溶血、脂肪血及保存条件对HBVDNA、HIVRNA核酸检测的影响
作者：漆爱红
来源：《中国实用医药》2019年第33期
        【摘要】 目的 探讨溶血、脂肪血及保存条件对乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（HBV DNA）
、人类免疫缺陷病毒核糖核酸（HIV RNA）核酸检测的影响。方法 回顾性分析30份行HBV DNA、HIV RNA核酸检测标本的临床资料， 应用罗氏MPX V2.0试剂， 分别于4℃、25℃、37℃及-30℃的条件下测定4 h、24 h、48 h、72 h、1周、4周HBV DNA、HIV RNA的Ct值， 并在不同溶血及脂肪血中测定HBV DNA、HIV RNA的Ct值。结果 -30℃、4℃、25℃温度下保存HBV DNA、HIV RNA的Ct值比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。在37℃条件下， HBV DNA在72 h及1周的Ct值高于其他时间及温度下的Ct值， 差异有统计学意义（P<0.05）。高浓度TG并不影响核酸检测（NAT）， 差异无统计学意义（P>0.05）。而Hb浓度在97 g/L时出现NAT检测抑制， 其他浓度无明显影响， 差异有统计学意义（P<0.05）。结论 高血脂标本<7.93 mmol/L可以接收， 溶血标本>34 g/L时需重新留取样本， 血液标本检测时间不宜超过72 h， 保存温度以-30℃最佳。
        【关键词】 HBV DNA;HIV RNA;溶血;脂肪血;Ct值
        DOI：10.14163/jki.11-5547/r.2019.33.111
        目前临床对血液制品的检测均采用核酸检测技术（NAT）， 能有效检出因病毒变异、隐匿性感染等因素， 导致的污染血液。但在实际工作中， 血液标本容易受到保存温度、溶
血、脂肪血等因素影响， 进而导致核酸检测结果出现误差[1]。罗氏MPX V2.0试剂说明书中也提出了相应的指导意见， 但各地区的实验室对HBV DNA、HIV RNA检测的影响因素不同。本研究进一步分析了溶血、脂肪血及保存条件对HBV DNA、HIV RNA核酸检测的影响， 现报告如下。
        1 材料与方法
        1. 1 材料来源 回顾性分析2018年1～12月在本中心行HBV DNA、HIV RNA核酸检测的30例标本的临床资料。所有血液标本经血清学检测HBV DNA、HIV RNA均为阴性， 同时收集HBV DNA、HIV RNA 检测阳性的血浆， 经病毒浓度定量检测后， 加入血清学及NAT 检测均为阴性的透亮血浆， 制成12～30倍的核酸试剂检测下限浓度的HBV DNA、HIV RNA标本。
        1. 2 方法 使用罗氏Z480荧光定量PCR儀核酸检测系统。分别将标本置于-30℃、4℃、25℃、37℃的环境中放置4 h、24 h、48 h、72 h、1周、4周， 采用荧光PCR法检测。收集血液标本中的红细胞悬液、严重乳糜血浆， 将红细胞悬液制成全溶血样本， 将两个样本离心制成溶血样本及脂肪血样本， 然后将溶血样本、脂肪血样本、血清学及NAT检测均为阴性
的血浆标本、12～30倍核酸试剂检测下限浓度HBV DNA、HIV RNA标本， 保持这两个样本的HBV DNA、HIV RNA最终浓度约为2～5倍核酸试剂检测下限浓度[2];采用6混样模式， 在全自动STAR加样仪中混匀制成血红蛋白（Hb）， 分为浓度97、34、17、8、5及3 g/L的溶血标准样本， 以及TG浓度在7.93、3.80、2.63、1.83及1.49 mmol/L的脂肪血标准样本， 分别行Hb浓度、TG浓度及NAT检测。
        1. 3 观察指标 比较不同保存条件下HIV RNA、HBV DNA的Ct值;比较不同Hb、TG浓度下HIV RNA、HBV DNA的Ct值。
        1. 4 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验。P<0.05表示差异有统计学意义。
        2 结果
        2. 1 不同保存条件下HIV RNA、HBV DNA的Ct值比较
        -30℃、4℃、25℃温度下保存HBV DNA、HIV RNA的Ct值比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。在37℃条件下， HBV DNA在72 h及1周的Ct值高于其他时间及温度下的Ct值，
差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。
        2. 2 不同Hb、TG浓度下HIV RNA、HBV DNA的Ct值比较 高浓度TG并不影响NAT检测， 差异无统计学意义（P>0.05）。而Hb浓度在97 g/L时出现NAT检测抑制， 其他浓度无明显影响， 差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。
        3 讨论
        Hb对核酸检测的影响主要是通过卟啉环与Taq酶的不可逆结合， 抑制Taq酶活性[3-6]。脂肪血对核酸检测的影响主要通过乳糜微粒屏蔽和吸收荧光， 产生荧光淬灭作用， 降低了荧光信号强度， 减少扩增效率[7-10]。本研究结果显示， -30℃、4℃、25℃温度下保存HBV DNA、HIV RNA的Ct值比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。在37℃条件下， HBV DNA在72 h及1周的Ct值高于其他时间及温度下的Ct值， 差异有统计学意义（P<0.05）。说明HBV DNA在常温下稳定性较高， 在37℃中可能有核酸降解的趋势。HIV RNA在各个不同温度下均很稳定。另外， 本研究中， 高浓度TG并不影响NAT检测， 差异无统计学意义（P>0.05）。而Hb浓度在97 g/L时出现NAT检测抑制， 其他浓度无明显影响， 差异有统计学意义（P<0.05）。
        综上所述， 高血脂标本<7.93 mmol/L可以接收， 溶血标本>34 g/L时需重新留取样本， 血液标本检测时间不宜超过72 h， 保存温度以-30℃最佳。
        参考文献
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核酸检测结果阳性参考值阴性
        [收稿日期：2019-03-27]

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