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作者简介：潘　婧，女，1982年生，博士，主管技师，主要从事感染性疾病的分子诊断及发病机制研究。
SARS-CoV-2抗体不同方法学检测结果的差异分析
潘　婧， 梁　芸， 梁翠娟， 赵东兰， 冯　苏， 万玲玲， 宋国威， 李立新
（石家庄市人民医院检验科，河北 石家庄 050000）
关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2；抗体；胶体金；化学发光
文章编号：1673-8640（2021）02-0229-02  中图分类号：R446.5  文献标志码：B  DOI ：10.3969/j.issn.1673-8640.2021.02.023
新型冠状病毒肺炎（corona virus disease 2019，COVID-19）是由严重急性呼吸综合征冠状病毒2（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）感染引起的新发传染病。《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第七版）》将血清SARS-CoV-2特异性IgM 和IgG 抗体阳性作为确诊依据之一[1]。目前，已有多种方法的商品化SARS-CoV-2抗体检测试剂。本研究拟采用胶体金法和化学发光法对发热患者血清SARS-CoV-2抗体进行检测，并对2种方法检测不一致的结果进行分析。1 材料和方法1.1　研究对象
选取2020年2—3月石家庄市人民医院住院及隔离观察病区168例发热患者，其中4例确诊为COVID-19。本研究经石家庄市人民医院伦理审查委员会审核通过（伦理号：2020046），并批准予以豁免患者知情同意。1.2 方法
核酸检测结果阳性参考值阴性1.2.1 样本采集　采用无抗凝剂的真空采血管采集所有对象空腹静脉血5 mL ，室温静置 30 min ，离心分离血清，备用。
1.2.2 化学发光法检测SARS-CoV-2抗体 采用MAGLUMI 4000 Plus 全自动化学发光免疫分析仪（深圳新产业公司）及配套SARS-CoV-2 IgM 和IgG 抗体检测试剂盒（化学发光法）进行检测，IgM 抗体采用捕获法{以抗人IgM 单克隆抗体包被磁性微球，N-（4-氨丁基）-N-乙基异鲁米诺[N-（4-Aminobutyl ）-N-ethyl isoluminol ，ABEI]标记 SARS-CoV-2重组抗原}，IgG 抗体采用间接法（SARS-CoV-2重组抗原包被磁性微球，ABEI 标记抗人IgG 单克隆抗体），结果以相对光强度（relative light unit ，RLU ）表示，样本
中SARS-CoV-2 IgM 或IgG 抗体的量与RLU 呈正相关，根据RLU 及内置校准曲线自动计算出抗体浓度（AU/mL ），以≥1.10 AU/mL 为阳性。1.2.3 胶体金法检测SARS-CoV-2抗体　胶体金法采用免疫层析技术，以捕获法为原理。胶体金法1检测血清SARS-CoV-2总抗体，试剂盒购自广州万孚生物技术股份有限公司。胶体金法2分别检测血清SARS-CoV-2 IgM 和IgG 抗体，试剂盒购自英诺特（唐山）生物技术有限公司。2种方法的结果均以T 线和C 线位置出现紫红条带判为阳性。2 结果
采用化学发光法和2种胶体金法检测164例发热患者的血清SARS-CoV-2抗体，结果均为阴性。4例COVID-19患者的检测结果3种方法之间存在差异，胶体金法1的检测结果均为阳性；胶体金法2 IgM 抗体均为阴性，2例IgG 抗体为阳性；化学发光法1例IgM 抗体阳性，IgG 抗体均为阳性。检测结果差异来源于患者A 和患者B 的原倍血清样本，见表1。
表1　3种方法检测结果不一致的2例COVID-19患者
血清SARS-CoV-2抗体的分析病例
胶体金
法1
胶体金法2化学发光法
IgM 抗体IgG 抗体IgM/（AU/mL ）IgG/（AU/mL ）
患者A +--0.49（-）120.7 （+）患者B +--  1.87（+）320.6（+）
对4例COVID-19患者的原倍血清进行稀释。当稀释倍数为8倍、16倍时，胶体金法2检测患者A 的结果为
IgM （-）/ IgG （+），患者B 的结果为IgM （+）/ IgG （+），均与胶体金法1和化学发光法的检测结果一致。见表2。
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3 讨论
