细胞与分子免疫学杂志（Chin J Cell Mol ImmU n〇l)2021, 37(4)337
.论著.文章编号：1007-8738(2021 )044337>07
过表达KLF9增加GPX4和活性氧（R O S)水平抑制悬浮培养的SKOV3 人卵巢癌细胞凋亡
彭映然\刘娟2，田小飞2，张瑞3，杨安钢C空军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室，陕西西安710032; 2陕西省肿瘤医院妇科肿瘤科，陕西西安710061; 3空军军医大学基础医学院免疫学教研室，陕西西安710032)
[摘要]目的探究Kruppel样因子9/谷胱甘肽过氧化物酶4(KLF9/GPX4)信号轴对悬浮培养的卵巢癌细胞凋亡的调控功能 和机制。方法通过慢病毒感染在SK0V3细胞过表达和敲低KLF9表达水平，通过实时定量PC R和Western blot法进行验证。采用双荧光素酶报告基因实验验证KLF9对GPX4的转录调控作用，采用流式细胞术检测SK0V3细胞活性氧（R0S)含量及细胞 凋亡比率。结果KLF9对GPX4的启动子区域有转录抑制作用。过表达KLF9的SK0V3细胞GPX4表达量增加，R0S水平上 升。在悬浮培养条件下，SK0V3细胞R0S水平增加，过表达KLF9抑制SK0V3细胞凋亡，敲低KLF9则促进SK0V3细胞凋亡，与此同时正常的贴壁培养并没有观察到这一现象。结论过表达KLF9增加卵巢癌细胞GPX4和R0S水平，抑制悬浮培养的卵 巢癌细胞凋亡。
[关键词]Kruppel样因子9(KLF9)；谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)；活性氧（R0S)；细胞凋亡；SK0V3卵巢癌细胞
[中图分类号]Q279, R737.31, R392-33, Q255 [文献标志码]A
卵巢癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，其五年 生存率仅为48%左右，是死亡率最高的妇科肿瘤~]。卵巢癌的一个重要特点是难以在早期被诊 断：卵巢癌早期症状不明显和特异性不强，再加上并 没有特别有效的早筛手段，导致很多卵巢癌被确诊 的时候基本是晚期，并且已经扩散至盆腔[3~。当前，临床上对于卵巢癌的通常分为手术切除、化 疗、放疗、小分子抑制剂和免疫，以及这几 种方式的联合应用％]。此外，嵌合抗原受体T (chimeric antigen receptor T,CAR-T)细胞卵巢癌 的研究也在进行[1°]。虽然卵巢癌的手段不断创 新和发展，但是对于转移后卵巢癌患者的效果 仍然不理想。因此，对卵巢癌转移机制的研究仍需 要不断深人，以攻克卵巢癌的转移带来的难题。
Kruppel样因子 9 (Kruppel-like factor9, KLF9 )是 半胱氨酸2-组氨酸2(Cys2-His2, C2H2)型锌指转录 因子家族中广泛表达的成员[11]。近年来，KLF9在肿 瘤中的研究逐步深入。比如在睾丸精原细胞癌中 KLF9介导的miR483-3P通过靶向基质金属蛋白酶9 (matrix metallopeptidase9，M M P9)发挥抑瘤作用!12]。在临床数据分析中发现，KLF9的低表达是乳腺癌患 者预后较差的因素之一[13]。还有报道指出，KLF9在
收稿日期：2021~01>08；接受日期：202143-29
基金项目：国家自然科学基金(81773262, 31771439)
作者简介：彭映然（1995 -)，男，河南新乡人，硕士研究生
T e l：************；E-mail：378819708@qq
*通讯作者，杨安钢，E-mail: agyang@ fmmu. edu. cn 非小细胞肺癌表达下调提高了肿瘤的侵袭和转移能 力[14]。由此可见，K LF9在肿瘤中起到重要的调控作 用，并且与患者预后和肿瘤转移相关。与此同时，我们还看到K LF9是细胞氧化应激的关键诱导物，调节 细胞死亡和氧化依赖性组织损伤[15]。K LF9、氧化应 激与卵巢癌的关系研究尚未广泛开展，针对K LF9和氧化应激的研究也许会给卵巢癌转移的研究带来新 的突破。而提到氧化应激就不得不提到铁死亡和谷 胱甘肽过氧化物酶4 (glutathione peroxidases4, GPX4)。