补阳还五汤抗动脉粥样硬化氧化应激的生信
分析及实验研究
龙清吟，傅馨莹，李菀榆，李俊熙，刘竞泽，李艳军，谭
维，胡
聪，张
伟*
湖南中医药大学中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室，湖南长沙410208
〔收稿日期〕2022-11-23
〔基金项目〕国家自然科学基金项目(82174218)；湖南省自然科学杰出青年基金项目(2020JJ2024)；湖南中医药大学中西结合一流学科开放基金项目(2020ZXYJH49)。
〔第一作者〕龙清吟，女，硕士研究生，研究方向：中西医防治心脑血管疾病。
〔通信作者〕*张伟，男，博士，教授，博士研究生导师,E-mail:**********************。
〔摘要〕目的基于基因芯片数据库(GEO )、网络药理学，结合ox-LDL 诱导的大鼠主动脉血管内皮细胞氧化损伤模型进行实验验证，探究补阳还五汤(Buyang Huanwu Decoction,BYHWD )干预动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS )氧化应激的作用及相关机制。方法通过TCMSP 、Herb 数据库收集BYHWD 中7味中药有效成分及靶点；从GEO 数据库下载GSE19286、GSE2372数据集，鉴定AS 差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs )；通过GeneCards 数据库获取氧化应激靶点；取交集筛选出BYHWD 、DEGs 、氧化应激共同靶点，进行PPI 、GO 和KEGG 通路富集分析；在GSE19286、GSE2372的表达矩阵中，采用独立样本t 检验进行核心靶点验证。结合GEO 数据库和网络药理学结果进行体外实验验证，检测药物对细胞活性氧表达及ALB 、PLG 、F2、GC 、PLK1基因表达的影响。结果筛选出972个中药靶点、9438个氧化应激靶点、173个DEGs ，其中103个DEGs 在AS 组织样本中高表达、70个DEGs 在AS 组织样本中低表达；综合中药作用靶点、AS DEGs 和氧化应激靶点，得到24个“AS 潜在靶点”，进行GO 和KEGG 富集分析，结果提示“AS 潜在靶点”主要通过调控细胞周期信号通路，卵母细胞成熟信号通路和细胞减数分裂信号通路等信号通路发挥作用。根据Degree 算法对“AS 潜在靶点”进行拓扑分析，鉴定出前5位“AS 核心靶点”，据统计分析提示BYHWD 可能可以通过上调ALB 、PLG 、F2、GC 的表达、下调PLK1的表达起到干预AS 氧化应激的作用。体外实验结果显示,BYHWD
能抑制ox-LDL 引起的活性氧(reactive oxygen species,ROS )增高;qPCR 结果显示,ox-LDL 刺激后的大鼠主动脉内皮细胞ALB 、PLG 、F2、GC 基因表达均下降,PLK1基因表达上升,BYHWD 含药血清干预后可以上调ALB 、PLG 、F2、GC 基因的表达(P <0.01;P <0.05)，下调PLK1的表达(P <0.05)。结论BYHWD 干预AS 氧化应激具有多成分、多靶点、多途径的作用特点，其机制可能与减少ROS 表达，上调ALB 、PLG 、F2、GC 基
因、下调PLK1基因表达相关。
〔关键词〕补阳还五汤；动脉粥样硬化；氧化应激；基因芯片；网络药理学；分子对接〔中图分类号〕R285.5
〔文献标志码〕A
〔文章编号〕doi:10.3969/j.issn.1674-070X.2023.04.016
Bioanalysis and experimental study of Buyang Huanwu Decoction against oxidative
stress in atherosclerosis
LONG Qingyin,FU Xinying,LI Wanyu,LI Junxi,LIU Jingze,LI Yanjun,TAN Wei,HU Cong,ZHANG Wei*Co
llege of Integrated Chinese and Western Medicine,Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410208,China
〔Abstract 〕Objective To investigate the interventions of Buyang Huanwu Decoction (BYHWD)on atherosclerosis (AS)
oxidative stress and its related mechanism using Gene Expression Omnibus (GEO)and network pharmacology,combined with the rat aortic vascular endothelial cell oxidative damage model induced by ox-LDL.Methods The active components and targets of 7Chinese medicines in BYHWD were collected by TCMSP and Herb.GSE19286and GSE2372data sets were downloaded from GEO to identify AS differentially expressed genes (DEGs).The oxidative stress (OS)targets were obtained from GeneCards database.The common targets of BYHWD,DEGs and OS were selected by intersection to analyze the enrichment of PPI,GO and KEGG pathways.In the expression matrix of GSE19286and GSE2372,the core target was verified by independent sample t-test.The
本文引用：龙清吟，傅馨莹，李菀榆，李俊熙，刘竞泽，李艳军，谭维，胡聪，张伟.补阳还五汤抗动脉粥样硬化氧化应激的生信分析及
实验研究[J].湖南中医药大学学报,2023,43(4):668-676.
