新冠实验室检测技术指南
（-）检测人员要求
实验室检测人员应当具有实验室工作经历以及相关专业技术技能，接受过新冠相关检验检测技能培训。检测机构应当按照所开展检测项目及标本量配备实验室检测人员，以保证及时、高效完成检测和结果报告。
（二）实验室检测
1.实时荧光RT-PCR方法检测新冠核酸
（1）核酸检测实验室
新冠核酸检测实验室按功能区布置位置的不同，可分为集中布置形式和分散布置形式。开展新冠核酸检测的实验室应当设置以下区域：试剂储存和准备区、标本制备区、扩增和产物分析区。根据使用仪器的功能，区域可适当合并。如采用标本加样、核酸提取及扩增检测为一体的自动化分析仪，标本制备区、扩增和产物分析区可合并。集中布置形式的实验室设置应遵循“
各区独立，单向流动（注意风向，压力梯度走向），因地制宜，方便工作”的原则。各区的功能如下：
①试剂储存和准备区
用于分装、储存试剂、制备扩增反应混合液，以及储存和准备实验耗材。该区应配备冰箱或冰柜、离心机、试验台、涡旋振荡器、微量加样器等。为防止污染，该区宜保持正压状态。
②标本制备区
标本转运桶的开启、标本灭活（必要时）、核酸提取及模板加入至扩增反应管等。该区应配备冰箱或冰柜、生物安全柜、离心机、试验台、微量加样器，可根据实际工作需要选配自动化核酸提取仪等。标本转运桶的开启、分装应在生物安全柜内完成。为防止污染，该区宜保持负压状态。为操作方便，标本分装以及核酸提取也可以在独立的生物安全二级(BSL-2)实验室进行，提取的核酸可以转运至该区加至扩增反应液中。
③核酸扩增和产物分析区
核酸检测结果阳性参考值阴性进行核酸扩增反应和产物分析。该区应配备实时荧光定量PCR仪。为防止扩增产物污染环境，该区宜保持负压状态，压力等于或低于标本制备区。
(2)新冠核酸的荧光定量RT-PCR检测
实验室应当制定标准操作程序(SOP),并严格按照SOP进行操作。接到标本后，应当在生物安全柜内对标本进行清点核对，并依据SoP进行试剂准备、标本前处理、核酸提取、核酸扩增、结果分析及报告。实验室应当建立可疑标本复检的流程。
①试剂准备
应当选择国家药品监督管理部门批准的试剂，建议根据核酸提取试剂及扩增体系的要求选择配套的标本采样管，不建议免提取核酸直接进行核酸扩增反应。
②标本处理
使用含服盐等灭活型采样液的标本无需进行灭活处理，可直接进行核酸提取，而使用非灭活型采样液的标本,按照核酸提取试剂盒的说明，取适量标本加至核酸提取裂解液中充分混匀作
用一定的时间则可以有效灭活病毒。选用热灭活时可采用95。C加热15分钟，不推荐采用56。C孵育30分钟的处理方式灭活病毒，该条件不能保障充分灭活病毒。污水水样标本处理可参考《污水中新型冠状病毒富集浓缩和核酸检测方法标准》(WS/T799-2022)推荐的方法；污水拭子标本处理可参考《农贸(集贸)
市场新型冠状病毒环境监测技术规范》(WS/T776-2021)推荐的方法。
③核酸提取
将灭活后的标本取出，在生物安全柜内打开标本采集管加样，或按照核酸提取试剂盒的说明，将标本与裂解液作用足够时间后继续核酸提取步骤，核酸提取完成后立即封盖。取适量核酸加至PCR扩增反应体系中。
④核酸扩增
将扩增体系放入荧光定量PCR仪，按照试剂盒说明书设置扩增程序，启动扩增程序。扩增完成后反应管不可开盖，直接放于垃圾袋中，封好袋口，不可高压，按一般医疗废物转移出实验室处理。检测机构所选用的新冠核酸检测试剂应针对新冠基因组中开放读码框Iab(OPenre
adingfranIeIab,0RFIab)和核衣壳蛋⅛Cnucleocapsidprotein,N)基因，人体标本检测原则上选择含内源性内参的核酸检测试剂。
⑤阳性标本的确认
实验室确认阳性病例需满足以下两个条件中的一个：条件一：同一份标本中新冠2个靶标(ORFlab、N)实时荧光RT-PCR检测结果均为阳性。如果出现单个靶标阳性的检测结果，则需要重新检测或重新采样复核。条件二：两种标本实时荧光RT-PCR同时出现单靶标阳性，或同种类型标本两次采样检测中均出现单个靶标阳性的检测结果，可判定为阳性。环境与生物材料核酸检测阳性要排除疫苗接种物残留污染的影响。核酸检测结果假阴性的可能原因包括：标本质量差；标本采集时间过早或过晚；标本保存、运输和处理不当；其他原因如病毒变异、PCR抑制等。
⑥质控
由上级疾控部门对下级疾控实验室进行核酸检测质控考核，中国疾控中心每年至少开展一次对省级疾控机构实验室的质控考核，并同时提供全国新冠实验室检测质控方案，省级针对地
市级实验室的质控考核每年不少于两次。各检测机构应当加强核酸检测质量控制，选用扩增检测试剂盒指定的核酸提取试剂和扩增仪。
性能验证。临床标本检测前，实验室应对核酸提取试剂、提取仪、扩增试剂、扩增仪等组成的检测系统进行必要的性能验证，性能指标包括但不限于精密度（至少要有重复性）和最低检测限。
室内质控。实验室可按照《国家卫生健康委办公厅关于医疗机构开展新型冠状病毒核酸检测有关要求的通知》（国卫办医函（2020）53号）要求规范开展室内质控。每批检测至少有1份弱阳性质控品（第三方质控品，通常为检出限的1.5-3倍）、3份阴性质控品（生理盐水）。质控品随机放在临床标本中，参与从提取到扩增的全过程。大规模人筛查时，一旦出现阳性结果，应对阳性标本采用另外一到两种更为灵敏的核酸检测试剂对原始标本进行复核检测，复核阳性方可报出。
物品和环境标本的采集检测，还需在采样前及采样过程中至少设一个现场空白标本及一个运输空白标本，以进行过程中的质量控制。
室间质评。实验室应常态化参加国家级或省级疾控机构组织的室间质评。对检测量大以及承担重点人筛查等任务的实验室，可适当增加室间质评频率。不按要求参加室间质评的，或室间质评结果不合格的，应通报批评并上报国家卫健委，待室间质评通过后方可开展核酸检测。
核酸检测实验室质控详细内容参见《国家卫生健康委办公厅关于加强疾控机构新冠核酸检测实验室质量控制的通知》(国卫办疾控函(2021)548号)《疾控机构新冠核酸检测质量控制方案》。
2.病毒全基因组测序
病毒全基因组测序可以监测病毒基因组突变，为新冠核酸检测试剂、疫苗研发策略的改变提供实验数据，同时也为流调溯源工作提供支持。
(1)测序标本选取原则
结合流调信息和病例传播链关系，优先选择以下标本开展测序：核酸检测Ct值W32的本土疫情中的首发或早期病例、与早期病例有流行病学关联的关键病例、感染来源不明的本土病例
、输入病例、入境物品及相关环境阳性标本、疫苗接种后核酸检测阳性者标本等。测序结果应与本地近一个月的输入病例和本土病例序列进行比对。对同一传播链或流行病学关系明确的病例无需全部测序。

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