铁死亡是一种铁依赖的氧化性细胞死亡，其最为显著的特征是细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS)的积累导致细胞进入氧化应激状态[16]。GPX4是肿瘤细胞铁死亡过程中重要的调控 分子[17]，先前的研究证实铁死亡可以由伊拉斯汀 (erastin)和R as选择性致死小分子3 (ras-selective lethal small molecule3，RSL3)诱导，其中祀向 GPX4 的小分子抑制剂RSL3已经被证实可以在体内和体外 抑制GPX4的活性，从而诱导肿瘤细胞铁死亡[18_19]。研究人员通过抑制GPX4的活性，可以增强肿瘤细胞 对铁死亡诱导剂的敏感性[2〇@。由此可见，在由 R0S上升引发的细胞铁死亡过
程中，GPX4起重要作 用，如何通过这一环节抑制肿瘤的生长和发展是值
338细胞与分子免疫学杂志（Chin J Cell Mo丨丨mimm〇l)2021 , 37(4)
得我们探究的课题。
值得我们注意的是，KLF9与GPX4之间的关系
目前还未见报道，而我们通过转录因子预测数据库 JASPAR(http: //g/)分析可以看到 GPX4的启动子区域存在着转录因子KLF9的潜在作 用位。因此我们认为，KLF9可能调控GPX4的表达，从而影响卵巢癌细胞中的ROS水平，最终影响肿瘤 的转移。
本实验通过探究KLF9在SK0V3卵巢癌细胞对 ROS水平和GPX4的表达调控，将KLF9与GPX4联系起来，并通过检测贴壁和悬浮培养状态下的ROS 水平和细胞凋亡比率，研究KLF9/GPX4信号轴对于 卵巢癌细胞凋亡的调控。
1材料和方法
1.1材料
SK0V3卵巢癌细胞、人胚肾HEK293T细胞、£；•c〇Z i D H5〇t菌株、pLKO_ 1、pCDH、psPAX2、pM D2.G 质粒为空军军医大学基础医学院生物化学与分子生 物学教研室保存。DMEM和RPMI1640培养液以及 胎牛血清（fetal bovine serum,FBS)购自 Gibco公司；限制性内切酶、T4 DNA连接酶、反转录酶和SYBR® Green 购自 TaKaRa 公司；Lipofectamine™ 2000 和TRIzol试剂购自 Invitrogen公司；PBS 购自 Servicebio 公司；R O S探针购自Santa Cruz公司；聚凝胺 (polybrene)购自Yeasen Biotech公司；聚甲基丙稀酸轻 乙醋[hydrophilic poly (2-hydroxyethyl m ethacrylate), polyHEMA]购自Simga公司；小鼠抗人KLF9抗体、兔抗人GPX4抗体、兔抗人p肌动蛋白（p-actin)抗 体、HRP标记的山羊抗兔IgG和HRP标记的山羊抗 小鼠IgG购自Abeam公司；蛋白裂解液、二辛可宁酸 (bicinchoninic acid,BCA)蛋白定量试剂盒、5 x蛋白 上样缓冲液、SDS-P A G E凝胶制备试剂盒以及Genshare化学发光底物检测试剂盒购自陕西中晖赫 彩生物医药公司；6cm培养皿、10cm培养皿、6孔 板和NanoDrop2000超微量分光光度计购自Therm o 公司；0.22 jjum滤器和0.45 |xm滤器、硝酸纤维素 (nitrocellulose,NC)膜购自 M erck Millipore 公司；曝呤霉素购自DIYIBio公司；双荧光素酶报告基因系统 和试剂购自Promega公司；异硫氰酸荧光素标记的膜 联素 V/澳化丙淀（arm exin V-fluorescein isothiocyanate/ propidium iodide,annexin V-FITC/PI)细胞调亡检测 试剂盒购自BD Biosciences公司；C02畔箱购自 NUAIR公司；超净工作台购自苏州净化设备公司；流式细胞仪购自艾森公司；酶标仪购自TECAN公 司；实时定量PCR仪购自Bio-Rad公司；蛋白荧光发 光仪购自Tanon公司。
1.2方法
