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新冠核酸检测假阴性原因分析
一、新冠结构
二、新冠侵染原理
三、新冠检测方法
四、核酸检测假阴性原因
1.取样留样
2.保存运输
3.检测环节
4.核酸提取
新冠(C0VID-19)是一种高传染性、有潜伏期的Virus,要诊断新冠是否感染最主要的方法是做新冠核酸检测。
一、新冠结构
新冠的遗传物质是单股正链RNAVirus,直径是60T40纳
米,是一种3属的冠状Virus,其颗粒是圆形或者椭圆形,形态是多形性,表面是包膜,直径大概60-140纳米,一般感染人、鼠、猪、猫、犬等脊椎动物,能引起非典型的肺炎。新冠Virus的表面还存在很多的基础棘突,整个Virus看起来就像日冕一样,不同的冠状Virus长的不一样,Virus和以前的冠状Virus不一样,所以就命名为新冠Viruso 新冠由五种成分构成:一个RNA基因链条和四种蛋白质。颗粒的最夕卜层是刺突糖蛋白(S,SpikeProtein),刺突下面由小包膜糖蛋白(E,EnvelopeProtein)和膜糖蛋白
(M,MembraneProtein)构成的Virus包膜,包膜里面藏着的核心是一个由RNA基因链条和核衣壳蛋白
(N,NucleocapsidProtein)构成的螺旋折叠结构。
二、新冠侵染原理
新冠Virus的核酸特点是可以以自身为模板,指导合成Virus相关蛋白质。Virus进入宿主细胞后,首先以VirusRNA 为模板表达出RNA聚合酶,随后RNA聚合酶完成负链RNA的转录合成、各种结构蛋白mRNA的合成,以及Virus基因组RNA的复制。
变异是Virus自我复制过程中的常态,Virus并不总能完全准确地复制出其遗传物质“副本”,其复制时常出现一
些错误,从而导致基因突变。新冠所属的RNAVirus变异相对较快,大多数变异并不会使Virus“性情大变”,但也有一些变异带来值得关注的Virus性状改变,而这种对有利的变异发生的概率很低。
三、新冠检测方法
如果病人的体液中检测到新冠抗体、抗原或核酸三者中的任何一种,则意味着已被感染。
目前广泛采用的是检测病原体的核酸序列,通过荧光RT-PCR检测法将一条RNA链逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA片段扩增,再通过荧光探测来标定扩增的DNA片段是否存在新冠核酸。
四、新冠核酸检测结果假阴性原因
整个核酸检测过程共分五步:取样、留样、保存运输、核酸提取、上机检测。任何一个环节出现问题,都会导致检测结果假阴性。
假阴性原因:
1.取样留样:根据国家卫建委的新冠检测标准可知,核酸检测标本主要有上呼吸道标本(咽拭子、鼻拭子等)、下呼吸道标本(痰液、肺泡灌洗液、支气管灌洗液等)和血液
标本。由于新冠与普通流感Virus的明显区别在于,病人主要为干咳、无痰,所以目前的普遍采样方式为咽拭子。咽拭子的Virus含量少,再加上取样操作复杂,采样稍微不规范,就容易导致Virus载量过低而无法测出。
核酸检测结果阳性参考值阴性2,保存运输:新冠标本保存、运输条件十分的严格,在4摄氏度时保存24小时以下,在-70摄氏度或以下,可以保存24小时以上。如果需要长途运输,则需要干冰制冷保藏。
3检测环节:检测试剂灵敏度低、不按规范操作、或耗材被核酸酶污染。
4,核酸提取:提取过程中Virus降解或Virus核酸提取收率低。
另外,很多人关心的变异因素一般不会导致假阴性。目前,具备更强的传染性和致命性,世界卫生组织(WHO)正在密切关注的新冠变异Virus有十多种。虽然新冠Virus是RNA单链Virus,相较于DNAVirus会更加不稳定,具有较高的变异性。但是我国在检测过程中选用的是多个保守目标序列中的靶点,也就是说选取的是不容易发生变异的序列片段上的靶点,假阴性并非表明Virus一定发生了变异。
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新冠核酸检测规范性分析
一、核酸规范采样
二、假阴性因素分析
三、假阳性因素分析四、不合格样本影响结果
新冠核酸检测是新冠肺炎确诊的金标准,但核酸阴性不等于没事,核酸阳性也可能是假阳性,所以不要过度神话核酸检测的结果,如何正确应用核酸检测结果,必须注意以下几点。
一、核酸规范采样
新冠样本采集-咽拭子规范操作
新型冠状核酸混检样本采集规范操作
二、假阴性因素分析
有些确诊病例,核酸检测结果多次为阴性,主要原因归纳为:
(1)入侵人体初期,人体内量尚未达到可检测的程度。采样时机和采样部位的不同,可能导致所采集的标本中没有足够量的;
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