网络出版时间：２０２３－０５－０９１５：４４：３６　网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ．２０２３０５０８．１４３２．０６０．ｈｔｍｌ
◇肿瘤药理学◇
Ｔｒｉａｐｉｎｅ通过ＲＯＳ／ＧＳＨ／ＧＰＸ４轴诱导Ａ５４９细胞铁死亡
张朋飞１，章立华２，华　东１
，３
（１．江南大学生命科学与健康工程学院，江苏无锡　２１４０００；２．厦门大学医学院
胃肠肿瘤研究所，福建厦门　３
６１１０２；３．南京医科大学无锡人民医院肿瘤科，江苏无锡　２１４０００）ｄｏｉ：１０．１２３６０／ＣＰＢ２０２２０４０４１
文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２３）０５－０８３３－０６中国图书分类号：
Ｒ３２９ ２８；Ｒ５９１ １；Ｒ７３４ ２；Ｒ９７９ １摘要：目的　探究Ｔｒｉａｐｉｎｅ诱导非小细胞肺癌细胞Ａ５４９发生铁死亡的作用与机制。方法　ＭＴＴ实验和克隆形成实验评价Ｔｒｉａｐｉｎｅ对Ａ５４９细胞增殖的作用；使用ＤＣＦＨ ＤＡ探针分析Ｔｒｉａｐｉｎｅ对Ａ５４９细胞内ＲＯＳ水平的影响；试剂盒检测Ｔｒｉａｐｉｎｅ处理后Ａ５４９细胞内谷胱甘肽（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ，ＧＳＨ）和脂质过氧化物（ｌｉｐｉｄｐｅｒｏｘｉｄｅｓ，ＬＰＯ）水平变化；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析Ｔｒｉａｐｉｎｅ对Ａ５４９细胞内谷胱甘肽过氧化物酶４（ｇｌｕｔａ ｔｈｉｏｎｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ４，ＧＰＸ４）蛋白表达的影响；用ＲＯＳ抑制剂进行干预，检测ＧＰＸ４蛋白的表达和细胞活性的变化。结果　Ｔｒｉａｐｉｎｅ能够抑制Ａ５４９细胞增殖，且ＩＣ５０为（
３ ７±０ ０８）ｍｇ·Ｌ－１
；Ｔｒｉａｐｉｎｅ能诱导Ａ５４９细胞ＲＯＳ累积，降低ＧＳＨ水
平，提升ＬＰＯ含量，下调ＧＰＸ４的表达；ＲＯＳ抑制剂干预能恢复Ｔ
ｒｉａｐｉｎｅ引起的ＧＰＸ４表达降低及细胞活性下降。结论　Ｔｒｉａｐｉｎｅ可能通过提升Ａ５４９细胞内ＲＯＳ水平消耗ＧＳＨ，导致ＧＰＸ４表达下降，诱导铁死亡发生。
关键词：肺癌；铁死亡；Ｔｒｉａｐｉｎｅ；ＧＰＸ４；脂质过氧化物；ＲＯＳ
开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）：
收稿日期：２０２２－０８－１０，修回日期：２０２２－１１－１２基金项目：福建省自然科学基金资助项目（Ｎｏ２０２１Ｊ０５２７６）作者简介：张朋飞（
１９９２－），男，博士生，研究方向：肿瘤药理与肿瘤精准，Ｅ ｍａｉｌ：ｊｎ６０ｚｐｆ＠１６３．ｃｏｍ；
章立华（１９８７－），男，博士后，研究方向：肿瘤精准与肿瘤耐药机制，通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｌｉｈｕａｚｈａｎｇ＠ｘｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ；
华　东（１９６７－），男，博士，教授，研究方向：肿瘤药理与肿瘤精准，通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｗｘ８９２１１＠１６３．ｃｏｍ