SARS-CoV-2核酸检测是COVID-19的主要诊断方法，但其结果受样本质量、实验条件及人员操作等因素影响较大，不能满足筛查诊断要求[2]。为此，《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第七版）》[1]中引入了血清SARS-CoV-2抗体检测。本研究对不同方法学的SARS-CoV-2抗体检测试剂的测定结果进行了分析，结果显示，化学发光法和2种胶体金法检测168例发热患者血清SARS-CoV-2抗体的结果均为阴性，4例COVID-19患者中有2例检测结果存在差异。胶体金法1检测患者A和B的原倍血清SARS-CoV-2总抗体，结果均为阳性；采用胶体金法2检测血清SARS-CoV-2 IgM和IgG抗体，结果均为阴性。对患者血清进行稀释，当稀释倍数为8倍、16倍时，胶体金法2的检测结果与胶体金法1、化学发光法的检测结果一致。人体感染SARS-CoV-2后，一般会在5～7 d检出IgM抗体，10～15 d可检出IgG抗体，抗体滴度在急性期后期或恢复期早期（约第3周）达到峰值，随后IgM抗体滴度快速下降，而IgG抗体滴度迅速升高[3]。患者A和B在石家庄市人民医院采集样本时，患者A为发病后第25天，患者B为发病后第18天，分别处于恢复期早期和急性期后期，抗体滴度可能会超过试剂检测的阈值，出现由于抗体滴度过高、抗原抗
体比例不合适而导致的假阴性现象，即钩状效应。当血清抗体浓度极高时，无法正常与胶体金标记的SARS-CoV-2抗原形成复合物，不能在包被的鼠抗人IgM/IgG抗体处被捕获，此时的抗原抗体反应会产生钩状效应，容易造成临床误诊。因此，针对不同病程、不同病情患者的临床样本进行适当稀释，使抗原抗体比例达到平衡或减少干扰物质含量，可避免假阴性或假阳性反应。此外，血清中类风湿因子及其他非特异IgM抗体的存在也会影响检测的灵敏度。
由于重组抗原的选择、制备等方面的差异可能会影响重组抗原的抗原性，因此即使是同一种方法，不同品牌的SARS-CoV-2抗体试剂的检测结果也会出现一定的差异。此外，不同方法学（双抗原夹心法、间接法、捕获法等）也会对试剂盒的敏感性、特异性产生影响[4]。有研究结果显示，采用化学发光法检测SARS-CoV-2 IgM和IgG抗体具有较高的敏感性（70.24%、96.20%）和特异性（96.10%、92.41%）[5]。本研究采用化学发光法（捕获法原理和间接法原理）检测血清SARS-CoV-2 IgM、IgG抗体，检测系统自动化程度较高，可自动稀释高浓度样本，在一定程度上能减少钩状效应的发生。
总之，SARS-CoV-2抗体检测试剂与其他血清学检测试剂一样，存在一定的假阳性或假阴性可能，会影响COVID-19的诊断和防控。虽然抗体检测可以有效弥补核酸检测漏检的风险，但在高度疑似病例中，若抗体检测结果为阴性，建议结合患者发病时间，进行不同稀释度样本的检测。除此之外，各临床实验室应在试剂启用前进行性能验证，避免假阴性或假阳性结果对临床诊断的误导。
参考文献
[1] 国家卫生健康委办公厅. 新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试
行第七版）[EB/OL].（2020-03-03）[2020-04-01]. http：//
v/yzygj/s7653p/202003/46c9294a7dfe4cef80
dc7f5912eb1989.shtml.
[2] 高维寅，张洪，罗阳，等. 新型冠状病毒肺炎核酸检测中
的假阴性分析及对策[J]. 国际检验医学杂志，2020，41
（6）：641-643.
[3] ZHOU P，YANG X L，WANG X G，et al. A pneumonia
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origin[J]. Nature，2020，579（7798）：270-273.
[4] 郑培明，崔发财，张福明，等. 新型冠状病毒IgM和IgG
抗体不同检测方法在新型冠状病毒感染中的临床应用评
价[J]. 检验医学，2020，35（4）：291-294.
[5] 徐万洲，李娟，何晓云，等. 血清2019新型冠状病毒IgM
和IgG抗体联合检测在新型冠状病毒感染中的诊断价值
[J].中华检验医学杂志，2020，43（3）：230-233.
（收稿日期：2020-04-16）
（本文编辑：龚晓霖）
表2　胶体金法2检测不同稀释倍数血清SARS-CoV-2抗体的比较
病例
IgM IgG
原倍4倍8倍16倍64倍原倍4倍8倍16倍64倍
患者A------+++-患者B-+++±-±++±患者C-----++++-患者D-----++++-

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