两种红细胞G6PD酶检测系统的方法学比较
作者：薛春玲
来源：《中国实用医药》2010年第19期
        【摘要】 目的 比较紫外速率定量法与改良G6PD比值法测定葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)酶活性的结果,评价不同检测系统的可比性,为临床提供准确的实验数据。方法本院就诊送检G6PD酶人共1240例,分别采用日立7180紫外速率定量法和改良G6PD比值法检测红细胞内G6PD酶,两法结果不一致时采用基因检测法确证,最后统计分别算出两法的阳性预示值,阴性预示值,特异性和灵敏度。 结果 系统一:紫外速率法共检出阳性标本79例,真阳性78例,真阴性1159例,阳性预示值、阴性预示值、特异性和灵敏度分别为98.7%、99.8%、99.9%、97.5%;系统二:改良G6PD比值法共检出阳性标本75例,其中真阳性73例,真阴性1158例,阳性预示值、阴性预示值、特异性和灵敏度分别为97.3%、99.4%、99.8%、91.3%。两法的结果经比较,一致性为99.4%。结论 紫外速率定量法和改良G6PD比值法有较高的灵敏度、特异度及一致性,可同时应用于临床,但紫外速率定量法灵敏度高于改良G6PD比值法,而且操作简便,检测时间短,更适合大批量标本的检测,但所需仪器贵重且成本较改良G6PD比值法高。
        【关键词】 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶;紫外速率定量法;改良G6PD比值法;比较
       
        G6PD缺乏症是一种常见的遗传性疾病,尤其在广东、广西一带,其缺乏是引起新生儿溶血和高胆红素血症及成人溶血性贫血的主要病因,在临床上G6PD的检测有多种方法,不同仪器,采用不同检测原理,使用不同来源的试剂,造成不同检测系统间灵敏度、特异度的差异,如何进行比较,判断检测结果间的一致性,是目前检验医学界关注的一个热点。为此,本文对本实验室存在的两种G6PD检测方法进行了比较。
        1 材料与方法
        1.1 检测系统 系统一:紫外速率定量法,仪器为日立7180,试剂由利德曼生化公司提供,配套校准品及质控品;系统二:改良G6PD比值法,仪器为752分光光度计,水浴箱,试剂由广州米基医疗公司提供。验证系统:基因检测仪器为达安DA-7600,试剂由达安公司提供。
        1.2 检测对象 1240例标本为本院门诊、住院接诊人,男662例,女578例,年龄10 min~50岁。全部标本用EDTA-K2抗凝管采血2 ml,16 h内检测完毕 [1]。
        1.3 方法
        1.3.1 G6PD紫外速率定量法 取离心后抗凝血球20 μl,溶于1 ml蒸馏水中,15~30min上机检测,结果
        1.3.2 改良G6PD比值法 ①抗凝全血15ul,加入双蒸水200ul制成溶血液。分别取溶血液50 μl加入1,2号试管中;②取G6PD和6PGD反应试剂各50 μl,分别加入1、2号试管中,混匀,立即置37℃水浴箱准确保温20 min;③取出试管,立即加入终止液2 ml,于650 nm波长读取1、2管的光密度值(S 1和S 2);④比值计算:G6PD/6PGD=S 1/S 2;⑤正常参考值:1.0~2.3。
        1.3.3 统计学分析 结果低于参考值为阳性,紫外速率定量法及改良G6PD比值法结果均低于正常值或其中一种方法阳性加基因检测法阳性为真阳性,其他结果为真阴性,分别计算两种方法的阳性预示值,阴性预示值,特异性和灵敏度。
        2 结果
        2.1 1240例标本分别用紫外速率定量法和改良G6PD比值法检测,结果真阳性81例(6.5%),真阴性1159例(93.5%)。
        2.2 紫外速率定量法共检测出G6PD缺乏患者79例,阳性率6.4%,其中有1例检测阳性,但改
良G6PD比值法及基因检测都阴性,另有2例检测阴性,但改良G6PD比值法及基因检测都阳性;改良G6PD比值法共检出G6PD缺乏患者75例,阳性率6.0%,其中有2例检测阳性但紫外速率定量法及基因检测都阴性,另有7例检测阴性,但紫外速率定量法及基因检测都阳性。
        2.3 紫外速率定量法与改良G6PD比值法结果比较:两种方法的一致性为99.4%。见表1。
       
        表1
       
        紫外速率定量法与改良G6PD比值法结果比较 (例,%)
       
        检 测方法阳性例数真阳性假阳性真阴性假阴性阳性预示值(%)阴性预示值(%)特异性(%)灵敏度(%)
        紫外速率定量法797811159298.799.899.997.5
        改良G6PD比值法757321158797.399.499.891.3
       
        3 讨论
        G6PD是参与红细胞葡萄糖代谢中重要的一个酶,当其缺乏时,红细胞易氧化变化,被破坏,核酸检测结果阳性参考值阴性导致溶血的发生。在临床常引起新生儿高胆红素血症,重度黄疸、核黄染,危害极重。因此及时准确的确诊G6PD缺乏病患,对预防发病和新生儿健康有重要意义。紫外速率定量法影响的因素较少,准确性高,系目前确诊G6PD缺乏准确性最高的检测方法[2]。本文中统计此法灵敏度,特异度高达97.5%,99.9%。自然,这是限于目前检测方法而言,据文献报道,G6PD有缺陷的女性至少有20%检测在正常范围而漏检[2]。
        而改良G6PD比值法灵敏度相对偏低,有7例漏检,紫外速率定量法及基因法均检出阳性,经临床发病症状或家族遗传分析亦确证为G6PD缺乏患者。作者分析,这7例漏检者中有5例为女性,且比值在1.0~1.2之间。按G6PD缺乏症的遗传规律,由于女性患病属杂合子多,杂合子可有一定活性的G6PD,所以可表现为正常或轻度缺乏。改良G6PD比值法当G6PD活性降低不明
显时,其比值降低不明显,故容易造成漏检。另2例为新生儿,原因可能为新生儿造血旺盛,有较多的新生红细胞释放入外周血,而新生红细胞的G6PD酶活性较成人高,因而掩盖了G6PD缺乏的实质[3]。故改良G6PD比值法对女性及新生儿标本有漏检现象,当比值在1.0~1.2之间时,应以紫外速率定量法补充。
        紫外速率定量法灵敏度高于改良G6PD比值法,且操作简便,检测时间短,更适合大批量标本的检测,但所需仪器贵重,成本较高;改良G6PD比值法灵敏度也较理想,所需仪器简单,成本低,只是操作繁琐,费时较长。据结果统计,两法一致性为99.4%,提示两种方法均有临床应用价值,可为临床提供准确的实验数据。
        参 考 文 献
        [1] 李锡福,黄文东.等标本存放对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)活性的影响.陕西医学检验,2001,8(3):6.
        [2] 黄寿星.我国对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症临床检测与筛查的研究现状.华夏医学,2007,9(5):1125-1127.
        [3] 陈冬,陈和平.高铁血红蛋白还原法和紫外法联合检测新生儿红细胞G-6-PD缺陷症.中国生育健康杂志,2005,16(5):277-278.

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