  肺癌是全球癌症相关死亡的主要原因［１］
。非
小细胞肺癌（
ｎｏｎ ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ，ＮＳＣＬＣ）约占肺癌整体发病的８５％，５年生存率仅为１５％［２］。
化疗是肺癌的主要方式之一，但大多数肺癌患者早期对化疗敏感，晚期表现出耐药性，导致临床预
后极差［
３］
。因此，发展新的药物靶点和理解机制对肺癌的具有重要临床意义。
铁死亡是近年来备受关注的一种新型细胞死亡
方式，其与细胞凋亡等传统细胞死亡方式不同［４－５］
。
铁死亡是由细胞内铁离子累积并催化产生活性氧（ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ，ＲＯＳ）驱动的，ＲＯＳ能够氧化膜脂质，产生大量脂质过氧化物（ｌｉｐｉｄｐｅｒｏｘｉｄｅｓ，
ＬＰＯ），并进一步导致细胞死亡［６］。铁死亡过程中线
粒体展现出独特形态学变化，如膜密度增高、嵴消失
等［
６］
。铁（Ｆｅ）等必需过渡金属离子在肿瘤细胞代谢、增殖、血管生成和肿瘤转移中发挥重要作
用［７－８］
，逐步成为新的靶点。近期，开发新型铁
螯合剂已成为一种有前景的抗癌策略。Ｔｒｉａｐｉｎｅ是一种缩氨基硫脲类铁螯合剂，具有广谱抗肿瘤活性，
并在多项临床Ⅰ／Ⅱ期实验中进行研究［９］。Ｔ
ｒｉａｐｉｎｅ能够与核糖核苷酸还原酶活性中心的铁离子结合而使酶失活，从而抑制ＤＮＡ合成。然而，铁死亡在Ｔｒｉａｐｉｎｅ发挥抗肿瘤活性中的作用目前仍不明确。本研究探究了Ｔｒｉａｐｉｎｅ诱导非小细胞肺癌Ａ５４９细胞发生铁死亡的作用，为肺癌提供了新的方案。１　材料与方法１．１　材料
１．１．１　细胞与试剂　Ａ５４９细胞和ＰＣ９细胞来自中国科学院干细胞库。Ｒ
ＰＭＩ １６４０（货号：３１８７００７４，厂家：赛默飞世尔，产地：中国）、胰酶（规格：０ ２５％，货号：１５０９００４６，厂家：赛默飞世尔，产地：中国）、ＦＢＳ（货号：１００９１１５５，厂家：赛默飞世尔，产地：中国）。ＭＴＴ（货号：Ｍ８１８０，厂家：索莱宝，产地：北京），结晶紫（Ｃ８４７０，厂家：索莱宝，产地：北京）。ＤＣＦＨ ＤＡ（货号：Ｓ００３３Ｓ，厂家：碧云天，产地：上海）、ＧＳＨ试剂盒（Ｓ００５３，厂家：碧云天，产地：上海）、ＭＤＡ试剂盒（Ｓ０１３１Ｓ，厂家：碧云天，产地：上海）、ＢＣＡ试剂盒（Ｐ００１０Ｓ，厂家：碧云天，产地：上海）。Ｎ 乙酰 Ｌ 半胱氨酸（ＮＡＣ，货号：Ｎ８００４２５，厂家：麦克林，产地：上海）。ＧＰＸ４抗体（货号：ａｂ４１７８７，厂家：Ａｂｃａｍ，产地：英国）、Ｖｉｎｃｕｌｉｎ抗体
·３
３８·中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０２３Ｍａｙ；３９（５）：８３３～８
（ａｂ２１９６４９，厂家：Ａｂｃａｍ，产地：英国）、山羊抗兔ＩｇＧ（货号：ａｂ９７０５１，厂家：Ａｂｃａｍ，产地：英国）。１．１．２　仪器　多功能酶标仪（型号：ｓｙｎｅｒｇｙＨ４，厂家：ＢｉｏＴｅＫ，产地：美国）。倒置显微镜（型号：尼康Ｔｉ Ｅ，厂家：尼康株式会社，产地：
日本）、激光共聚焦显微镜（型号：ＴＣＳＳＰ８，厂家：徕卡，产地：德国）。１．２　方法