1.2.1 细胞培养HEK293T细胞使用含有100mL/L FBS的DM EM培养基，置于 37 X：、50 mL/L C02的条件下培养。SK0V3人卵巢癌细胞 使用含有100 miyL F B S的RPMI1640培养基，置于 37 t：、50 mL/L C02的条件下培养。视细胞汇合度，每1 ~2 d，使用2.5 g/L的胰蛋白酶消化后传代。1.2.2 细胞悬浮培养在polyHEMA的作用下，SK0V3细胞可以进行悬浮培养。使用质谱纯级的无 水乙醇配制11 g/L polyHEMA溶液，在37 t中过夜 溶解。之后，将充分溶解后的polyHEMA溶液加入 6孔板，每孔加入1 ~ 1.5 mL。将6孔板放在开启紫 外灯的超净工作台内过夜，使无水乙醇在无菌条件 下充分挥发，polyHEMA均匀分布在6孔板底面，此 时，可见6孔板底部有一层透明的薄膜状结构。在 向含有polyHEMA的6孔板中加入细胞前，先用 RPMI1640培养液将6孔板孔内冲洗1次，以冲走残 余无水乙醇和未溶解的polyHEMA杂质，防止杂质对 细胞生长造成干扰。在每个孔内加人5 x 105 ~ 1x 1〇6个细胞，充分摇勻，置于37丈、50 mlVL C02的条件下培养，即可得到体外脱落凋亡细胞模型。
1.2.3 构建过表达和敲低KLF9的SKOV3细胞系
我们通过NCBI中人源性KLF9基因的编码序列(coding sequence,CDS)区段设计引物并合成KLP9 的过表达质粒PCHD-KLP9以及两个干涉质粒？1^0.1- KLF9-sh l、pLKO.l-KLF9-sh2。以cDNA 为模板，通 过常规的PCR和DNA重组实验得到KLF9的过表达 质粒PCHD-KLF9以及两个干涉质粒？!^^).^!^-shl、PLK0. 1-KLF9-S h2。得到目的质粒后，进行慢病 毒的包装：首先将HEK293T细胞接种在6 cm皿内，待细胞汇合率达到50%左右，撤去培养液；加人 3 mL无血清的DMEM培养液，之后分别将4网目 的质粒 P
CDH-KLF9、pLKO.l-KLF9-shl、pLKO. 1-KLF9-S h2，以及对照组质粒pCDH、PLKO. 1，以及 3叫的辅助质粒PsPAX2，1网的辅助质粒pM D2. G 与250 g L无血清的DMEM混合。同时，将8斗 Lipofectamine™2000 与 250 (jl L无血清的 DM EM 混 合，静置5 min；随后将质粒和脂质体混匀，再静置 20 min，缓缓加入HEK293T细胞中转染。6 h后，将 转染体系撤掉，加人含有1〇〇 miyL FBS的DMEM培 养基的DMEM培养液。在转染后48 h 收集所有上
4期彭映然，等.过表达KLF9增加GPX4和活性氧（ROS)水平抑制悬浮培养的SK0V3人卵巢癌细胞凋亡339
清，将上清液置于4弋保存，重新加人含100 miyL FB S的DMEM培养液。再经过24 h，第2次收集上 清，与48 h收集的上清混匀，经0.45 p m滤器过滤 后得到病毒液，病毒液置于-80 t保存。感染 SK0V3细胞时，将病毒液与含有100 mL/L F B S的RPMI1640培养液1:1混合。同时加人1/1000的polybrene混匀，24 h 后换含有 100 mL/L FBS的RPMI1640培养液，完成感染。在感染后，使用含 2 m g/L的嘌呤霉素培养液筛选感染后的SK0V3细 胞系与没有进行感染的SK0V3对照组细胞系，72 h 后，待99%的没有感染慢病毒的空白对照组细胞死 亡后，得到可以稳定感染并表达目的质粒的细胞系 SK0V3-pCDH和SKOV3-KLF9oe，以及敲低 KLF9 表 达的 SK0V3-pLK0_ 1、SKOV3-KLF9-shl和SK0V3- KLF9-sh2细胞系。
1.2. 4 实时定量P C R法检测SK0V3-pCDH、SKOV3-KLP9°\ SK0V3-PLK0. 1, SKOV3-KLF9-shl 以及 SKOV3-KLF9-sh2 细胞中 KLF9 和 GPX4 的m R N A^ii K0V3-pCDH,SK0V3-KLF90E、SK0V3-PLK0. 1、SKOV3-KLF9-shl以及 SKOV3-KLF9-sh2细胞使用TRIzol试剂吹匀，转移到 无RNA酶的1.5 mL离心管中，一般6 cm皿的细胞 加入1m L的TRIzol试剂。其中，贴壁培养的细胞直 接吹下并转移，悬浮培养的细胞将培养体系800 r/min离心5 min后，弃去培养液，再加人TRIzol 试剂吹匀后转移。接着，每个样本加入200 m X三氯 甲烷，剧烈摇勻，在低温离心机中，4丈、12 000 r/min离心15 min，将上清转移到新的无RNA 酶的1.5 mL离心管中，每个样本大约400 ~ 500 jiL。之 后加人500 g L异丙醇，颠倒混匀。4 T、12 000 r/min离心10 min，吸弃上清，再加人1mL 750 m iyL酒精，轻轻摇晃；4 ^、12 000 r/min离心 5 min，吸弃酒精；在超净工作台内待酒精充分挥发 后，加人无RNA酶的双蒸水，并在55 T的水浴锅中 放置5 min，使RNA充分溶解。在分光光度计下定 量，每个样本取500 ng或1p g进行反转录和实时定 量PCR。反转录和实时定量PCR的过程参考TaKaRa 公司试剂说明书。
