对氧磷酶
    苏显明，崔长琮，崔翰斌，王新阳
【关键词】 冠心病；对氧磷酶；基因多态性；相关性
  摘要：目的 确信对氧磷酶1(PON1)基因192位GlnArg多态性与陕西地域汉族冠心病(CHD)患者发病之间的关系。方式 对动脉造影确诊的222例冠心病患者和164例非冠心病患者，采纳PCR酶切法检测PON1基因192位GlnArg多态性并进行对照分析。结果 陕西地域汉族人等位基因R和Q频率别离为%和%，其中CHD组RR、QR、QQ基因型别离占%、%、%，对照组RR、QR、QQ基因型别离占%、%、%；CHD组等位基因R频率占%，Q频率占%，对照组的等位基因R频率占%，Q频率占%，组间比较无显著性不同(P>；心肌梗死和非心肌梗死、冠状动脉病变不同程度间等位基因R和Q频率及RR、QR、QQ基因型之间无显著性不同(P>。结论 陕西汉族人PON1192位GlnArg基因多态性与CHD发病之间无相关性。
  关键词：冠心病；对氧磷酶；基因多态性；相关性
  Clinical study on the relationship between PON1 192 GlnArg polymorphism　and Han patie
nts with Coronary heart disease in Shaanxi
  ABSTRACT: Objective To investigat the relationship between PON1 192 GlnArg gene polymorphisms and coronary artery lesions in Shaanxi Han Chinese. Methods A total of 222 cases with one or more than two branches narrow (≥50%) and 164 cases with no coronary artery narrow(<30%), were diagnosed by coronary angiography. PON1 192 GlnArg gene polymorphisms were tested by PCRrestriction enzyme digestion in these two groups and analyzed. Results The frequencies of Arg (R) and Gln (Q) in Han population of Shaanxi province were % and %, respectively. The frequencies of RR, QR and QQ genotypes of PON in CHD group were %, % and %, respectively; and those in control group were %, % and %, respectively; the frequencies of R and Q allele in CHD group were % and %, and those in control group were % and %. No differences were found in PON gene GlnArg polymorphisms between myocardial infarction and non infarction groups, and no differences were found among different narrow degrees of coronary artery (P>. Conclusion There was no relationship between PON1 192 GlnArg gene polymorphisms and Shaanxi Han patients with coronary heart disease.
基因多态性
  KEY WORDS: coronary heart disease; paraoxonase1; gene polymorphism; relationship
  对氧磷酶1(paraoxonase1, PON1)是由肝脏合成的芳香酯酶，具有爱惜高密度脂蛋白(highdensity lipoprotein, HDL)的作用。研究显示PON1是惟一与HDL结归并避免低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)被氧化修饰的蛋白，其表型由PON1 192 GlnArg决定。最近几年就PON1多态性与冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary atherosclerotic heart disease, CHD)相关性的研究，结论不一。国内包括台湾地域数家单位对国人PON1R192与CHD的相关性进行了研究[14]，但结果互为矛盾。咱们对陕西地域汉族CHD患者PON1基因多态性进行检测，以确信该多态性与CHD发病之间的相关性。
  1 材料与方式
  研究对象 选取2003年3月至2004年8月持续收住西安交通大学医学院第一附属医院心血管内科的陕西地域汉族患者386例，其中CHD患者222例(CHD组)，年龄45-78±岁；非CHD对照组164例，年龄34-76±岁。每位患者入院时均通过询问病史、体魄检查、X线检查、心电图、超声心动图、和相关实验室检查等并进行冠状动脉造影。排除有亲缘关系、急慢性肝肾疾病、肿瘤、脑血管病、周围血管性疾病等。
  冠状动脉造影 采纳荷兰飞利浦公司生产的Integris H5000C型数字减影机，按Judkins法依次行CAG，常规多体位投照，冠脉造影片均通过至少两位有体会的专业医生阅读，阅读前均不知本研究内容。采纳直接法定量冠脉造影分析软件测定病变血管的狭小程度。
  分组方式 按CAG结果分组： 左冠脉骨干、左前降支、左回旋支及右冠脉中至少一支血管狭小程度≥50%者入CHD组；未发觉冠脉狭小或狭小程度<30%者入对照组。按冠脉病变狭小程度分组： 左前降支、左回旋支或右冠脉中任何一支血管均无狭小或狭小程度<30%为0支病变；左前降支、左回旋支或右冠脉中任何一支血管狭小程度≥50%者为1支病变；任何2支或3支血管狭小程度≥50%者别离归为2支病变组及3支病变组。关于左冠脉骨干病变者，不管左前降支及左回旋支有无病变，均归为2支病变组，假设同时归并右冠脉病变那么归为3支病变组。
  血标本搜集 患者于行CAG术前空肚取外周静脉血20mL，置于密闭干燥管中，注入含有5g/L EDTANa 30μL和抑肽酶40μL试管中混匀，2h内于4℃ 3000r/min离心10min，分离血浆，血细胞成份于-80℃冰箱保留待提取DNA。
  观看指标 采纳酚氯仿法提取DNA，PCR扩增引物由TaKaRa大连宝生物工程合成。引物序
列如文所示，上游引物序列：5′TATTGTTGCTGTGGGACCTGAG3′，下游引物序列：5′CACGCTAAACCCAAATACATCTC3′。PCR反映条件为： 95℃预变性5min，95℃变性1min，62℃退火45s，72℃延伸30s，共35个循环，最后72℃延伸7min。PCR酶切法检测PON1192位GLN/ARG基因多态性：限制性内切酶反映体系 20μL，PCR产物μL(10mmol/L)；内切酶10×NEB缓冲液μL，AlwI限制性内切酶μL(5u/μL)，加去离子水5μL。轻轻混匀后，置37℃消化留宿。采纳20g/L琼脂糖凝胶电泳，在常温、离子强度为1×TAE条件下，70V恒压电泳1h，分离AlwI酶切产物。紫外分析仪下观看目的片断，共产生3种基因型： RR、QR、QQ。RR基因型显现67bp和34bp各2条带；QR基因型显现100bp、67bp和34bp各3条带；QQ基因型显现100bp 1条带。
  统计学处置 所有数据均输入运算机，用PC软件包进行统计分析。率间的比较用χ2查验，P<为有统计学意义。依照HardyWeinberg平稳固律计算各基因型个体数的期望值，以χ2查验进行HardyWeinberg平稳吻合性查验。
  2 结果
  PON1 192位GlnArg基因型 依据AlwI酶切位点的存在与否判定其基因型，共产生3种基因型(
图1)。
  图1 限制性内切酶AlwI消化PCR扩增产物的琼脂糖电泳图谱（略）

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