１．２．１　ＭＴＴ实验　向９６孔板中每孔加入１００μＬＡ５４９细胞（５０００个）悬液，待Ａ５４９细胞呈现出完整细胞形态后，将培养基更换为含有不同浓度Ｔｒｉａ ｐｉｎｅ（０～１００ｍｇ·Ｌ－１）的培养基处理４８ｈ。根据ＭＴＴ实验方案，每孔加入１０μＬＭＴＴ，常温培养２～４ｈ后，小心吸取出孔内染液，加入１００μＬＤＭＳＯ并震荡溶解产物，利用酶标仪（Ｅｘ：４９０ｎｍ）测定吸光度（ＯＤ）值。
１．２．２　克隆形成实验　在６孔板中每孔加入２ｍＬＡ５４９细胞（５００个）悬液，待细胞呈现出完整细胞形态后吸取出培养基，加入２ｍＬ含有Ｔｒｉａｐｉｎｅ的培养基药物稀释液的处理Ａ５４９细胞２４ｈ，Ｔｒｉａｐｉｎｅ终浓度为４ｍｇ·Ｌ－１。Ｔｒｉａｐｉｎｅ处理结束后，每孔加入２ｍＬ新鲜培养基。观察１４ｄ后，细胞固定并染，ＰＢＳ小心清洗，拍照，计数。
１．２．３　ＤＣＦＨ ＤＡ探针法检测ＲＯＳ　取１ｍＬＡ５４９细胞悬液（５×１０４个）加入到共聚焦小皿（３５ｍｍ）中，待细胞密度达到９０％后，用２、４、６ｍｇ·Ｌ－１的Ｔｒｉａｐｉｎｅ分别处理细胞１２ｈ。随后加入１ｍＬ含有ＤＣＦＨ ＤＡ探针（１×１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１）的ＰＢＳ缓冲液，常温孵育３０ｍｉｎ，在激光共聚焦显微镜（Ｅｘ：４８８ｎｍ，Ｅｍ：５２５ｎｍ）下进行观察拍照。
１．２．４　ＧＳＨ水平检测　在６孔板中加入２ｍＬＡ５４９细胞悬液（５×１０４个／孔），待细胞密度达到９０％后，分别加入含２、４、６ｍｇ·Ｌ－１的Ｔｒｉａｐｉｎｅ培养基处理１２ｈ。随后收集细胞，按照ＧＳＨ检测试剂盒的说明，测定空白对照组与不同浓度的Ｔｒｉａｐｉｎｅ处理组细胞内ＧＳＨ的水平。
１．２．５　ＭＤＡ实验　在６孔板中加入２ｍＬＡ５４９细胞悬液（５×１０４个／孔），待细胞密度达到９０％后，分别加入含２、４、６ｇ·Ｌ－１的Ｔｒｉａｐｉｎｅ培养基处理１２ｈ。随后收集细胞，按照ＭＤＡ检测试剂盒的说明，测定空白对照组与不同浓度的Ｔｒｉａｐｉｎｅ处理组细胞内ＭＤＡ的水平。
１．２．６　Ｃ１１ＢＯＤＩＰＹ５８１／５９１染实验　取１ｍＬＡ５４９细胞悬液（５×１０４个）加入到共聚焦小皿（３５ｍｍ）中，待细胞密度达到９０％后，加入Ｔｒｉａｐｉｎｅ（４ｍｇ·Ｌ－１）处理１２ｈ。随后加入１ｍＬ含有Ｃ１１ＢＯＤＩＰＹ５８１／５９１（５×１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１）的ＰＢＳ缓冲液。常温孵育１０ｍｉｎ，用ＰＢＳ清洗细胞，在激光共聚焦显微镜（Ｅｘ：５８１ｎｍ（Ｒｅｄｕｃｅｄ）／５００ｎｍ（Ｏｘｉｄｉｚｅｄ），Ｅｍ：５９１ｎｍ（Ｒｅｄｕｃｅｄ）／５１０ｎｍ（Ｏｘｉｄｉｚｅｄ）下进行观察拍照。
１．２．７　线粒体形态分析　将细胞（５×１０４个／皿）接种于无菌细胞培养皿（１０ｃｍ），待
细胞密度达到９０％后，加入Ｔｒｉａｐｉｎｅ（４ｍｇ·Ｌ－１）处理１２ｈ，收集细胞沉淀，将细胞沉淀置于２ ５％戊二醛溶液（电镜级）中固定。随后将固定好的细胞进行渗透处理，并在７０℃下包埋过夜。细胞包埋块切片，用乙酸双氧铀（规格：１％）和柠檬酸铅（规格０ ４％）对细胞染，然后进行透射电镜观察。
１．２．８　Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ实验　将用Ｔｒｉａｐｉｎｅ（４ｍｇ·Ｌ－１）处理的Ａ５４９细胞消化，离心（５００ｇ，４℃，１０ｍｉｎ）。小心吸弃掉上清，低温震荡裂解细胞，时间为２０ｍｉｎ，离心（１２０００ｇ，４℃，１５ｍｉｎ）。Ｔｒｉａｐｉｎｅ处理的样品蛋白浓度用ＢＣＡ试剂盒测定。将上样缓冲液（１×）加入到蛋白样品中，变性（１００℃）后上样，分离转膜，随后室温封闭（５％ＢＳＡ，ＴＢＳＴ配制），ＧＰＸ４（１ｍｇ·Ｌ－１）、Ｖｉｎｃｕｌｉｎ（１∶１０００）一抗孵育过夜。ＴＢＳＴ洗膜，二抗（１∶１００００）孵育２ｈ。ＴＢＳＴ洗膜，ＥＣＬ曝光检测。
