真菌（1-3）-β-D葡聚糖测定规范操作
1.目的
  建立真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测标准操作规范，保证实验结果的准确性。
2.授权操作人
经培训合格的微生物实验室检验人员。
3.实验原理
（1-3）-β-D葡聚糖检测原理：真菌（1-3）-β-D葡聚糖激活酶反应主剂中的G因子后形成凝固蛋白， 根据其所引起的浊度变化对真菌（1-3）-β-D葡聚糖浓度进行定量测定。
4．产品性能指标
4.1  灵敏度    10pg/ml
4.2  精密度      批间  CV≤10% 。
4.3  准确性     回收率75-125%。
4.4  标准曲线相关系数 r绝对值≥0.980 
5．实验组成
5.1实验仪器及器具： 
MB-80微生物快速动态检测系统、洁净工作台、低速离心机、恒温仪， 20~200µl加样器、100~1000µl加样器、旋涡混合器、定时器。
5.2实验耗材：
200µl无热原吸头、1000µl无热原吸头、无热原平底试管、无热原真空采血管。
5.3试剂盒组成：
真菌（1-3）-β-D 葡聚糖检测试剂盒（光度法）：
试剂盒包括反应主剂和样品处理液。
6．工作环境
  相对湿度：20%~80%；
温度控制：10~30℃；
电源电压：220V±10%，50Hz±2%。
7．标本采集及保存
7. 1检测样本：
血液、脑脊液、胸腹水、肺泡灌洗液等。
7.2采集要求：
采样过程要求无菌操作，用专用的无热原真空采血管（肝素类抗凝）。
常规病人早上用药前采血/取样（血透患者透析前采血）。
7.3样本保存：
样本采集后应在3000转/分进行离心，若不能及时检测，应将血浆转移至无热原转移管内，在-20℃冰箱中冷冻保存，一周内使用。
8．操作程序
8.1 打开MB-80微生物快速动态检测系统主机、电脑及恒温仪预热30min。
8.2 打开MB-80微生物快速动态检测系统软件，录入病人信息、样本种类及检测项目等信息后点击采集。
8.3 血液前处理过程，无菌操作，用专用无热原真空采血管（肝素类抗凝）抽取静脉血4ml轻轻混匀，按转速3000r/min进行离心1分钟，得到富含血小板血浆。
8.4 取上述富含血小板血浆100µl，加入到样品处理液中，轻轻摇匀10秒后插入恒温仪加热区中进行70℃干热10min。
8.5干热结束后，将前处理液冷却5min，至室温后取出（取出时切忌震荡）。
8.6 取上述前处理液中上清液200µl加入到反应主剂中，轻轻混匀（一般混匀10秒即可），待
完全溶解至透明后，全部移液至平底试管中(不要产生气泡)，立即插入MB-80微生物快速动态检测系统中进行检测。
8.7 反应结束后仪器自动计算结果并保存。
待测血浆样品制备、检测示意图
9．操作注意事项
9.1预热采集
在进行试验之前，仪器一定要提前预热30min，达到工作温度后，按要求填写表头信息，完毕后点击采集，使仪器处于采集状态后再进行试验。
9.2 样本预处理
9.2.1 血液标本3000r/min离心1min。
9.2.2 取富含血小板血浆（离心后上层清液的中部）。
9.2.3 70℃加热时间严格控制在10min。
9.2.4 样本处理液加热冷却后，不要震荡以免将处理过的下层干扰物质悬浮上来。
9.2.5 取处理液的上清液。
9.2.6 加入主剂的200µl液体要全部转移至平底试管，转移过程中不能出现气泡。
9.2.7 平底试管要一次插到底，插入后不要再碰触。
10．结果判断与分析
    检测值﹤10pg/ml,阴性。
检测值介于10～20pg/ml之间，临床观察期，建议动态采血检测。
检测值﹥20pg/ml，阳性，建议再次采血以确诊。
11．实验解释
本实验结果仅对本标本负责，提供给临床参考，请结合其他诊断方法和临床表现做综合诊断。
12. 特殊标本处理
对一般黄疸、溶血、乳糜血标本，稀释2-5倍后进行检测。稀释步骤为：取100µl血浆标本加入到前处理液中，经过70℃干热并冷却后，再取225µl上述经处理后的标本加入到另外的一
支900µl前处理液中，即得稀释5倍的待测标本（如需其他稀释倍数则按相应的比例进行），然后取200µl加入到反应主剂，溶解后全部转移至平底试管中插入仪器进行检测，注意需在检测软件中“稀释倍数”一栏填上稀释倍数，仪器会自动按照相应的稀释倍数计算结果。
备注：对于严重的黄疸、溶血、乳糜血标本，应重新采血。
13．干扰因素
13.1产生的假阳性的原因有：应用纤维膜进行血液透析患者、某些纱布或其他医疗物品中含有葡聚糖、某些品牌的静脉制剂（白蛋白、凝血因子、免疫球蛋白等）含有葡聚糖、某些细菌败血病患者（尤其是链球菌败血症）。
13.2特殊真菌如接合菌（毛霉菌、根霉菌）细胞壁没有（1-3）-β-D 葡聚糖成分，隐球菌细胞壁外有荚膜致使（1-3）-β-D 葡聚糖释放不出，这些真菌无法检测到。
14．质量控制
  标本进行测定时应同时进行标准曲线的制作，目的是测定真菌（1-3）-β-D葡聚糖的测试性能及验证检测结果的准确性能。（标准曲线的制作见标准曲线制作规范操作文件）
15．维护保养
    15.1 仪器保养 注意防尘、防水、防污染、防止异物进入试管孔内；定期做好系统的表面清洁。
    15.2 软件维护 本系统的计算机应只供本系统使用，对外来的一切软件、数据文件在使用前一定要先查杀病毒，避免造成日常记录文件的损坏或丢失。
    15.3 三个月使用检测软件中的[系统自检]功能，确保仪器工作正常。
16．安全防护措施
      16. 1 试剂盒应2~8℃避光保存，使用前应检查有效期。若过期或出现破损禁止使用，以免影响测定结果。
      16.2 试剂盒为体外诊断试剂，其中的成分可能会导致皮肤和眼睛疼痛，也可刺激黏膜和上呼吸道，所以应避免与皮肤接触，避免吸入和食入，禁止使用于人体。
  　16.3 3 d实验操作中避免微生物及细菌污染
17.标本处理
已检验过的标本作高压灭菌后由专门人员统一处理
18. 异常结果处理
    本实验结果异常需与临床诊断相符合，不符合的结果应及时复查或与临床联系
19．应急处理
    若出现不能自行解决故障，应及时联系经销商或工程师处理，并告知微生物实验室负责人。
20.　参考文献
① 张秀珍，朱德妹主编．临床微生物知识检验问与答．人民卫生出版社．第一版．2008
② 周庭银，倪语星主编．临床微生物检验标准化操作．上海科学技术出版社．第一版．2009
③ MB-80微生物快速动态监测系统配套使用说明书
④ 中国合格评定国家认可委员会．CNAS－GL23:2008医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的指南

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