,可以使用。如果盖子打开颜会由蓝变红,提示盖子应该关闭。
建立反应体系
将预混反应液加入LightCycler® 透明8联管,然后加入相应模板,反应体积10~100 uL,定性分析时务必设置阴阳性反应体系。务必确保管盖正确盖上,以免运行过程发生泄漏。将八联管3000rpm,离心30秒。   
程序设置
运行LightCycler® Nano软件,点击New,建立新的运行程序,在 Run Settings界面 确定光学设置Optics Settings,选择染料或者探针即可。在Profile 界面确认使用的升降温程序,通过点击Add,添加预设好的程序在Hold方框中根据实际需要输入温度(Temp),孵育时间(Hold),升降温速度(Ramp)。
样品设置
设置完程序,然后可以在Samples界面输入样品信息。在Samples窗口点击  添加样品名称,在Targets窗口点击添加扩增基因名称并选择所标记探针基团,选中不同孔位,点击Set赋予不同的模板和引物组合,选中多个孔位,点击Number All,可以方便的按大小顺序自动给样品命名,选择Std可以输入标准品的浓度,也可以选择Unk设为待测样品,Neg表示阴性对照。
也可以选择在实验运行完成后设置样品信息,最后在 Experiment任务栏点击 Save保存即可。
运行实验
插上电源启动仪器,放置装有试剂和样品的8联管,当电脑与仪器连接成功,在状态栏点击Start Run ,用Data界面监控运行过程。在Selected Channels窗口选择采用的探针通道,可以查看每个样品的扩增曲线,也可查看实验剩余时间及进程。
如何用U盘驱动仪器
准备一个空的U盘,插入电脑,点击Start Run,选择Start Run From USB根目录路径选择U盘,不修改文件名,自动命名为LCNanoUSBRun.ppf,点击Save,安全移除U盘。仪器启动自检完成后,盖子显示绿时将样品管放入盖上盖子,将U盘插入仪器USB接口,仪器自动运行根目录下的程序,运行过程不能移除U盘。
运行完毕,仪器自动打开盖子,盖子颜变成青绿,结果被保存在USB驱动的根目录下,实验自动重命名为LCNanoUSBRunComplete_<timestamp>.ppf. 从仪器移除U盘即可。
实验完成
profile中文实验完成有如下提示仪器自动打开盖子,盖子颜变成青绿主窗口的状态栏显示Complete Data 界面提供最后的原始数据。点击 Save 即可保存原始数据
数据分析
在Analysis 窗口, 点击添加所需的分析类型,设置合适的分析参数
选择 进行自动分析,通过二次求导算得扩增曲线的拐点,进行定量。选择Settings,可以切换不同的目的基因,设置扣除的循环数。点击Quantifiers,查看标准曲线及Cq值的计算公式,R2和扩增效率,在这个窗口可以导入import或者导出export标准曲线。在Amplification窗口可以切换不同探针的荧光曲线图,或者点击show all dyes在同一个窗口呈现所有探针曲线。必要时可以选中剔除部分样品。
选择进行手动分析。同样在Settings窗口,可以切换不同的目的基因,而且在Cycles Settings可以根据不同试剂盒调整背景信号循环数,在Thresholds 选中,也可以自动设置阈值线。或者不选Automatic,点击,直接在扩增曲线图形中调整蓝线的位置。原则:蓝线盖过阴性对照的最高点,黑线盖过所有样品的背景信号,与所有样品曲线指数期相交,尽可能压低。点击,可以将图形放大。选中可以通过点击曲线查看所对应的数据。点击可以将图形单独保存。
注意事项
1.四个角的位置必须放置管,以便受力均衡
2.切勿向仪器样品孔位置喷洒任何液体,以免流进仪器内部。
3.除了放置样品以及清洁时,仪器的盖子保持在盖上的状态。
4.放置样品管之前务必离心去除气泡
仪器表面去污及打包流程
1. 穿上实验服,戴上手套及护目镜;从仪器移除所有样品管,拔掉仪器电源及网线。
2. 盖上仪器盖子,用蘸了漂白剂的软麻布擦仪器表面,10分钟后用蘸了水的布擦掉漂白剂,再用
70 % 乙醇擦即可。打开仪器盖子,用70 % 乙醇擦基座表面。空气流通:至少等10分钟。
3. 用原装航空运输盒打包仪器,并将电源线网线一并放入。

版权声明:本站内容均来自互联网,仅供演示用,请勿用于商业和其他非法用途。如果侵犯了您的权益请与我们联系QQ:729038198,我们将在24小时内删除。