１．２．９　统计学处理　数据分析用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ７ ０软件，呈正态分布的计量数据以珋ｘ±ｓ表示，采用ｔ检验分析两组间比较。
２　结果
２．１　Ｔｒｉａｐｉｎｅ抑制Ａ５４９细胞增殖　ＭＴＴ实验结果显示，Ｔｒｉａｐｉｎｅ对Ａ５４
９细胞的半抑制浓度，即ＩＣ
５０值为（３ ７±０ ０８）ｍｇ·Ｌ－１（Ｆｉｇ１Ａ）。克隆形成结果显示，Ｔｒｉａｐｉｎｅ处理后Ａ５４９细胞形成的克隆数目（１７ ０±１ ６）明显少于对照组（７２ ６±２ １）（Ｐ＜０ ０１），表明Ｔｒｉａｐｉｎｅ有效抑制了Ａ５４９细胞的增殖（Ｆｉｇ１Ｂ）。
２．２　Ｔｒｉａｐｉｎｅ提升细胞内活性氧含量　Ｔｒｉａｐｉｎｅ能够与细胞内铁离子结合，并催化ＲＯＳ产生。因此，通过ＲＯＳ探针观察了不同浓度（２～６ｍｇ·Ｌ－１）Ｔｒｉ ｐａｉｎｅ处理后细胞内ＲＯＳ的变化。与对照组相比，Ｔｒｉａｐｉｎｅ组细胞内荧光信号强度增强，表示细胞内ＲＯＳ水平升高。相同作用时间下，６ｍｇ·Ｌ－１的Ｔｒｉ ａｐｉｎｅ作用后细胞内荧光强度明显高于其他组，表明细胞内ＲＯＳ水平与Ｔｒｉａｐｉｎｅ作用浓度呈正相关（Ｆｉｇ２）。
２．３　细胞内ＧＳＨ和ＬＰＯ水平检测　ＧＳＨ构成了细胞内主要的抗氧化系统，进一步检测Ｔｒｉａｐｉｎｅ对
·
４
３
８
·中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０２３Ｍａｙ；３９（５）
Ｆｉｇ１　ＥｆｆｅｃｔｏｆＴｒｉａｐｉｎｅｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＡ５４９ｃｅｌｌｓ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ａ：ＴｈｅｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙｏｆＡ５４９ｃｅｌｌｓｉｎＴｒｉａｐｉｎｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｇｒａｄｉｅｎｔｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙＭＴＴａｓｓａｙ；Ｂ：ＴｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｆＴｒｉａｐｉｎｅｏｎＡ５４９ｃｅｌｌｓｉｎ１４ｄａｙｓｗａｓａｓｓｅｓｓｅｄｂｙｃｏｌｏｎｙｆｏｒｍａｔｉｏｎａｓｓａｙ．  Ｐ＜０ ０１ｖｓＣｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ
．
Ｆｉｇ２　ＲＯＳｌｅｖｅｌｏｆＡ５４９ｃｅｌｌｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＤＣＦＨ ＤＡｐｒｏｂｅ
细胞内ＧＳＨ水平的影响。如Ｆｉｇ３Ａ所示，Ｔｒｉａｐｉｎｅ
处理后，Ａ５４９细胞内ＧＳＨ水平较对照组降低，并且
