RevertAid第一链cDNA Synthesis试剂盒
#K1621, #K1622
分析证明书
#K1621
Lot

质量控制
采用100 fg对照GAPDH RNA和对照引物进行RT-PCR反应，通过在1%琼脂糖上进行凝胶电泳和溴
化乙锭染显示得到足够量的496 bp的产物
质量认证人：Jurgita Zilinskiene
页码
试剂盒组成…………………………………………………………….2 存储条件……………………………………………………………….2 产品说明……………………………………………………………….2 注意事项…………………………………………………………….....3 操作步骤…………………………………………………………….....6
RT-PCR…………………………………………………………….6 reaction buffer合成cDNA用于克隆………..………………………………………7 实验对照……………………………………………………………….8 问题分析与解决……………………………………………………...10
试剂盒成分
RevertAid第一链cDNA合成试剂盒
20 次
#K1621
100 次
#K1622
RevertAid M-MuLV反转录酶（200 u*/μl）
25 μl
120 μl
RiboLock RNA酶抑制剂 (20 u**/μl)
25 μl
120 μl
5×反应缓冲液
（250 mM Tris-HCl (pH , 250 mM KCl, 20 mM MgCl2, 50 mM DTT）
150 μl
500 μl
10mM dNTP 混合物
50 μl
250 μl
Oligo(dT)18 引物 100 μM, μg/μl (15 A260 u/ml)
25 μl
120 μl
随机六聚体引物 100 μM, μg/μl (6 A260 u/ml)
25 μl
120 μl
GAPDH正向引物, 10 μM
5’ – CAAGGTCATCCATGACAACTTTG – 3’
20 μl
20 μl
GAPDH反向引物, 10 μM
5’ – GTCCACCACCCTGTTGCTGTAG - 3’
20 μl
20 μl
对照GAPDH RNA
kb 3’-poly(A) tailed RNA transcript, μg/μl
20 μl
20 μl
无核酸酶高纯度水
ml
ml
*  一个单位的RevertAidM-MLV逆转录酶在37℃10 分钟将1 nmol 的dTMP转化为多核苷酸组分（吸附在DE81上）。
**  一个单位的RiboLockRNase酶抑制剂抑制5ng RNA酶A 50%的活性。
存储条件
试剂盒中所有组分应存储在-20°C。对照用RNA可存储于-70°C以便长期使用。
产品说明
RevertAid第一链cDNA合成试剂盒以mRNA或者总RNA为模板，高效合成第一链cDNA。本试剂 盒使用RevertAid M-MuLV反转录酶，它的RNA酶H的活性与AMV反转录酶相比较低。该反转录酶可 耐受42-50°C温度，合成的cDNA片段长度达13kb。
试剂盒中含有RiboLock 重组RNA酶抑制剂，防止RNA降解，可耐受55°C高温。 试剂盒同时含有oligo(dT)18和随机六聚体引物。随机六聚体引物与模板非特异性地结合，以总RNA
中任何RNA为模板合成cDNA。oligo(dT)18选择性和RNA 3’poly(A)配对结合，只以有poly(A)
尾巴的
mRNA为模板合成cDNA。使用本试剂盒也可采用序列特异性引物。 合成的第一链cDNA能直接用作PCR或荧光定量PCR的模板，第二链cDNA的合成或线性RNA扩增，
也可用于需要用带有放射性或非放射性核苷酸标记第一链cDNA的实验，比如将标记好的第一链cDNA
作为杂交实验中的探针或者用于微阵列分析。

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