慢性阻塞性肺部疾病（chronic obstructive pulmonary disease ，COPD ）是环境与遗传因素共同导致的可预防可的慢性疾病，主要病理生理特征是慢性气道炎症和气道重塑，目前在全球死因中排第四，预计在2020年将在全球死亡原因中排第三［1］。解整合素-金属蛋白酶33（a disintegrin
and metalloproteases 33，ADAM33）基因可编码具
有裂解蛋白质活性的酶，促进人肺成纤维细胞增殖，可能与气道重塑相关［2］。学者对ADAM33基因多态性与COPD 发病风险的研究较多，但相关性结论不一致，可能与其研究对象种族不同有关。T1位于外显子19，含有可能影响信号传导的结构域和磷酸化位点；Q⁃1位于内含子内16号外显子之前，含有影响肺形态发生的表皮生长因子（EGF ）结构域［3］。对ADAM33基因的Q ⁃1、T1位点与COPD 发病风险的相关性研究有不同的结论。本试验研究ADAM33基因Q⁃1、T1位点多态性与黔北地区汉族COPD 发病风险的相关性，初探基因编码区，为今后COPD 的基因提供理论依据。
doi ：10.3969/j.issn.1006⁃5725.2017.14.013基金项目：国家自然科学基金（编号：81360419，81560527）；贵州省科技厅社会发展攻关项目（编号：［黔科合SY 字（2013）
3027；黔科合SY 字（2012）3126］）
作者单位：563099贵州省遵义市，遵义医学院公共卫生
学院
通信作者：俞捷E⁃mail ：xujie360@hotmail
ADAM33基因Q⁃1、T1位点多态性与黔北地区汉族
COPD 的相关性
庹芳旭
唐寅李克彬许洁俞捷
【摘要】目的检测ADAM33基因Q⁃1、T1位点多态性在慢性阻塞性肺疾病（COPD ）患者中的分布频
率，探讨Q⁃1、T1位点多态性与黔北地区汉族COPD 的相关性，为COPD 的预防及提供理论依据。方
法采用聚合酶链反应技术、电泳分离及DNA 测序的方法检测ADAM33基因Q⁃1、T1位点多态性。结果
ADAM33基因Q⁃1、T1位点病例组和对照组的基因型分布均符合Hardy⁃Weinberg 平衡定律，AD⁃
AM33基因Q⁃1、T1位点均有C 、T 等位基因。在病例组、对照组及COPD+慢性、COPD+低氧血症中基因型及等位基因频率分布差异均无统计学意义（P >0.05），但T1（83bp 、112bp ）处两个杂合子在同一
个样本中同时出现的概率较高（18/19），位于编码区。结论ADAM33基因Q⁃1、T1位点多态性与黔北地
区汉族COPD 尚无相关性。
【关键词】ADAM33基因；多态性；黔北地区；汉族；COPD
Association between Q⁃1and T1locus polymorphism in ADAM33gene and chronic obstructive pulmonary
disease in Han population in northern Guizhou TUO Fangxu ，TANG Yin ，LI Kebin ，XU Jie ，YU Jie.Zunyi Medical College School of Public Health ，Guizhou 563099，China Corresponding author ：YU Jie
E⁃mail ：xujie360@hotmail
【Abstract 】Objective
To explore the association between Q⁃1and T1locus polymorphism in ADAM33
gene and chronic obstructive pulmonary disease in Han population in northern Guizhou by detecting Q⁃1and T1locus polymorphism in ADAM33gene in patients with COPD in the distribution of frequency ，provide a theoretical basis for the prevention and treatment of COPD.Methods Polymerase chain reaction and DNA sequencing tech⁃
nology ，electrophoresis separation method were applied to detect Q ⁃1and T1locus polymorphism in ADAM33gene.Results
The genotype distribution of Q⁃1and T1locus in the case group and the control group of ADAM33
gene were in accordance with the Hardy⁃Weinberg equilibrium law and ADAM33gene Q⁃1，T1locus were C and T alleles.There was no significant difference in genotype and allele frequency distribution between the case group with control group ，and COPD complicated with chronic respiratory failure （COPD ）and hypoxemia （P >0.05）.