ＧＳＨ下降水平与Ｔｒｉａｐｉｎｅ浓度相关（Ｐ＜０ ０１）。细
胞内ＬＰＯ异常累积是铁死亡发生的关键。采用丙
二醛（ｍａｌｏｎａｌｄｅｈｙｏｌｅ，ＭＤＡ）检测试剂盒对不同处理
的Ａ５４９细胞内ＬＰＯ水平进行评估。结果显示（Ｆｉｇ
３Ｂ），对照组细胞内ＬＰＯ水平明显低于Ｔｒｉａｐｉｎｅ组，
且细胞中ＬＰＯ含量与Ｔｒｉａｐｉｎｅ作用浓度呈正相关
（Ｐ＜０ ０５），初步表明Ｔｒｉａｐｉｎｅ能够引起细胞铁死
亡。
２．４　细胞内膜脂质过氧化检测　前期实验证明，
Ｔｒｉａｐｉｎｅ导致细胞内ＬＰＯ水平升高，而ＬＰＯ累积是
细胞发生铁死亡的重要标志。为进一步分析细胞内
的膜脂质过氧化反应，采用Ｃ１１ＢＯＤＩＰＹ５８１／５９１探针
评估细胞内膜脂质过氧化情况。激光共聚焦结果显
示，Ｔｒｉａｐｉｎｅ组细胞中红荧光信号明显弱于对照
组，而与对照组相比，Ｔｒｉａｐｉｎｅ组细胞中观察到较强
的绿荧光信号，这表明在Ｔｒｉａｐｉｎｅ作用下细胞内
发生了脂质过氧化反应，并造成ＬＰＯ的累积（Ｆｉｇ
４）。
２．５　细胞线粒体形态变化　为验证Ｔｒｉａｐｉｎｅ诱导
的Ａ５４９细胞铁死亡，采用透射电镜对细胞线粒体
的形态进行观察。如图Ｆｉｇ５，Ｔｒｉａｐｉｎｅ处理后细胞
的线粒体嵴出现明显减少现象，并且线粒体膜密度
·
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中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０２３Ｍａｙ；３９（５）
Ｆｉｇ３　ＥｆｆｅｃｔｏｆＴｒｉａｐｉｎｅｏｎＧＳＨａｎｄＬＰＯｌｅｖｅｌｓｏｆ
Ａ５４９ｃｅｌｌｓ
（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）Ａ：ＧＳＨｌｅｖｅｌｓｏｆＡ５４９ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＧＳＨｋｉｔ；Ｂ：ＴｈｅＬＰＯｌｅｖｅｌｓｏｆＡ５４９ｃｅｌｌｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙＭＤＡａｓｓａｙ．
Ｐ＜０ ０５，
Ｐ＜
０ ０１ｖ
ｓＣｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ
．Ｆｉｇ４　Ｃ１１ＢＯＤＩＰＹ５８１／５９１
ｐｒｏｂｅｄｅｔｅｃｔｅｄ
ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｌｉｐｉｄｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎｌｅｖｅｌｓ
升高，且膜完整性较差，进一步证明Ｔｒｉａｐｉｎｅ导致细胞发生了铁死亡。
２．６　ＲＯＳ抑制剂对ＧＰＸ４蛋白表达和细胞活性的影响　为探究Ｔ
ｒｉａｐｉｎｅ诱导Ａ５４９细胞发生铁死亡的机制，采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析铁死亡相关蛋白ＧＰＸ４蛋白的表达。如Ｆｉｇ６Ａ，Ｔｒｉａｐｉｎｅ处理后细胞内ＧＰＸ４蛋白表达明显低于对照组（Ｐ＜０ ０１）。Ｎ