1.2. 5Western blot法检测510凡3叩0011、他0丫3-KLF90E、SK0V3-pLK0. 1、SKOV3-KLP9-shl 以及 SK0V3-KLF9-sh2细胞KLF9、GPX4的蛋白表达
SK0V3-pCDH、SKOV3-KLF9oe、SK0V3-pLK0. 1、SKOV3-KLF9-shl 以及 SKOV3-KLF9-sh2 细胞用 PBS 冲洗1次，使用含蛋白酶抑制剂的蛋白裂解液RIPA 提取蛋白，并用BCA蛋白定量法定量调整浓度。作
为参考，本实验中将细胞裂解液的蛋白含量调整为 3 g/L。将调好浓度的蛋白经沸水加热10 min后，即可上样。经过电泳、转膜和封闭后，将已经封闭好的 NC膜加人对应的抗体，其中小鼠抗人KLF9抗体 (1:200)、兔抗人GPX4抗体（1 : 1000)、兔抗人 p-actin抗体(1:1000), 4 t孵育过夜；使用含1miyL 吐温的 Tris 缓冲盐溶液（Tris-buffered saline-Tween，TBST)洗涤NC膜4次，每次5min，加人HRP标记的 山羊抗兔IgG和HRP标记的山羊抗小鼠IgG(1:10 000)，室温孵育1h；使用TBST洗涤4次，使用化学发光法 显，在化学发光仪中进行蛋白条带检测。
1.2.6 双荧光素酶报告基因实验检测KLF9蛋白对 GPX4的转录调控在Ensembl基因组数据库（http: ///index.html)中查人源性 GPX4 基因的起始密码子之前2000个碱基以及之后500个 碱基序列，即GPX4转录调控相关的序列。在转录因 子预测数据库 JASPAR(http: //g/) 中查人源性KLF9蛋白针对GPX4基因的转录调控 区域可能的作用位点。设计GPX4转录调控区域的 位点相关的引物，并进行分子克隆，最终通过DNA 连接酶连接在PGL3载体上。将HEK293T细胞铺至 48孔板，待细胞汇合率达到50%时，分别过表达 KLF9的pCDH-KLF9质粒和对照组pCDH质粒、连接了 GPX4转录调控区段的PGL3质粒、内参荧光质 粒RT-C K以及脂质体Lipofectamine™2〇00 —起转染 到HEK293T细胞中，转染操作与病毒包装时相同。作为参考，在本实验中，pCDH和PCDH-KLF9每组 设置3个复孔，每个孔加人100 n g的PCDH-KLF9、pCDH、pGL3质粒5 n g的内参荧光质粒RT-C K和0.5 |xL 的Lipofectamine1M2000。转染 6h后，换成含 有100 miyL F B S的DMEM培养液，48 h后收集蛋 白。
转染48 h后，使用Promega公司双荧光素酶报 告基因检测试剂盒依次检测萤火虫荧光强度和海肾 荧光强度，萤火虫荧光强度与海肾荧光强度的比值 即为样本的相对荧光值，重复3次并进行统计学分 析，比较对照组和实验组的相对荧光强度值，可以推 断出转录因子KLF9对GPX4启动子区域的转录调控 作用。具体操作可以参见Promega公司说明书。
1.2.7 流式细胞术检测SK0V3细胞R0S含量在
reactive oxygen species (ros)未处理和经过polyHEMA处理后的6孔板内，每孔分
别加人 5 x 105个 SK0V3-PCDH、SKO V3-KLF9hk、
SK0V3-pLK0.1、SKO V3-KLF9-shl以及 SKOV3-KLF9- sh2细胞。经48 h培养后，将贴壁培养的细胞消化后
340
细胞与分子免疫学杂志（Chin  J  Cell  Mol  Immunol )2021，37(4)
AV103
O '
pCDH
KLF9U
雪
pCDH
KLF9U
2 结果
2.1转录因子KLF 9对GPX 4基因的启动子区域有 转录抑制作用