T1（83bp ，112bp ）at a high probability of two heterozygous in the same samples （18/19），and is located in the encoding region.Conclusion
No association was found between Q⁃1，T1locus polymorphism in ADAM33gene
and chronic obstructive pulmonary disease in Han population in northern Guizhou.
【Key words 】ADAM33gene ；polymorphism ；northern guizhou region ；han population ；COPD
1对象与方法
1.1研究对象
1.1.1COPD组选择2015年12月至2016年4月在遵义医学院附属医院住院的COPD患者53例，均为汉族，其中男39例，女14例；年龄（68.32±8.57）岁；吸烟指数（543.77±547.92）支/年；入选标准参考我国中华医学会呼吸病学分会制定的《慢性阻塞性肺疾病诊治指南（2013年修订版）》。对于T1位点COPD患者无并发症的有8例，COPD+慢性的有27例，COPD+低氧血症的有18例；对于Q⁃1位点COPD患者无并发症的有8例，COPD+慢性的有24例，COPD+低氧血症的有15例。
1.1.2非COPD组选择同期在遵义医学院附属医院消化科住院的患者41例，均为汉族，其中男24例，女17例；年龄（65.15±8.569）岁；吸烟指数（165.85±278.935）支/年；入选标准为排除胸廓畸形、胸部手术史，所有人员经详细病史询问、体格检查、胸部X线片等检查除外肺癌、肺栓塞、支气管扩张、、间质性肺疾病、支气管哮喘等呼吸系统疾病，本研究均征得入选对象的同意。病例组和对照组在性别（χ2=
2.368；P=0.124）、年龄（Z=1.781；P=0.078）比较上差异均无统计学意义，而吸烟指数（Z=4.346；P=0.000）与是否有吸烟史（χ2=11.257；P=0.001）比较差异有统计学意义。
1.2ADAM33基因Q⁃1（rs612709）、T1（rs2280091）位点多态性的检测
1.2.1标本采集在清晨研究对象空腹时，用EDTA抗凝管收集5mL静脉血，于-20℃低温保存。
1.2.2DNA提取使用上海生工生物工程技术服务有限公司提供的血液基因组DNA快速抽提试剂盒，去除不含DNA的红细胞，裂解白细胞，去除RNA及蛋白质，从而提取出DNA，采用Nanodrop分光光度计测定核酸的浓度和纯度（A260/A280：1.8--2.2），加TE Buffer稀释到100ng/μL，分装并于-20℃保存。
1.2.3聚合酶链反应PCR引物（上海生物工程公司合成）Q⁃1位点引物上游引物序列5′⁃GTAG⁃GATTAGGAACCCCAAG⁃3′；下游引物序列5′⁃AGTGTGGACCTAGAATGGTG⁃3′；T1位点引
物上游引物序列5′⁃ATAGGGGACTCAAGGTGACT⁃3′；下游引物序列5′⁃CCAACCTCCTGGACTCTTAT⁃3′；PCR反应体系共50μL，含提取基因组DNA2μL，上下游引物各1μL，2×EasyTaq®PCR Super⁃Mix25μL，ddH2O21μL；PCR反应条件：94℃预
变性3min；94℃变性30s，52℃退火30s，72℃延伸2min，共40个循环；72℃延伸5min，4℃保存。
1.2.4电泳分离制备2%的琼脂糖凝胶，试剂有6×DNA Load Buffer；GoldViewⅠ型核酸染剂；50×TAE缓冲液；琼脂糖H［凝胶强度>1400g/cm （1.5%）］，100bp DNA Ladder；制胶成功后在胶孔中加入100bp DNA Ladder5μL，10μL6×DNA Load Buffer和50μL PCR扩增后的产物，电泳槽中于U=110V，I=50mA运行1h。在波长为254nm的紫外灯下切下目的条带（Q⁃1位点产物长度225bp；T1位点产物长度230bp）于4℃保存。
1.2.5DNA测序法快速将4℃保存的目的条带和2μL引物/1个样品，送往上海生工生物工程技术服务有限公司测序，测序结果在NCBI的BLAST 软件中进行同源性分析，用于验证测序结果是否正确。