乙酰基 Ｌ 半胱氨酸（Ｎ ａｃｅｔｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅ，ＮＡＣ）是ＲＯＳ清除剂，Ｔｒｉａｐｉｎｅ与ＮＡＣ共同处理Ａ５４９细胞后，细胞内ＧＰＸ４蛋白表达高于单独Ｔｒｉａｐｉｎｅ处理组（Ｐ＜０ ０１）。同时，ＭＴＴ结果显示，Ｔｒｉａｐｉｎｅ与ＮＡＣ共孵育组细胞活性高于Ｔｒｉａｐｉｎｅ组（Ｐ＜０ ０１）（Ｆｉｇ６Ｂ）
。
Ｆｉｇ５　Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｂｙ
ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ
２．７　铁死亡抑制剂和凋亡抑制剂对细胞活性的影响　Ｆ
ｉｇ７Ａ显示，铁死亡抑制剂（Ｆｅｒ １）和凋亡抑制剂（Ｚ ｖａｄ ｆｍｋ）能够抑制Ｔｒｉａｐｉｎｅ引起的Ａ５４９细胞
活性下降，并且Ｆｅｒ １对细胞活性的恢复作用强于Ｚ ｖａｄ ｆｍｋ（Ｐ＜０ ０５），进一步表明Ｔｒｉａｐｉｎｅ引起了Ａ５４９细胞铁死亡。同时，Ｆｅｒ １能够减弱Ｔｒｉａｐｉｎｅ引起的ＰＣ９细胞活性下降（Ｐ＜０ ０１），表明Ｔｒｉａｐｉｎｅ也有诱导ＰＣ９细胞铁死亡的作用（Ｆｉｇ７Ｂ）。３　讨论
  铁死亡是一种铁依赖性的细胞死亡形式，主要特征为铁依赖性ＲＯＳ和ＬＰＯ累积并达到致死水平。研究发现，铁死亡的发生过程涉及细胞内铁代谢、ＲＯＳ的生成与清除以及氨基酸和脂质代谢等多方
面的异常［１０］
。由于铁死亡对改善传统肿瘤耐
受现象具有独特优势，近年来逐步成为研究热点。
铁对于维持细胞的正常生理机能起着关键的作用，比如ＤＮＡ的合成与复制。肿瘤细胞对铁离子具有依赖性，调控肿瘤细胞内铁代谢是潜在的肿瘤靶点。Ｔｒｉａｐｉｎｅ可以通过抑制肿瘤细胞内的核糖
核酸还原酶Ｍ２（ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｒｅｄｕｃｔａｓｅｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ
ｓｕｂｕｎｉｔＭ２，ＲＲＭ２）发挥抗肿瘤活性［１１］
。Ｔｒｉａｐｉｎｅ能
够螯合ＲＲＭ２活性中心的铁离子，形成Ｆｅ（Ⅱ）
（Ｔｒｉａｐｉｎｅ）复合物，通过类芬顿反应（Ｆｅｎｔｏｎ ｌｉｋｅｒｅ
ａｃｔｉｏｎ）产生ＲＯＳ［１１］。ＲＯＳ水平升高不仅会导致细胞氧化损伤，还是铁死亡的重要参与者［１２－１３］。本研
究证实，
Ｔｒｉａｐｉｎｅ作用后能明显降低Ａ５４９细胞的增殖，引起细胞死亡。同时，Ｔｒｉａｐｉｎｅ能够催化Ａ５４９细胞内产生大量ＲＯＳ，提示其具有潜在的铁死亡诱导活性。
·６
３８·中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０２３
Ｍａｙ；３９（５）
Ｆｉｇ６　ＲｅｃｏｖｅｒｙｏｆＲＯＳｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｎＧＰＸ４ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ａ：ＴｈｅＧＰＸ４ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＡ５４９ｃｅｌｌｓｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ；Ｂ：ＭＴＴａｓｓａｙａｎａｌｙｚｅｄｔｈｅｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙｏｆＡ５４９ｃｅｌｌｓ．  Ｐ＜０ ０１ｖｓＣｏｎｔｒｏｌ
