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系统医学
SYSTEMS MEDICINE
系统医学2021年2月第6卷第3期
DOI:10.19368/jki.2096-1782.2021.03.046
乙型肝炎表面抗原（HBsAg ）酶联免疫吸附试验检测灰区设置的探讨
字立源，黄苏金，陈桂余，杨婧涓，兰晓燕，尹潇，胡付娟，朱碧姝，杨雪，朱荣华
云南保山市中心血站检验科，云南保山
678000
[摘要]目的对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)酶联免疫吸附试验检测结果分析，探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)灰区设置的意义。方法对2016年1月—2017年6月无偿献血者27214份标本同时采用两个厂家酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂检测，该实验室两种试剂均设有灰区,0.5≤S/CO<1，双试剂有反应性，则报告有反应性；
单试剂有反应性，双孔复查，复查只要其中一孔有反应性，则报告有反应性，两孔均为无反应性，则报告无反应性。报告为反应性标本。所有检验标本均同时进行HBV-DNA 检测。结果共检测27214份血液标本，双试剂有反应性57份，双试剂有反应性中核酸检测有反应性43份；单灰区标本70份，核酸检测均为无反应性；单试剂反应性标
本84份，核酸检测均为无反应性；双试剂酶免检测均无反应性标27003份，核酸检测有反应性23份。临界值(Cot off)S/CO 为0.5时,A 试剂ROC 曲线下面积为0.845,95%信置区间为0.719~0.970,B 试剂ROC 曲线下面积为0.837,95%信置区间为0.725~0.984；临界值S/CO 为1时,A 试剂ROC 曲线下面积为0.792,95%信置区间为0.632~0.953,B 试剂ROC 曲线下面积为0.792,95%信置区间为0.653~0.930。该实验室试剂A 和试剂B 最佳临界值(Cut off)为(S/CO 值)0.9。结论随着检测技术的提高，乙型肝炎表面抗原(HBsAg)酶联免疫吸附试验(ELISA)检测灰区的设置是否取消，需要进行科学的性能评价，寻适合该实验室的最佳临界值。[关键词]乙型肝炎表面抗原；酶联免疫；灰区；临界值[中图分类号]R512.62
[文献标识码]A
[文章编号]2096-1782(2021)02(a)-0046-03
Discussion on the Setting of Gray Zone for Detection of Hepatitis B Surface Antigen (HBsAg)Enzyme-linked Immunosorbent Assay
ZI Li-yuan,HUANG Su-jin,CHEN Gui-yu,YANG Jing-juan,LAN Xiao-yan,YIN Xiao,HU Fu-juan,ZHU Bi-shu,YANG Xue,ZHU Rong-hua
Department of Laboratory Medicine,Baoshan City Blood Center,Baoshan,Yunnan Province,678000China [Abstract]Objective To analyze the detection results of hepatitis B surface antigen乙肝检测结果是reactive
(HBsAg)enzyme -linked
immunosorbent assay,and to explore the significance of the gray zone setting of the enzyme -linked immunosorbent assay (ELISA).Methods 27214samples of unpaid blood donors from January 2016to June 2017were tested with enzyme-linked immunosorbent test (ELISA)reagents from two manufacturers at the same time.Both reagents in the laboratory had gray areas,0.5≤S/CO<1,if the two reagents were reactive,the report had reactivity;the single reagent
had reactivity,double-hole recheck,recheck as long as one of the holes was reactive,then the report was reactive,and both holes had no reactivity.Reported as a reactive specimen.All test specimens were tested for HBV -DNA at the same time.Results A total of 27,214blood samples were tested,57were reactive with dual reagents,43were reactive with nucleic acid detection in dual reagents,