湖南中医药大学学报hnzyydxxb.hnucm.edu
2023年第43卷
effects of drugs on the expression of reactive oxygen species and the expression of ALB,PLG,F2,GC and PLK1genes were tested in vitro combined with GEO and network pharmacological results.Results The total of972TCM targets,9438OS targets,and173 DEGs were screened.Among them,103DEGs were highly expressed and70DEGs were lowly expressed in AS tissue samples.By combining the BYHWD targets,ASDEGS and OS targets,24"AS potential targets"were obtained for GO and KEGG enrichment analysis.The results suggested that"AS potential targets"mainly play a role by regulating cell cycle,oocyte maturation and cell meiosis signaling pathways.According to the topological analysis of"AS potential target"based on Degree algorithm,the five"AS core targets"were identified.According to statistical analysis,BYHWD may interfere with AS OS by up-regulating the expression of ALB,PLG,F2,GC and down-regulating the expression of PLK1.The results of vitro experiment showed that BYHWD could inhibit the increase of reactive oxygen species(ROS)induced by ox-LDL.The qPCR results showed that the expression of ALB,PLG,F2 and GC gene decreased and the expression of PLK1gene increased in rat aortic endothelial cells stimulated by ox-LDL.BYHWD-containing serum could up-regulate the expression of ALB,PLG,F2and GC(P<0.01,P<0.05)and down-regulate the expre
ssion of PLK1(P<0.05).Conclusion BYHWD has the characteristics of multi-component,multi-target and multi-pathway in the intervention of atherosclerotic OS,and its mechanism may be related to the decrease of ROS expression,up-regulation of ALB,PLG,F2,GC gene and down-regulation of PLK1gene expression.
〔Keywords〕Buyang Huanwu Decoction;atherosclerosis;oxidative stress;gene chip;network pharmacology;molecular docking
《中国心血管健康与疾病报告》指出,2019年我国农村、城市心血管疾病分别占总死亡因素的46.74%和44.26%，每5例死亡中就有2例死于心血管疾病，在我国心血管疾病的发病率与致死率仍高居榜首[1]。动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是最常见的心血管疾病之一，有着发病缓慢、病程长的特点，以血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)发生功能障碍为疾病起点，血管屏障功能受损使得炎性因子、血小板黏附因子、单核细胞及脂质等向VECs下迁移与沉积，同时引起胞内氧化-抗氧化系统失衡产生过多的活性氧(reactive oxygen species,ROS)，随着沉积的低密度脂蛋白(low-density lipoprotein, LDL)被修饰成氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)，继而被巨噬细胞或平滑肌细胞吞噬，形成泡沫细胞，在综合交互作用下，最终导致动脉粥样斑块的形成[2-3]。由此可见，血管内皮细胞的炎症反应和氧化应激是AS的重要起始环节。
