doi:10.3971/j
.issn.1000-8578.2012.08.024收稿日期:2011-09-28;修回日期:2011-12-
13作者单位:1.830011乌鲁木齐,新疆医科大学附属肿瘤医院胃肠外科,2.
检验科通信作者:张国庆,E-mail:zgqprofessor@sina.com作者简介:尹东(1970-)
,博士,主任医师,主要从事肿瘤外科临床研究与肿瘤基础研究
IL-1β基因多态性、
幽门螺旋杆菌感染及其交互作用与新疆汉族胃癌发生的关系
尹 东1,孟 涛1,王琦三1,王 飞2,艾克热木·玉素甫1,葛 磊1,张国庆1
Interactions between IL-1βGene Polymorphism and Helicobacter Pylori Infection as Wellas Re
lationship of Helicobacter Pylori and Gene with Risk of Gastric Cancer in Han Na-tionalities in Xinjiang
Yin Dong1,Meng Tao1,Wang Qisan1,Wang Fei 2,Aikeremu·Yusufu1,Ge Lei 1,Zhang 
Guoqing1
1.Department of Gastrointestina,Affiliated Tumor Hospital of Xinjiang Medical University,Urumq
i830011,China,2.Department of Clinical LaboratoryCorresponding Author:Zhang Guoqing,E-mail:zgqprof
essor@sina.comAbstract:Objective To evaluate the interactions between IL-1βg
ene polymorphism and Helicobacter py-lori(Hp)as well as the relationship of Hp and IL-1βgene polymorphism with risk of gastric cancer inHan nationalities in Xinjiang.Methods Snapshot method was carried out to analysis the polymorphism ofIL-1βgene in 229 cases of gastric cancer and in256 controls.The assure Hp rapid test was used to inves-tigate the presence of IgG antibodies to Hp
.Results It is possible that incidence of gastric cancer in Hanpopulation is associated with the genetic polymorphism of IL-1βand Hp infections.In Han populations,interactions between Hp infections and gene showed that:individuals having IL-1βg
ene at rs3136558 siteTT genotype and Hp infec
tions had a 2.25-fold(95%CI:1.37~3.69)increased risk of developing GCcompared with those who having CT+CC genotype but no Hp infections.Conclusion The interactionsbetween the genetic polymorphism of IL-1βg
ene and Hp infections increase the risk of gastric cancer.Key words:Gastric Cancer;Han nationality;IL-1β;Genetic polymorphism;Helicobacter pylori;Interaction摘 要:目的 探讨IL-1β基因多态性、幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,HP)感染及其交互作用与新疆汉族胃癌发生的关系。方法 采用Snapshot技术分析229例胃癌患者和作为对照的256例非胃癌患者IL-1β基因rs1143633、rs3136558和rs1143630位点基因型的分布;采用幽门螺旋杆菌IgG抗体检测试剂盒检测研究对象Hp感染率。结果 IL-1β基因r
s3136558位点多态性、Hp感染与新疆汉族胃癌的发病有关;Hp感染与基因之间的交互作用表明,在汉族人中,Hp感染阳性,同时携带IL-1β基因rs3136558 TT基因型个体发生胃癌的危险性是Hp感染阴性并携带IL-1β基因r
s3136558 CT+CC基因型个体的2.25倍(95%CI:1.37~3.69)。结论 Hp感染和IL-1β基因多态之间存在着交互作用,
共同促进胃癌的发生。
关键词:胃癌;汉族;IL-1β;
单核苷酸多态性;幽门螺旋杆菌;交互作用中图分类号:R735.2  文献标识码:A  文章编号:1000-8578(2012)08-0976-
040 引言
大量流行病学调查表明,胃癌的发生与幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染密切相关[1-
4]。国际癌症研究中心(IARC)将Hp列为Ⅰ类致癌因子。然而,在Hp感染人中仅有少数个体发展为胃癌,说明胃癌发生是多因素综合的结果,其中个体遗传易感性在胃癌发生中起重要作用,尤其是与免疫炎症反应相关的细胞因子基因多态性可以