and 70samples from single gray zone were non-reactive in nucleic acid
detection;single reagents were reactive.There were 84specimens,all of which were non -reactive in nucleic acid
detection;27,003samples were non-reactive in double reagent enzyme immunoassay,and 23were reactive in nucleic
acid detection.When the cutoff value (Cot off)S/CO was 0.5,the area under the ROC curve of reagent A was 0.845,the 95%confidence interval was 0.719-0.970,the area under the ROC curve of reagent B was 0.837,and the 95%
confidence interval was 0.725-0.984;When the critical value S/CO was 1,the area under the ROC curve of reagent A was 0.792,and the 95%confidence interval was 0.632-0.953,the area under the ROC curve of reagent B was 0.792,and the 95%confidence interval was 0.653-0.930.The best cut off of reagent A and reagent
B in this laboratory was (S/CO value)0.9.Conclusion
[作者简介]字立源(1967-)，男，白族，本科，副主任医师，研究方向为血液管理。
[通信作者]朱荣华(1980-)，男，本科，副主任技师，研究方向为血液管理,E-mail:***************。
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我国是HBV 的高流行地区约占总传染病总数的
1/3，我国的HBV 人感染率(HBsAg 阳性率7.18%)。HBsAg 为HBV 感染的最主要指标，是采供血机构保障血液安全必检项目之一，尽管随着科学技术的发展，检测方法、检测技术均有所提高，减低了因输血传播疾病的风险，但输血传播乙肝病毒(HBV)的风险仍
然是血液安全面临的巨大挑战。目前检测HBsAg 的主要方法是酶联免疫吸附试验(ELISA)，简便、快速、特异、成本低、且灵敏度较高。特别适用于大批量献血者筛查及健康体检。由于窗口期的世界性难
题，该站采用两个厂家酶联免疫吸附试验试剂进行两遍检测，酶免检测无反应性标本，再进行1遍核酸检测。对弱反应性标本设置灰区，灰区范围为(0.5≤S/CO<1)。灰区的设置一直是采供血机构检测实验室讨论的热点问题，既要保障血液安全，又不能让无辜的献血者淘汰，避免血液的浪费。该中心血站2016年1月—2017年6月以无偿献血者标本27214份为样本，对灰区的设置进行相关分析，现报道如下。1材料与方法1.1材料来源
该中心血站对无偿献血者标本27214份，酶免采用HBsAg 酶联免疫吸附试剂盒A 和B 两个厂家，该实验室两试剂均设有灰区,0.5≤S/CO<1，双试剂有反应性，则报告有反应性；单试剂有反应性，双孔复查，复查只要其中一孔有反应性，则报告有反应性，两孔均为无反应性，则报告无反应性。报告为反应性标本。所有检验标本均同时进行HBV-DNA 检测，委托第三方血站采用诺华检测系统进行检测。1.2试剂
HBsAg 酶联免疫吸附试剂盒A 试剂,HBsAg 酶联免疫吸附试剂盒B 试剂。1.3结果判定
S/CO≥1判定为阳性,0.5≤S/CO<1判定为可疑
(灰区),S/CO<0.5判定为阴性。HBV-DNA 检测有反应性为补充实验的确证标准。1.4仪器
全自动酶免分析系统一体机(Uranus AE150)。E⁃VO-150全自动加样仪,FAME16/20全自动酶标仪。
1.5统计方法
采用SPSS 17.0统计学软件分析数据。2结果2.1检测结果
共检测27214份血液标本，结果见表1。表1
ELISA 法检测乙肝表面抗原和核酸检测情况
2.2两试剂ROC 曲线下面积分析
两试剂ROC 曲线下面积结果见表2。
表2
A、B 试剂在不同临界值下ROC 曲线下面积
2.3试剂A 和试剂B 敏感性和特异性
临界值(Cut off)S/CO 为0.5、0.8、0.9、1.0、1.6时，越接近左上角的曲线，方法学的敏感性和特异性越好，试剂A 优于试剂B。临界值的确定，最接近左上角的切点值(Cut off)是最佳分界值，敏感性与特异性之和最大。所该实验室临界值(Cut off)S/CO 为0.9最佳分界值。3讨论