双焚光素酶报告基因实验结果显示，与转人 pCDH 质粒的对照组相比，转入过表达KLF 9的 KLF 9-PCDH 质粒的HEK 293T 细胞的相对荧光强度 值显著降低，差异有统计学意义(P <〇.01，图1)。
pCDH
KLF9oe
bP <0.01 vs  pCDH.
图1双荧光素酶报告基因实验检测KLF 9对GPX 4启动子区
域的转录调控
2.2 上调SKOV 3细胞的KLF 9表达可增加细胞
GPX 4的蛋白表达，反之亦然
实时定量PCR 和W estern  blot 结果显示，与对照
22
GPX4p-actin
GPX4P-actin
A ：实时定量P C R 检测过表达或敲低K L F 9表达后，S K 0V 3细胞GPX4 的m RN A 表达变化；
B : Western b lo t 法检测过表达K L F 9后，SKOV3 细胞G P X 4的蛋白表达变化；C: Western b lo t 法检测敲低K L F 9后，
S K 0V 3细胞G P X 4的蛋白表达变化.hP <0.01 w pCDH; ><0.01仍 pLKO. 1.
图2调节SK 0V 3细胞KLF 9表达对GPX 4表达水平的影响
离心并弃去上清，同时悬浮培养的SK 0V 3细胞的全 部上清收集后，离心弃去上清。用2mL 的含1 mL/L R 0S 探针的完全培养液重悬细胞，在37 t 避光孵育 30 min ；用无菌PBS 洗涤2次，流式细胞仪异硫氰酸 突光素（fluorescein  isothiocyanate，FITC  )通道检测突 光，通过荧光强度确定细胞中R 0S 含量，每组进行 3次重复实验。
1.2.8 流式细胞术检测SK 0V 3细胞凋亡
将贴壁
培养的 SK 0V 3-pCDH 、SKO V 3-KLF 9°E 、SK 0V 3-pLK 0. 1、 SKOV 3-KLF 9-shl  以及 SKOV 3-KLF 9-sh 2 细胞消化后 离心并弃去上清，同时悬浮培养的SK 0V 3细胞的全 部上清收集后离心弃去上清。使用无菌P B S 洗涤 两次，弃去上清。随后分别将20 jxL 的annexin  V - FITC 与P I 染料加人细胞沉淀中，4丈孵育30 min ; 流式细胞术检测。armexin  V -FITC 阳性的细胞是凋 亡细胞，每组进行3次重
复实验。
1.2.9统计学分析本实验中所有可统计的数据均 使用Graphpad  Prism8软件进行统计学分析，组间差 异采用非配对《检验法进行分析，P  <0. 05为差异具 有统计学意义。组SK 0V 3-pCDH 相比，转人KLF 9-pCDH 病毒的 SKOV 3-KLF 9°E 细胞系中，KLF 9成功过表达，实时定 量PCR 的结果差异有统计学意义（P < 0.01)；与对 照组SK 0V 3-pLK 0. 1相比，转人KLF 9-pLK 0. 1病毒 的 SKOV 3-KLF 9-shl  和 SKOV 3-KLF 9-sh 2 细胞系中， KLF 9的表达被成功敲低，实时定量PCR 的结果差异 有统计学意义（P <〇. 01)。W estern  blot 结果显示: 与对照组SK 0V 3-pCDH 相比，SKOV 3-KLF 9i )k 细胞的 GPX 4蛋白表达上升；与对照组SK 0V 3-PLK 0. 1相 比，SKOV 3-KLF 9-shl  和 SKOV 3-KLF 9-sh 2 细胞中 GPX 4蛋白表达略有下降。而实时定量PCR 结果显 示，改变SK 0V 3细胞中KLF 9的表达水平，对其 GPX 4的mRNA 变化并不明显（图2)。实时定量PCR 的数据使用Graphpad  Prism  8软件进行统计学分析, 组间差异采用非配对 <；检验法进行分析，P < 〇.〇5为 差异具有统计学意义。
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4期彭映然，等.过表达KLF 9增加GPX 4和活性氧（ROS )水平抑制悬浮培养的SK 0V 3人卵巢癌细胞凋亡
341
pCDH
KLF9OE
pLKO.l
KLF9-shl KLF9-sh2
A ：流式细胞术检测SK 0V 3细胞ROS 含量；
B : SK 0V 3细胞ROS 含量
的半定量分析•
仍pCDH .