虽然AS疾病本身并不致命，但随着斑块不断形成，可能使动脉管腔内血流量减少50%以上[4]，继而伴随着血栓形成，叠加在破裂或侵蚀的AS斑块上，就可能导致更严重的甚至危及生命的临床事件，如心绞痛、冠状动脉血栓、中风、心肌梗死等。《动脉粥样硬化中西医结合诊疗专家共识2021》指出[5]，根据AS临床上出现的主要症状，中医学可将其归为“眩晕”“头痛”“痴呆”“中风”“胸痹”“真心痛”“脉痹”“脉积”范畴，可分为痰瘀互结、痰热互结、气阴两虚、气滞血瘀4个主要证型。补阳还五汤作为经典方剂用于心血管疾病的。有研究表明，补阳还五汤具有调控AS氧化应激水平的作用[6-7]，但中药复方化学成分复杂，补阳还五汤是如何协同多成分、多靶点、多途径干预AS氧化应激的，仍需进一步探讨。
因此，为进一步研究补阳还五汤干预AS氧化应激的作用机制，本研究结合GEO基因芯片数据库、网络药理学，筛选补阳还五汤AS氧化应激的核心靶点，通过原代血管内皮细胞氧化应激损伤等实验进行核心靶点验证，以观察补阳还五汤对AS 氧化应激损伤的改善作用。
1材料与方法
1.1生物信息学研究
1.1.1补阳还五汤靶点的获取通过TCMSP数据库(sp-e/tcmsp.php)，以药物口服生物利用度(oral bioavailability,OB)≥30%，化合物类药性(drug likeness,DL)≥0.18为筛选条件，获取补阳还五汤中赤芍、川芎、当归、黄芪、桃仁、红花6味中药的活性成分。通过Herb(herb.ac/)数据库，
获取补阳还五汤中地龙的中药活性成分。综合TCMSP、Herb库中结果，将补阳还五汤中共7味中药的活性成分导入PubChem数据库(pub⁃bi.v/)获取其SMILES号或活性成分化学结构式[8]。将SMILES号或活性成分化学结构式导入Swiss Target Prediction数据库(www. swisstargetprediction.ch/)获取中药药物靶点。1.1.2AS差异基因的获取通过GEO数据库(https:
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//bi.v/geo/)，以Atherosclerosis为检索词，获取GSE19286、GSE2372芯片。以芯片中样本的表达矩阵作为验证集，将芯片中GSM44658、GSM44659、GSM478610、GSM478611样本设为正常组(Normal组),GSM44660、GSM44661、GSM478606、GSM478607样本设为AS模型组(Model组)。通过R 语言limma包分析，并以|log2FC|>1且P.adj<0.05为筛选条件对样本表达矩阵进行差异分析，获取AS差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)。去除一个探针对应多个基因的探针，同时保留多个探针对应一个基因的最大探针。并通过R语言ggplot2包绘制DEGs火山图、R语言ComplexHeatmap包前30位DEGs热图[9]。
1.1.3氧化应激靶点的获取以“oxidative stress”作为检索词，在GeneCards[10]数据库(www. /)中获取氧化应激靶点。
1.1.4补阳还五汤抗AS氧化应激潜在靶点韦恩图的构建将补阳还五汤靶点(drug)、AS差异表达基因(DEGs)、氧化应激靶点(oxidative stress)取交集，采用R语言ggplot2包绘制补阳还五汤抗AS氧化应激潜在靶点(AS潜在靶点)韦恩图。
1.1.5GO功能富集分析和KEGG通路富集分析通过DAVID数据库(v/)，选择“Homo sapiens”物种，获取“AS潜在靶点”的GO、KEGG数据。采用R语言gglopt包根据-log P值绘制前5位GO、KEGG柱状图、前5位KEGG气泡图、前5位KEGG靶点通路图。
1.1.6蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein inter⁃action,PPI)网络图的构建及拓扑分析通过STRING 数据库(/)，导入“AS潜在靶点”选择“Homo sapiens”物种，导出PPI网络图信息。采用Cytoscape3.7.2对PPI蛋白网络图进行可视化。并利用CytoHubba工具根据Degree值算法鉴定出前5位“AS核心靶点”，对其进行拓扑分析。1.1.7“AS核心靶点”统计学分析获取“AS核心靶点”在GSE19286、GSE2372芯片中Normal组样本与Model组样本的表达矩阵信息，采用R语言对表达矩阵进行独立样本t检验以验证其在AS中的差异表达情况并绘制差异分组比较图。
1.2实验验证
1.2.1药物补阳还五汤由黄芪60g、赤芍9g、川芎6g、当归9g、地龙9g、红花9g、桃仁9g组成，购自湖南中医药大学第一附属医院中药房，经湖南中医药大学第一附属医院左亚杰教授鉴定。阿托伐他汀片(批
号H20133127,10mg/片)购自浙江乐普药业股份有限公司。
