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核酸检测实验室(PCR)消毒规范
一、PCR核酸检测结果阳性参考值阴性实验室设计核心问题
二、PCR实验污染来源
三、PCR实验污染预防措施
四、PCR实验室空气流向管理与环境消毒
五、实验室日常清洁消毒六、试验结束后物品及环境处理七、其他消毒方法
PCR实验，即临床基因扩增实验，是专门用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一种检测手段。它可以通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法，测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。
就新冠病毒核酸检测来说，RT-PCR是目前使用最广泛和较准确的筛选和确认方法，大规模核
酸检测，必然会引起相关机构单位着力建设规范的临床PCR实验室。但是，建立一个PCR实验室，其实就是在建设一个平台，考验的不仅仅是一个医疗机构的实验能力，也考验着整个医疗机构的整体能力。
一、PCR实验室设计核心问题
实验室的平面布局、空调通风系统设计、气流控制等都是围绕同一个核心问题进行——“避免污染”，任何级别的医院在建设PCR实验室时，均需要提前考量各个因素，以保证标本的全环节质量及实验室的生物安全。
1、建设要求。PCR实验室的建设需要设置标准的“四区”：试剂准备区、标本制备区、PCR扩增检测区和扩增产物检测区。每个独立实验区设置有缓冲区，各区通过气压调节，使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染，并降低扩增产物对人员和环境的污染。
2、人员要求。进入PCR实验室，需要经过从基础理论、实验原理、规范操作、质量保证到注意事项等规范的培训，并获取PCR上岗证。
3、检测风险。检测过程中，样本的开盖，核酸提取的震荡、离心都有可能产生气溶胶，有感染的风险。
4、防护要求。必须按照生物安全三级实验室的个人防护要求进
行。
二、PCR实验污染来源
1、样本间交叉污染：收集样本的容器被污染或样本密封不严导致外溢；不同样本移液时忘记更换尖或未使用带滤芯尖；移液器等实验器具及耗材未及时消毒灭菌；不同样本同时开盖或样本剧烈震荡、反复吹吸导致气溶胶形成扩散，相互交叉污染。
2、实验试剂污染：主要是在PCR组分试剂加样过程中，由于移液器、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或阳性对照污染。加样过程中，因为PCR试剂对温度十分敏感，需要通过冰浴使得PCR试剂和PCR板/管处于02，但这个过程也充满污染风险。
3、扩增产物污染：大量拷贝的产物泄漏或扩增后的PCR反应管意外开盖，这是PCR反应中
最主要、最常见的污染问题。因为PCR产物拷贝量大，远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物污染，就可形成假阳性。
4、克隆质粒污染：作为阳性质控品的克隆质粒外溢。
三、PCR实验污染预防措施
对于低流行地区，PCR检测人员经过严格培训上岗后，核酸污染的风险相对较小，但在疫区超负荷工作时，就可能会遇到核酸污染的问题，可通过以下措施降低污染机会：
1、正确佩戴手套：手套未紧密贴合拇指、食指和中指，在进行开盖操作时容易发生交叉污染。
2、正确使用生物安全柜：简单、整洁、避免通风口堵塞；操作前后紫外线照射，消毒剂随手可及；废液缸里有1/3体积的含氯消毒液，并且及时清理废液缸，保证废物不超过废液缸体积的2/3。
3、核酸提取仪去污染：每天多批次检测时，在每一批次检测完以后必须用75%的乙醇和核
酸去除剂对仪器进行去污染。
4、重视通风：不定期对房间进行通风，每次至少持续30min。
5、PCR扩增区去污染：PCR反应管必须盖紧，避免扩增后的核酸对环境的污染。
6、实验室随手可及的消毒剂。
四、PCR实验室空气流向管理与环境消毒
PCR实验室可分为试剂准备区、标本制备区、扩增区和产物检测区四个区域，这四个区域在物理空间上必须完全相互独立，各区域无论是在空间上还是在使用中，应当始终处于完全的分隔状态，不能有空气的直接相通。
所以，临床基因扩增检验实验室的空气流向应按：试剂准备区一标本制备区一扩增区一产物检测区，应时刻防止扩增产物顺空气气流进入扩增前区域。可按照上述顺序区域空气压力递减的方式进行，也可通过安装排风扇、负压排风装置或其他可行方式实现。

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