图3流式细胞术检测调节KLF 9表达水平对SK 0V 3细胞
NC SKOV3-pCDH
SKOV3-KLF9oe
2.3 KLF 9的过表达会引起SKOV 3细胞中R O S 含
量上升
流式细胞术检测结果显示，与对照组SK 0V 3-
pCDH 相比，过表达KLF 9的SK 0V 3的细胞中ROS 含量显著上升（P  <〇.〇5，图3)；与此同时，与对照 组 SK 0V 3-pLK 0.1 相比，KLF 9 s h l /sh 2 转染的 SK 0V 3细胞，敲低KLF 9后，细胞ROS 含量变化不 明显。
2.4 悬浮培养条件下，过表达KLF 9可以抑制 SKOV 3细胞的凋亡
流式细胞术结果显示：在贴壁培养条件下，与 PCDH 转染的对照组SK 0V 3细胞相比，过表达KLF 9 的
SK 0V 3细胞凋亡比例无明显变化；同时，在贴壁 培养条件下，与pLKO . 1转染的对照组SK 0V 3细胞 相比，敲低KLF 9的SKOV 3细胞凋亡比例无明显变 化（图4A 、B )。在悬浮培养条件下，与PCDH 转染 的对照组SKOV 3细胞相比，过表达KLF 9的SKOV 3 细胞凋亡比例明显下降(P <〇.〇5)；同时，在贴壁培 养条件下，与pLKO . 1转染的对照组SK 0V 3细胞相 比，敲低KLF 9的SKOV 3细胞凋亡比例明显上升
(尸 <0.05 或 P
<0.01，图 4C 、D )。
A ：流式细胞术检测贴壁培养条件下SKOV 3细胞凋亡情况；
B ：贴壁培养条件下SK 0V 3细胞凋亡比例的半定量分析；
C ：流式细胞术检测悬浮培
养条件下SKOV 3细胞凋亡情况；D ：悬浮培养条件下SK 0V 3细胞凋亡比例的半定量分析.aP <〇.〇5t «pCDH ; b /V O .O l Z /^O .OStispLKO .l .
图4调节KLF 9表达后，流式细胞术检测SK 0V 3细胞在贴壁和悬浮培养条件下凋亡的比率
3讨论
卵巢癌是一种严重威胁女性生命安全和生活质
量的恶性肿瘤[1〜。卵巢癌致死率高的原因主要有两 个方面，一是卵巢癌一般晚期才会被确诊，此时肿瘤 已经转移到盆腔难以[23]；二是尽管卵巢癌患者
在得到救治后症状有所缓解，但是频繁出现的复发 与转移最终导致患者死亡[24]。卵巢癌的转移机制的 研究尚不充分，还有很多亟待解决的问题。借助
polyH E M A 可以进行细胞的悬浮培养，以此来更真实 的模拟卵巢癌在体内的转移情况[25]。随着肿瘤领域
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C U  〇
SKOV3-pCDH
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102 10; Annexin V -FITC SKOV3-pCDH
10° 101 102 10 Annexin V -FITC SKOV3-KLF9-sh2
SKOV3-KLF9-sh2
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10° 101 102 10: Annexin V -FITC
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SKOV3-pLK0.1
10° 10* 102 1C
Annexin V -FITC
ROS 含量的影响
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