1.3统计学方法运用SPSS16.0统计软件对计数资料进行t检验，χ2检验分析基因型分布是否符合Hardy⁃Weinberg遗传平衡定律，并分析病例组与对照组ADAM33基因Q⁃1、T1位点基因型和等位基因频率比较差异是否有统计学意义，按α=0.05为水准。
2结果
2.1ADAM33基因Q⁃1、T1位点基因型及等位基因识别Q⁃1、T1目的基因片段采用反向测序法进行检测，根据测序图分CC、CT、TT3种基因型及同一种基因型两次出现在一个样本中（图1）。
ADAM33基因T1（83bp）位点3040
B杂合子CT C纯合子TT
D TC同时出现，位于编码区
ADAM33基因T1（112bp）位点
30403040 8090100110
图1黔北地区COPD汉族人中ADAM33基因Q⁃1、T1位
点基因型及等位基因识别
Fig.1Genotype and allele recognition of ADAM33gene Q⁃1
and T1in COPD Han population in northern Guizhou
A纯合子CC
表1黔北地区COPD病例组与对照组ADAM33基因Q⁃1位点（38、59bp）基因型及等位基因频率比较Tab.1Comparison of genotype and allele frequencies of ADAM33gene Q⁃1（38，59bp）between COPD cases group and control
group in northern Guizhou
组别COPD
非COPD 合计χ2值P值
例数
47
39
86
Q-1基因型（38bp）
CC
34
30
64
4.106
0.128
CT
13
7
20
TT
2
2
等位基因
C
81
67
148
0.003
0.959
T
13
11
24
Q-1基因型（59bp）
CC
40
36
76
0.489
0.484
CT
7
3
10
TT
等位基因
C
87
75
162
0.459
0.498
T
7
3
10表2黔北地区COPD病例组与对照组ADAM33基因T1位点（83、112bp）基因型及等位基因频率比较
Tab.2Comparison of genotype and allele frequencies of ADAM33gene T1（83、112bp）between COPD cases group and control
group in northern Guizhou
组别COPD
非COPD 合计χ2值P值
例数
53
41
94
T1基因型（83bp）
TT
46
30
76
2.771
0.096
CT
7
11
18
CC
等位基因
T
99
71
170
2.477
0.116
C
7
11
18
T1基因型（112bp）
CC
45
30
75
1.974
0.160
CT
8
11
19
TT
等位基因
C
98
71
169
1.752
0.186
T
8
11
19表3黔北地区COPD病例组及其并发症ADAM33基因Q⁃1位点（38、59bp）基因型及等位基因频率比较
Tab.3Comparison of genotype and allele frequencies of ADAM33gene Q⁃1（38，59bp）between COPD and its complications in
northern Guizhou
组别
无并发症的COPD COPD+慢性COPD+低氧血症
合计
χ2值
P值例数
8
24
15
47
Q⁃1基因型（38bp）
CC
6
18
10
34
0.348
0.840
CT
2
6
5
13
TT
等位基因
C
14
42
25
80
0.290
0.865
T
2
6
5
14
Q⁃1基因型（59bp）
基因多态性CC
7
21
12
40
0.435
0.804
CT
1
3
3
7
TT
等位基因
C
15
45
27
87
0.398
0.819
T
1
3
3
7
2.2Hardy⁃Weinberg基因遗传平衡性检验根据Hardy⁃Weinberg定律（p2+2pq+q2=1）可计算出χ2值均<
3.84，即COPD病例组和对照组的ADAM33基因的Q⁃1、T1位点基因型均符合Hardy⁃Weinberg 遗传平衡定律（P>0.05），两组样本的体代表性好。