ｇｒｏｕｐ，＃＃
Ｐ＜０ ０１ｖｓＴｒｉａｐｉｎｅｇｒｏｕｐ
．
Ｆｉｇ７　ＣｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙｏｆＡ５４９ｃｅｌｌｓ（Ａ）ａｎｄＰＣ９ｃｅｌｌｓ（Ｂ）
ａｆｔｅｒｉｎｃｕｂａｔｉｎｇｗｉｔｈＦｅｒ １ａｎｄＺ ｖａｄ ｆｍｋ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ｐ＜０ ０１ｖｓＣｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ；＃Ｐ＜０ ０５，＃＃
Ｐ＜０ ０１ｖｓＴｒｉａｐｉｎｅ
ｇｒｏｕｐ．
  文献报道，Ｔｒｉａｐｉｎｅ具有诱导细胞凋亡的活性。
Ｒｏｂｅｒｔ等［１４］
发现Ｔｒｉａｐｉｎｅ能够通过促进内质网应激
诱导肿瘤细胞凋亡。此外，Ｔｒｉａｐｉｎｅ可以通过抑制ＲＲＭ２的表达诱导细胞凋亡发生，这主要是通过调
控凋亡相关蛋白Ｂｃｌ ２表达实现的［１５］。近期研究发
现，ＲＲＭ２参与了铁死亡过程。ＲＲＭ２过表达能促进细胞内ＧＳＨ的合成，进而抑制肝癌细胞发生铁死
亡［
１６］
。本研究证实，Ｔｒｉａｐｉｎｅ处理后肺癌细胞活性下降，而铁死亡抑制剂（Ｆｅｒ １）和凋亡抑制剂（Ｚ ｖａｄ ｆｍｋ）能够逆转这一现象。以上结果表明，Ｔｒｉａｐ
ｉｎｅ
可能具有同时诱导细胞凋亡和铁死亡的作用，这一发现进一步丰富了对Ｔｒｉａｐｉｎｅ抗肿瘤机制的认识。
ＧＳＨ是一种细胞内主要的抗氧化物质。ＧＰＸ４作为内源性抑制铁死亡的脂质过氧化物酶，可以将毒性脂质过氧化氢（Ｌ ＯＯＨ）转化为无毒的脂质醇
（Ｌ ＯＨ）［１７］
reactive oxygen species (ros)。ＧＰＸ４在铁死亡过程中的表达和活性依赖于ＧＳＨ的存在［１７］。因此，消耗细胞内的ＧＳＨ
会间接抑制ＧＰＸ４的活性，ＧＰＸ４表达降低是铁死亡
发生的重要标志［１８］。本研究发现，Ｔｒｉａｐｉｎｅ能够引
起Ａ５４９细胞ＧＳＨ水平降低，ＧＰＸ４蛋白表达水平下降。此外，ＮＡＣ能够使细胞内ＧＰＸ４的表达和细胞活性得到恢复。以上结果表明，Ｔｒｉａｐｉｎｅ可能通过ＲＯＳ／ＧＳＨ／ＧＰＸ４信号轴诱导Ａ５４９细胞铁死亡发生。
免疫是近年来肿瘤的热点，研究表明，抑制铁死亡会导致肿瘤细胞对免疫的敏感性降低。因此，采用Ｔｒｉａｐｉｎｅ等铁死亡诱导剂与免疫药物的联合应用可能为降低肺癌死亡率提供了一
种有前景的策略。同时，随着纳米技术的发展，纳米药物递送系统与Ｔｒｉａｐｉｎｅ的联合将有助于Ｔｒｉａｐｉｎｅ发挥药理活性，提升Ｔｒｉａｐｉｎｅ的靶向性，达到增效减毒的效果。综上所述，本文指出Ｔｒｉａｐｉｎｅ可能通过提升Ａ５４９细胞内ＲＯＳ水平，导致ＧＳＨ消耗和ＧＰＸ４表达下降，诱导铁死亡发生。
（致谢：本研究工作在江南大学生命科学与健康工程学院实验平台与厦门大学医学院胃肠肿瘤研究所实验平台完成，感谢指导老师和各位同学的帮助。）
参考文献：
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·
７３８·中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０２３Ｍａｙ；３９（５）

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