乙肝五项指标两种常用检测方法的比较分析
作者：赵治凤 贾秋龙乙肝检测结果是reactive
来源：《中国当代医药》2012年第08期
[摘要] 目的 比较分析乙肝五项指标两种检测方法（TRFIA和ELISA）的应用价值。 方法 对501份血清分别采用时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）和酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测乙肝五项指标，并统计分析两种方法的检测结果的阳性率和阳性符合率。 结果 两种方法检测血清中的乙肝五项的阳性率差异均无统计学意义（P > 0.05），乙肝五项指标的阳性符合率分别是HBsAg 99.6%、HBsAb 85.7%、HBeAg 98.2%、HBeAb 97.6%、HBcAb 97.1%。 结论 TRFIA和ELISA两种方法对检测乙肝标志物乙肝五项均有较高的特异性和敏感性，ELISA法方便快捷，更适合基层医院使用，但易出现假阳性和假阴性，TRFIA法不仅特异性强、敏感性高， 并且能够准确定量，与ELISA法相比，能更好地反映患者体内乙肝病毒复制状况、乙肝疫苗接种后免疫效果以及抗病毒药物的疗效。
[关键词] 乙肝五项指标；时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）；酶联免疫吸附试验法（ELISA）；阳性率；符合率
[中图分类号] R512.6+2[文献标识码] A[文章编号] 1674-4721（2012）03（b）-0078-02
目前，在各级医院实验室检测乙肝病毒血清标志物开展最为广泛的项目就是乙肝五项指标[1]，乙肝五项指标俗称“两对半”，包括乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎表面抗体（HBsAb）、e抗原（HBeAg）、e抗体（HBeAb）、核心抗体（HBcAb），在许多方面如诊断乙肝、乙肝判断愈后、筛选献血员、乙肝的流行病学调查、判断人对乙型肝炎的免疫水平，对食品、保育及饮水管理行业人员定期进行健康体检等起着重要的作用[2]。因此，选择一种特异、敏感、稳定的实验室检测方法检测乙型肝炎病毒的五项指标显得尤为重要，为此，本文选取了临床实验室较为常用的ELISA法和TRFIA法对501份肝病患者的血清标本进行了比对分析，现将结果报道如下：
1 材料与方法
1.1 标本来源
501份血清标本来自2009年1月～2011年9月在本院肝病科住院的的肝病患者，男 336例，女165例，年龄14～71岁，平均（40.5 ± 9.5）岁，其中TRFIA为准测出的大三阳165例
（HBsAg+，HBeAg+，抗-HBc+），小三阳142例（HBsAg+，抗-HBe+，抗-HBc+），1、4阳性86例（HBsAg+、抗-HBe+），1、5阳性91例（HBsAg+、抗-HBc+组）、其他模式17例（包括抗-HBs+、抗-HBe+、抗-HBc+单项或者多项模式）。
1.2 方法
1.2.1 仪器与试剂ELISA法使用北京普朗新技术公司酶免仪以及配套洗板机，测定试剂由上海科华生物工程股份有限公司提供，通过卫生部批检，并贴有防伪标签。TRFIA法使用上海新波生物技术有限公司生产的SYM-B10时间分辨荧光检测仪，测定试剂由上海新波生物技术有限公司提供，通过卫生部批检，并贴有防伪标签。
1.2.2 检测方法抽取患者空腹静脉血3～5 mL，入干燥试管或者促凝分离胶密封试管内，37℃放置待凝固后，离心分离血清后1～2 h内检测。ELISA法与RFIA法均严格按说明书有固定主管检验技师操作。ELISA法阳性结果判定：按酶标仪结果判读阴阳性，对弱阳性结果或者“HBsAg、HBsAb”、“e抗原、e抗体”双阳模式均须2孔复查，仍为阳性者判为阳性； TRFIA法阳性结果判定：超过下述参考范围上限，判为阳性，否则为阴性，TRFIA法检测结果参考范围：HBsAg 0～0.2 ng/mL、HBsAb 0～10 mIU/mL、HBeAg 0～0.5 PEIU/mL、HB