2.3COPD病例组与对照组ADAM33基因Q⁃1、T1位点基因型及等位基因频率比较Q⁃1位点测序序列第38、59bp处各有杂合子出现，T1位点测序序列83、112bp处各有杂合子出现，COPD病例组与对照组ADAM33基因Q⁃1、T1位点基因型及等位基因频率比较差异均无统计学意义（P>0.05），见表1、2。
2.4COPD+并发症者与COPD患者ADAM33基因Q⁃1、T1位点基因型及等位基因频率比较COPD+慢性、COPD+低氧血症、无并发症的COPD 患者ADAM33基因Q⁃1、T1位点比较差异无统计学意义（P>0.05），见表3、4。
3讨论
解整合素—金属蛋白酶（ADAMs）是细胞膜结合糖蛋白家族，金属蛋白酶家族的亚家族。
ADAM33基因位于20号染体的短臂上（20p13），包含22个外显子和21个内含子，在肺组织、肺成纤维细胞、支气管平滑肌细胞中均有表达。ADAM33可以进行细胞的融合和蛋白的分解［4］，从而使成纤维细胞和支气管平滑肌细胞的功能改变［5］；也能通过影响生长因子（如TGF⁃β）的释放，使上皮细胞的损伤增加，炎症反应增强［6］。ADAM33基因的隐性模型与东亚COPD患者气道炎症细胞
因子和炎症介质显著相关［7］。ADAM33基因有55个以上的多态性位点，其中8个位点与COPD发病风险相关性研究较多，对Q⁃1、T1位点的争议较大，ADAM33基因Q⁃1位点单核苷酸多态性是总体
COPD发病的危险因素［8］，新疆哈萨克族、汉族也验证了这一点［9］，但在新疆维吾尔族人则相反［10］，有研究［11］表明在总体人（包括欧洲、亚洲）、中国西藏人［12］ADAM33基因T1位点与COPD的发病风险相关，中国整体人［8］和委内瑞拉人［13］中T1位点的SNP与COPD的发病风险无关，与AIERKEN等［14］的Meta分析结果一致。由此可见在不同种族、环境下的研究对象AD
AM33基因多态性可能存在变异度，导致其与COPD发生的相关性存在差别。本研究通过对黔北地区汉族AD⁃AM33基因Q⁃1、T1位点的研究，来进一步验证不同人COPD发病风险与ADAM33基因Q⁃1、T1位点的相关性。
目前并未有关于黔北地区汉族ADAM33基因Q⁃1、T1位点与COPD相关性的研究的报道，本研究结论显示黔北地区汉族ADAM33基因Q⁃1（38、59bp）、T1（83、112bp）位点多态性与COPD 发病风险尚无相关性，与罗雪梅等［15］的Meta分析位点结果一致，但也有可能是样本量不够。COPD 患者ADAM33基因Q⁃1、T1位点有C、T两种等位基因，应有CC、TT、CT3种基因型，对于CC、TT基因型的缺失，原因可能是该种纯合子的突变发生的可能性很小，而样本量不够大，但该3种基因型均符合Hardy⁃Weinberg遗传平衡定律（P>0.05），体代表性好，说明ADAM33基因Q⁃1（38、59bp）、T1（112bp）位点从CC纯合子突变成TT纯合子的可能性很小；而T1（83bp）位点从TT纯合子突变成CC纯合子的概率也很小。本研究发现T1（83、112bp）处两个杂合子在同一个样本中同时出现的概率较高18/19，且在83bp与112bp处是位于GenBank：DQ995342.1中的编码区，T1位于外显子19，含有可能影响信号传导的结构域和磷酸化位点，外显子能转录相应的信使RNA，控制遗传和指导蛋白质的合成。有研究显示［16］T1单核苷酸多态性可能通过信号转导从而导致炎症介质的变化，本实验该变化的产生是否是自体和COPD疾病长期斗争的结果，通过信号转导改变COPD疾病的进展，尚有待进一步对家族史和实验研究。追溯历史，黔北地区汉族主要由四川、湖南等迁移而来，均有相似的生活饮食习惯，但目前未有AD⁃AM33基因与COPD相关性的研究，其遗传-环境交互作用尚不清楚。
以上结果表明，黔北地区汉族ADAM33基因Q⁃1（38、59bp）、T1（83、112bp）位点多态性与COPD发病风险尚无相关性，T1位点可能通过信号转导改变COPD疾病的进展，但ADAM33通过83bp与112bp碱基的改变对COPD疾病进展的具体影响尚不清楚，对COPD疾病的遗传学调查、基因组学结合研究并不多，下一步将进行人遗传学调查和T1位点细胞通路研究。
4参考文献
［1］GOLD GIfCLO.Global strategy for the diagnosis，management，and prevention of COPD.2016.http：//ldcopd.