部分解释不同个体感染Hp后胃黏膜炎症反应程度
及其发展结局的差异,并由此将基因多态性、Hp感染与胃癌发生的关系联系起来。本研究探讨IL-1β基因多态性、Hp感染及其交互作用与新疆汉族胃癌发生的关系,以期为胃癌的防治提供理论依据。1 资料与方法1.1 研究对象
收集2007—2009年间新发的、
由新疆医科大学附属肿瘤医院经病理确诊的原发性胃癌患者,并愿意参加调查者,共计229例。按照以医院为基础的病例对照研究的要求,选择与病例无血缘关系、同民族、同性别、年龄相差±5岁、同期体检的健康人,共计256例。每位研究对象抽取静脉血4 
ml,以·
679·肿瘤防治研究2012年第39卷第8期
EDTA抗凝,-20℃低温保存,直至提取DNA。1.2 基因组DNA的提取
采用改良Miller盐析法[5]
抽提人白细胞DNA。
1.3 Snap
shot SNP分型技术测定基因型1.3.1 PCR扩增 引物用在线Primer3软件设
计。引物序列见表1。反应体系(20μl
):包含1×HotStarTaq 
buffer,3.0mM Mg2+
,0.3 mMdNTP,1 U HotStarTaq p
olymerase(QiagenInc.),1μl样本DNA和1μ
l多重PCR引物。PCR循环程序:95℃2 min;94℃20 s,65℃40 s,72℃90s共11个循环;94℃20 s,59℃30 s,72℃90 
s共24个循环;72℃2 min;4℃循环。1.3.2 Snap
shot多重单碱基延伸反应 延伸引物见表2。延伸反应体系10μl(包括5 SNaPshotMultiplex Kit(ABI),5μl,纯化后多重PCR产物2μ
l,延伸引物混合物1μl,超纯水2μl。PCR循环程序:96℃1 min;96℃10 s,5
0℃5 s,60℃30 s共28个循环;4℃循环。
1.3.3 延伸产物上ABI3130XL测序仪 取0.5μ
l纯化后的延伸产物,与0.5μl Liz120 SIZE STAND-ARD,9μl Hi-Di混匀,95℃变性5 min后上ABI3130XL测序仪。用GeneMapper 4.0(AppliedBio-systems Co.,Ltd.,USA)来分析原始数据。1.4 Hp感染检测
采用幽门螺旋杆菌IgG抗体检测试剂盒(胶体金法)检测研究对象Hp。质控线、现症感染条带、测试线皆显示颜条带或质控线、测试线皆显示颜条带者为Hp感染阳性,仅质控线显示颜条带者为阴性结果。
1.5 统计学方法
用SPSS15.0统计软件进行数据分析。采用Lo-g
istic回归分析。以P<0.05为差异有统计学意义。2 结果
2.1 基因型鉴定
IL-1β基因S
NPs位点基因型是通过ABI3130XL测序仪鉴定。各位点基因分型图见图1
。2.2 IL-1β基因tagSNPs位点等位基因及基因型与胃癌的关系
经Hardy-Weinberg遗传平衡检验得出IL-1β
基因rs1143633、rs3136558和rs1143630位点所对应的P值均>0.05,表明研究对象的选择无遗传学偏差,该体是遗传平衡体,具有一定的人代表性。在汉族人中,IL-1β基因rs1143633和rs1143630位点不论是等位基因还是基因型在病例组和对照组中的分布频率差异均无统计学意义(P>0.05);将IL-1β基因rs3136558位点纯合子(CC)与杂合子(CT)合并前后均发现,基因型分布在病例组和对照组分布有统计学意义(χ2
12.50,P=0.00),调整年龄、性别等混杂因素后统计量值和P值变化不大,即携带C等位基因者发生胃癌的风险降低(OR=0.51,95%CI:0.35~
0.74),结果见表3。2.3 Hp感染与胃癌的关系
结果显示Hp感染与新疆汉族胃癌的发病相关,即Hp感染阳性患者发生胃癌的风险增加(OR=1.71,95%CI:1.19~2.46
),见表4。2.4 IL-1β基因r
s3136558位点与Hp感染之间的交互作用与胃癌的易感性
Hp感染与IL-1β基因r
s3136558位点不同,基因型组合在病例组与对照组中分布情况见表5。Hp感染阳性,同时携带IL-1β基因r
s3136558 TT基因型个体发生胃癌的危险性是Hp感染阴性并携带IL-1β基因rs3136558 CT+CC基因型个体的2.25倍(95%CI:1.37~3.69
)。表1 IL-1β基因各S
NP位点上、下游引物序列Table 1 The up and low primer sequence of IL-1βgene in different positions
rs1143633 CCCAGCTTCATCCCTACTGGTGT 
GAGCGTGCAGTTCAGTGATCGT 221bpIL-1β
rs3136558 ACAGGTGCACCCCACCACAC 
GAGGAGGAAAGGGCTTGAAAGAA 
213bprs1143630 CTGTAAGGTGTCAGAAAGCCCACAT C
CCTCTCTGAAGCTCAAGGAGGTTA 100bp
Note:SNP:single nucleotide polymorphisms表2 I
L-1β基因各S
NP位点延伸引物Table 2 The extension primer of IL-1βg
ene in different positionsrs1143633SR TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCAGGCCTCGTGAGGCGAGGrs3136558SR T
TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGAAAGAATCCCGAGCTTCTAAAGrs1143630SR T
TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCTCTGAAGCTCAAGGAGGTTAAG·
779·肿瘤防治研究2012年第39卷第8期
图1 IL-1β基因S
NPs位点基因型分型图Figure 1 The genotype of IL-1βgene polymorphisms in different positions表3 IL-1β基因不同位点单核苷酸多态性与汉族胃癌发病风险的相关性分析
Table 3 Correlation of IL-1
NPs and susceptibilityof gastric cancer in Han nationalitiesrs1143633 Genotyp
e AA 5926.708232.162.08 
0.35 
1.00 
1.00AG 121(54.75)124(48.63)1.36(0.89~2.06)1.33(0.87~2.03)GG 
41(18.55)49(19.22)1.16(0.68~1.98)1.16(0.68~1.98
)Total 221 255Allelotyp
e A 239(54.07)288(56.47)0.55 0.46G 
203(45.93)222(43.53
)rs3136558 Genotyp
e TT 104(46.85)79(30.98)12.50 
0.002 
1.001.00CT 91(40.99)135(52.94)0.51(0.35~0.76)0.51(0.34~0.76)CC 27(12.16)41(16.08)0.50(0.28~0.88)0.50(0.28~0.88)TT 
104(46.85)79(30.98)12.50 0.002 
1.001.00CT+CC 1
18(53.15)176(69.02)0.51(0.35~0.74)0.51(0.35~0.74
)Total 222 255Allelotyp
e T 299(67.34)293(57.45)9.86 0.002C 
145(32.66)217(42.55)rs1143630 Genotyp
e CC 149(67.12)180(70.87)1.28 
0.53 
1.00 
1.00AC 65(29.28)63(24.80)1.25(0.83~1.88)1.26(0.84~1.91)AA 
8(3.60)11(4.33)0.88(0.34~2.24)0.92(0.36~2.37
)Total 222 254Allelotyp
e C 363(81.76)423(83.27)0.38 0.54
A 
81(18.24
)85(16.73
)·879·肿瘤防治研究2012年第39卷第8期
表4 Hp感染与新疆汉族胃癌发病风险的相关性分析
Negative 146(57.03)101(44.10)8.43 0.004 
1.00 
1.00
Positive 110(42.96
)128(55.90
)1.68(1.17~2.41
)1.71(1.19~2.46
)Total 
256 
229
Note:Hp
:helicobacter pylori表5 Hp感染、IL-1β基因r
s3136558位点交互作用与汉族胃癌易感性Table 5 Correla
tion of interaction between Hp infections and IL-1βgene at rs3136558and susceptibility of gastric cancer in Han
 -CT+CC 70 94 16.90 0.00 1.00 
1.00
 -TT 31 45 0.08 0.78 0.93(0.53~1.61)0.89(0.53~1.69)()()3 讨论
本研究对IL-1β基因S
NP位点的选取是根据国际人类基因组单体型图计划(Haplotype MapProject,简称HapMap计划)
公布的中国汉族北京居民(CHB)的基因型数据(http://www.hapmap.org),采用Haploview软件包[6]
(http://www.Broad.mit.edu/mpg/haploview),设定相应的运行参数,即:最小等位基因频率MAF>0.05和连锁不
平衡参数r2
>0.8。符合条件的共有4个SNPs位点,即:rs1143633、rs1143643、rs3136558和rs1143630。运用Tagger命令,挑选出rs1143633、rs3136558和rs1143630三个tagSNPs位点作为IL-1β基因的检测位点。结果表明,在汉族人中,将IL-1β基因rs3136558位点纯合子(CC)与杂合子(CT)合并前后均发现,携带C等位基因者发生胃癌的风险降低(OR=0.51,95%CI:0.35~0.74)。大量的回顾性、前瞻性流行病学资料以及动物
模型表明胃癌的发生与Hp感染相关[3,7-10]
。有充分证据表明Hp是胃癌的一个主要病因,如果Hp
被根除,胃癌的相对危险性将显著减低[11-
12]。本次研究在汉族人中得到了与上述研究一致的结果,即Hp感染阳性患者发生胃癌的风险增加(
OR=1.71,95%CI:1.19~2.46
)。对于Hp感染和IL-1β基因多态性的相互作用,我们的分析结果显示,Hp感染阳性并携带IL-1β基因r
s3136558 TT基因型个体交互作用后对胃癌的比值比比它们单独作用时增强,说明Hp的感染和IL-1β基因多态性有联合作用,共同促进了胃癌的发生,其机制也许是Hp感染引起胃酸分泌减少发生慢性胃炎,炎性因子IL-lβ基因的变异,进一步发挥其生物学效应,抑制胃酸分泌,促进了萎缩性胃炎的发生,发展为胃癌。
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·
979·肿瘤防治研究2012年第39卷第8期多态性的作用

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