eAb 0～0.2 PEIU/mL、HBcAb 0～0.9 PEIU/mL。TRFIA检测设置1个平行孔复查，两次结果一致者判断为原结果，结果不符者，再次进行1个平行孔复查，第1次与第3次结果一致者判断为真阳性者或者真阴性，反之判为假阳性或者假阴性。
1.2.3 质控所用检测试剂均通过卫生部批检，试剂和质控血清均在有效期内使用。全部仪器、设备运行状况良好，每日质控结果、每批测定阴阳对照均在可信范围，乙肝五项每次参加河南省临检中心质控均合格。
1.3 统计学处理
检测结果数据采用统计分析软件SPSS 11.0进行处理，以P < 0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
两种方法检测血清中的乙肝五项的阳性率差异无统计学意义（P > 0.05），两种方法检测乙肝五项指标的阳性结果有较高的符合率，见表1。
3 讨论
乙肝五项指标的检测临床实验室常用方法有胶体金免疫法（GICA，又称金标法）、酶联免疫吸附试验法（ELISA）、时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）、化学发光酶免疫法（CLEIA），但胶体金法灵敏度较ELISA法低，造成一定的漏检不可避免[3]，故临床仅仅把它作为急诊术前和大规模体检的筛查，化学发光酶免疫法是化学发光和酶免疫试验结合起来的一项技术，因其灵敏度高、线性范围宽、标志物的有效期长等优点已广泛应用于生物体系样品检测，包括蛋白质、激素、药物及核酸等[4]，但该方法仪器、试剂昂贵、有增加患者的经济负担的缺点，目前并没有得到普及使用。ELISA法是一项经典的标记免疫检测方法，自20世纪80年代开始在临床推广使用，又经过多次改进，因其具有简便、较高灵敏度和特异性等优点，已经在各级医院实验室广泛使用，但该方法只能做为定性或者半定量试验，不能很好地测定乙肝病毒血清标志物的具体含量，不能完成HBV感染的动力学观察[5]，也不能对需
要进行预防接种的高危人、肝移植、血液透析及免疫抑制患者等定期进行表面抗体浓度值定量检测[6]。时间分辨荧光免疫分析法（Time-Resolved Fluorescence，TRFIA）是继放免、酶标、化学发光、电化学发光后的一项新兴的标记免疫检测方法，该技术灵敏度可高达10~18 mol/L，针对于HBsAg最低检出量均可达0.2 ng/mL，而ELISA法检测HbsAg的灵敏度要到达0.5 ng/mL以上酶标才会呈阳性[7-8]，TRFIA法高灵敏度主要取决于它所用标志物（稀土离子）的独一无二的物理性质及化学性质：标志物体积很小（为原子标记），标记后不会影响被标志物的空间立体结构，保证了被检测物质的稳定性，因此具备了高稳定性、干扰因素少等优点。
本文统计结果显示ELISA法和TRFIA法检测血清中的乙肝五项指标的阳性率差异均无统计学意义（P > 0.05），两种方法的阳性符合率除了HBsAb外其他四项指标均在95%之上，HBsAb阳性符合率为85.7%，可能跟本文选取的血清标本中HBsAb阳性例数本身太低有关。尽管两种方法阳性符合率较高、阳性率差异无统计学意义，但从本文检测数据中仍可看出，TRFIA法检测HBsAg、HBsAb、HBeAg阳性例数均稍高于用ELISA法检测的阳性例数，表明TRFIA法灵敏度高于ELISA法，而HBeAb、HBcAb阳性例数均稍低于用ELISA法检测结果，可能跟ELISA法检测乙肝病毒抗-HBc和抗-HBe干扰因素多，容易出现假阳性[7]有关。
综上所述，TRFIA和ELISA两种方法对检测乙肝标志物乙肝五项均有较高的特异性和敏感性，ELISA法方便快捷，更适合基层医院使用，但易出现假阳性和假阴性，TRFIA法不仅特异性强、敏感性高， 并且能够准确定量，与ELISA法相比，能更好地反映患者体内乙肝病毒复制状况、乙肝疫苗接种后免疫效果以及抗病毒药物的疗效。
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（收稿日期：2012-02-07）
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