［2］陶韬，赵麟丰，王彦，等.ADAM33对人肺成纤维细胞增殖、周期、凋亡的影响及IL⁃4对其表达影响的研究［J］.中华肺
部疾病杂志电子版，2015，8（3）：28⁃31.
［3］YOSHINAKA T，NISHII K，YAMADA K，et al.Identification and characterization of novel mouse and human ADAM33s with
potential metalloprotease activity［J］.Gene，2002，282（1）：
227⁃236.
［4］VAN E P，LITTLE R D，DUPUIS J，et al.Association of the ADAM33gene with asthma and bronchial hyperresponsiveness.
［J］.Nature，2002，418（6896）：426⁃430.
［5］葛海燕，黄茂，杨玉.ADAM33与支气管哮喘［J］.国际内科学杂志，2005，32（6）：240⁃242.
［6］GOSMAN M M，BOEZEN H M，VAN DIEMEN C C，et al.A disintegrin and metalloprotease33and chronic obstructive pul⁃
monary disease pathophysiology［J］.Thorax，2007，62（62）：
242⁃247.
［7］WANG X，LI W，HUANG K，et al.Genetic variants in AD⁃
表4黔北地区COPD病例组及其并发症ADAM33基因T1位点（83、112bp）基因型及等位基因频率比较Tab.4Comparison of genotype and allele frequencies of ADAM33gene T1（83、112bp）between COPD and its complications in
northern Guizhou
组别
无并发症的COPD COPD+慢性COPD+低氧血症
合计
χ2值
P值例数
8
27
18
53
T1基因型（83bp）
TT
8
22
16
46
2.94
0.23
CT
5
2
7
CC
等位基因
T
16
49
34
99
2.807
0.246
C
5
2
7
T1基因型（112bp）
CC
8
23
14
45
3.259
0.196
CT
4
4
8
TT
等位基因
C
16
50
32
98
3.091
0.213
T
4
4
8
AM33are associated with airway inflammation and lung func⁃
tion in COPD［J］.BMC Pulm Med，2014，14（1）：1⁃10.
［8］ZHANG R，LI H，ZHAO H，et al.Polymorphisms in a disinte⁃grin and metalloprotease33gene and the risk of chronic ob⁃
structive pulmonary disease：a meta⁃analysis［J］.Respirology，
2014，19（3）：312⁃320.
［9］王莎莎，关键，王珊，等.ADAM33基因Q⁃1、T2位点多态性与新疆哈萨克族、汉族人慢性阻塞性肺疾病易感性的关
系［J］.实用医学杂志，2016，32（7）：1100⁃1103.
［10］李双，胡昕，王琼，等.ADAM33基因Q⁃1、T2位点基因多态性与新疆维吾尔族人慢性阻塞性肺疾病的相关性［J］.
中国老年学，2014（18）：5029⁃5031.
［11］ZHOU D C，ZHOU C F，TOLOO S，et al.Association of a dis⁃integrin and metalloprotease33（ADAM33）gene polymorphisms
with the risk of COPD：an updated meta⁃analysis of2，644cas⁃
es and4，804controls［J］.Mol Biol Rep，2014，42（2）：409⁃
422.
［12］XIAO J，HAN J，WANG X，et al.Association of ADAM33
gene with susceptibility to COPD in Tibetan population of China.
［J］.Mol Biol Rep，2011，38（8）：4941⁃4945.
［13］MARTÍNEZ D，LEMA D，DEL D，et al.Single nucleotide polymorphisms V4and T1of the ADAM33gene in Venezuelan
patients with asthma or chronic obstructive pulmonary disease
［J］.Invest Clin，2016，57（2）：176⁃186.