乙型肝炎病毒感染的最直接证据是检测其病原标志HBsAg 。HBsAg 作为必检项目之一，常用ELISA 方
法，该方法以Cut off 值作为判定阴性或阳性结果的分界线标准，受方法学的限制，出现一些接近临界值结果，通常把这一段结果定为“灰区”，为了防止弱阳性标本漏检，确保输血安全，防止HBV 感染，很多实验设立了“灰区”。血液筛查实验室是否应设置灰区、如何设置灰区还存在一定争议[1]。
核酸检测方法是目前血液筛查已经比较成熟的
检测方法，可检出血液中较低水平的HBV 病毒，且对于HBV 病毒的隐匿性感染、病毒亚型和病毒变异也
能检出[2-3]。这样的检测数据，反映ELISA 检测灰区标
双试剂有反应性双试剂无反应性A、B 试剂灰区
A 试剂有反应性(单试剂)
B 试剂有反应性(单试剂)合计
检测反应情况
57
27003707014272144323000
66例数核酸有反应性
A 试剂
B 试剂A 试剂B 试剂A 试剂B 试剂A 试剂B 试剂A 试剂
B 试剂试剂0.50.50.80.80.90.91.01.01.61.6
临界值0.8450.8370.8450.8370.8450.8370.7920.7920.7760.775
面积0.0640.0570.0640.0570.0640.0570.0820.0710.0870.074
标准误<0.001<0.001<0.001<0.001<0.001<0.0010.0010.001
0.0030.003
Sig 0.7190.7250.7190.7250.7190.7250.6320.6530.6060.630
0.9700.9840.9700.9840.9700.9840.9530.9300.9460.921
95%置信区间
下限
上限
With the improvement of detection technology,whether the setting of the gray area for detection of hepatitis B surface antigen (HBsAg)enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)is cancelled,scientific performance evaluation is needed to find the best cutoff value suitable for our laboratory.
[Key words]Hepatitis B surface antigen;Enzyme-linked immunoassay;Gray zone;Critical value
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(收稿日期:2020-11-09)
(上接第45页)
本和单试剂有反应性标本的绝大部分献血者不是正真的HBV 病毒感染者，该血站对ELISA 方法检测的“灰区”试验结果报告为“有反应性”，并对有反应性”血液作报废处理，对相应的献血员作永久屏蔽。这种
做法对输血安全确实有积极作用，但造成血液资源的浪费[4-5]。
从ROC 曲线下的面积评价试剂敏感性和特异性，临界值在0.5、0.8、0.9时,A、B 试剂ROC 曲线下面积相同,A 试剂面积为0.845,B 试剂面积为0.837，说明该实验室准确性较好。临界值S/CO 为1时,A、B 试剂ROC 曲线下面积有所改变。ROC 曲线能兼顾到被评估方法在所有临界值的灵敏度和特异性，曲线下面积(AUC)就越大，表示该方法的灵敏度和特异度就
越高，准确性就越高，诊断价值就越大[6]。该实验室通过比较临界值S/CO 为0.5、0.8、0.9、1.0、1.6,5个临界
值ROC 曲线下面积，可知临界值S/CO 为0.9时，该实验室检测结果灵敏度和特异度就最高，准确性就最高，诊断价值就最大。
Youden 指数(Youden 指数=灵敏度+特异度-1)
是用来评价检筛试验真实性的指标，试剂A 和试剂B
最佳临界值(Cut off)为(S/CO 值)0.9，作为检测结果判定值。该实验室以为(S/CO 值)0.5作为检测结果判定值，低于最佳临界值(Cut off)为(S/CO 值)0.9。试剂A 和试剂B 厂商推荐的临界值为(S/CO 值)1.0，高于
最佳临界值0.9。通过对该实验室A、B 两试剂的比较，试剂A 在敏感性和特异性方面均优于试剂B，敏感性和特异性是诊断方法学评价的重要指标，二者相互矛盾又相互联系。该实验室采用两种检测试剂，在选择试剂检测策略时，两种试剂最好互补。通过该实验室检测数据的分析研究，该实验室最佳临界值(Cut
off)为应设置(S/CO 值)0.9，这样即保障检测结果的准
确性，又可减少血液不必要的浪费和防止献血者的流
失。虽然全国血站实行核酸检测，但各实验室检测能
力参差不齐[7-8]。随着检测技术的提高，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测灰区的设置，进行核酸检测和确证
试验后，寻适合该实验室的最佳临界值。
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(收稿日期:2020-11-14)
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