［14］AIERKEN H，WANG J，WUSHOUER Q，et al.Polymor⁃phisms of the ADAM33gene and chronic obstructive pulmonary
disease risk：a meta⁃analysis［J］.Clin Respir J，2014，8（1）：
108⁃115.
［15］罗雪梅，严思敏，葛卫红.ADAM33基因多态性与慢性阻塞性肺疾病易感性关系的Meta分析［J］.
药学与临床研究，
2013，21（5）：575⁃579.
［16］张伟兵，王欣燕，田晓彦，等.ADAM33基因多态性影响慢性阻塞性肺疾病气道炎症［J］.中国呼吸与危重监护杂志，
2012，11（1）：15⁃18.
（收稿：2017⁃03⁃25编辑：黄月薪）
超声引导胸椎旁神经阻滞复合丙泊酚在胸腔镜下胸交感神经链切断术中的应用
李辉徐金东王庆谢亮田单朱亮先曾丽蓉王晟
【摘要】目的探讨超声引导胸椎旁神经阻滞复合丙泊酚应用于胸腔镜下胸交感神经链切断术的有效性及安全性。方法纳入122例多汗症患者，男63，女59例，将患者分成A组及C组，每组各61例。
A组超声引导胸椎旁神经阻滞复合丙泊酚麻醉，C组行常规气管插管静脉全麻，记录两组患者入手术室
（T0）、麻醉完成时（T1）、切皮时（T2）、电凝切断T4交感神经干时（T3）、手术结束时（T4）的
心率（HR）、平
均动脉压（MAP）和脉搏氧饱和度（SpO2）及术后清醒时间、术后（T2h、T4h、T8h、T12h、T24h）VAS评
分、术后咽喉不适等。结果两组均顺利完成手术，A组同C组相比，T0-T4的HR、MAP和SpO2无明显差
别（P>0.05）；术后清醒时间、术后进食时间、术后咽喉不适、住院费用差异有统计意义（P<0.05），A组
优于C组；术后VAS评分T2h、T4h、T8h、T12h，A组优于C组（P<0.05），T24h两组没有明显差异
（P>0.05）。结论超声引导胸椎旁神经阻滞复合丙泊酚麻醉可以安全有效的应用于胸腔镜下胸交感
神经链切断术。
【关键词】胸椎旁神经阻滞；超声；胸腔镜；胸交感神经链切断术；快速康复
The application of ultrasound⁃guided paravertebral anaesthesia combined with propofol in the thoracoscopic
sympathectomy LI Hui*，XU Jindong，WANG Qing，XIE Liang，TIAN Dan，ZHU Liangxian，ZENG Lirong，
WANG Sheng.Department of Anesthesiology，Xiaolan Peoples Hospital of Zhongshan，Zhangshan528415，China
Corresponding author：WANG Sheng E⁃mail：shengwang_gz@163
【Abstract】Objective To investigate the safety and effectiveness of ultrasound⁃guided paravertebral anaes⁃
thesia combined with propofol in the thoracoscopic sympathectomy.Methods Total63male and59female
patients with hyperhidrosis were recruited.The patients were equally divided into two groups：group A and C.
Patients in group A received ultrasound⁃guided paravertebral anaesthesia combined with propofol.Patients in group
doi：10.3969/j.issn.1006⁃5725.2017.14.014
基金项目：广东省建设中医药强省科研基金（编号：20141002）；贝朗麻醉科学研究基金（编号：Z022016001）
作者单位：528415广东省中山市，南方医科大学附属小榄医院麻醉科（李辉，朱亮先，曾丽蓉）；510080广州市，广东省医学科学院，广东省人民医院麻醉科（徐金东，王庆，王晟），胸外科（谢亮，田单）
通信作者：王晟E⁃mail：shengwang_gz@163

版权声明：本站内容均来自互联网，仅供演示用，请勿用于商业和其他非法用途。如果侵犯了您的权益请与我们联系QQ:729038198，我们将在24小时内删除。