1.2.2动物SPF级雄性SD大鼠，体质量180~200g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，动物合格证号:SCXK(湘)2019-0004。
1.2.3主要试剂DMEM/F12培养基、特级胎牛血清(批号:PM150210、164210-500)购自武汉普诺赛生命科技有限公司;CCK8试剂盒(批号:BS350B)购自上海白鲨生物科技有限公司;ox-LDL(批号:YB-002)购自广州奕源生物科技有限公司;RNA提取试剂盒(批号:DP419)购自北京天根生化科技有限公司；逆转录试剂盒(批号:E047)和SYBR qPCR Su⁃perMix Plus(批号:E096-01A)购自上海近岸科技有限公司。
1.2.4主要仪器CO2培养箱(德国Heraeus公司); SW-CJ-1FD超净工作台(苏州苏净仪器自控设备有限公司);Cytation3型多功能酶标仪(美国Bio-Tek 公司);Heraeus Fresco17型超速冷冻离心机(美国Thermo Fisher Scientific公司)。
1.2.5含药血清采用随机数表法，将SD大鼠随机分为对照组、补阳还五汤组、阿托伐他汀组，每组5只。含药血清的提取方法及灌胃剂量参考课题组前期方法及研究[11]。药物组灌胃补阳还五汤10.8g/(kg·d)，阿托伐他汀0.9mg/(kg·d)，对照组灌胃等体积生理盐水1mL/(100g·d),2次/d，连续7次。于末次给药2h后,10%钠腹腔注射麻醉大鼠，麻醉后暴露腹主动脉取血，取血后脱颈处死。4℃静置2h 后，全血3000r/min离心15min，取上层血清，分别得到空白血清、补阳还五汤血清及阿托伐他汀血清，于水浴
锅56℃灭活30min，滤过分装，于-80℃保存。
1.2.6大鼠主动脉内皮细胞提取主动脉内皮细胞提取参照消化压片法[12]。快速打开大鼠胸腹腔，分离出主动脉，置于含有PBS(含1%青链双抗)的6cm 直径单孔培养皿中，轻轻去除血管外周脂肪、结缔组织。剪开血管，使得血管内膜暴露在外。漂洗3次去除残留的血细胞，吸弃多余PBS。加入2g/LⅠ型胶原酶2mL,37℃消化1min后弃去，加入适量含血清培养基终止消化。将主动脉剪成1mm左右长度的血管段(20~25段)，转移至用10g/L明胶预先包被好的6孔板中央，每孔4~5段。用灭菌的盖玻片盖在血管段上方，轻轻下压，每孔加入2mL大鼠主动
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脉内皮细胞完全培养基培养。
1.2.7大鼠主动脉内皮细胞鉴定取第3代近融合VECs，细胞爬片后1%BSA封闭30min，大鼠来源的vWF一抗4℃过夜后，用FITC标记的荧光二抗室温孵育1h，于激光共聚焦下进行免疫荧光鉴定。
1.2.8血管内皮细胞损伤模型的建立取处于对数生长期的主动脉血管内皮细胞，以1×105/孔接种于96孔板，待细胞贴壁。设置对照组和ox-LDL(25、50、75、100g/mL)组，各给药组加入相应溶液，对照组加
入含10%FBS的DMEM/F12培养基，分别培养6、12、24h，加入CCK8试剂，于37℃、5%CO2恒温培养箱孵育40min，采用酶标仪测定450nm 处的吸光度(A)值，计算细胞抑制率。
1.2.9细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测药物抗损伤情况细胞造膜和给药后，加入荧光探针H2DCF-DA(1∶1000)检测ROS浓度，培养40min后，细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF，于荧光显微镜下拍照，采用Image J测定荧光值。
1.2.10qPCR法检测相关mRNA表达提取细胞总RNA，微量核酸蛋白检测仪检测RNA样品的浓度和纯度，再进行反转录得到cDNA，采用SYBR法进行实时PCR反应。反应体系(25μL体系):SYBR Green qPCR Mix12.5μL,10μmol/L正反引物2.5μL, cDNA1μL,nuclease-free water6.5μL。每个样品设3个孔，反应在实时定量PCR仪上进行。以GAPDH为内参基因，采用2-△△Ct法计算基因相对表达量。引物由武汉赛维尔生物科技有限公司合成，序列见表1。平行实验3次。
1.2.11统计学分析所有统计分析均使用SPSS 23.0软件进行，计量资料以“x±s”表示，组间比较若符合正态性且方差齐性时，采用单因素方差分析LSD法进行两两比较；方差不齐时，采用Tamhane's T2法进行两两比较。2结果
2.1补阳还五汤靶点的获取
综合TCMSP、Herb数据库结果，获取黄芪活性成分31个，包括formononetin(芒柄花素)、hedera⁃genin(蛇床子素)、isoflavanone(异黄酮)等；当归活性成分39个，包括beta-sitosterol(β谷甾醇)、stig⁃masterol(豆甾醇)、carvacrol(香芹酚)等；赤芍活性成分2个，包括baicalein(黄芩素)、ethyl oleate(油酸乙酯)；川芎活性成分15个，包括myricanone(杨梅酮)、crysophanol(大黄酚)等；桃仁活性成分20个，包括beta-sitosterol(β谷甾醇)、campesterol(樟脑甾醇)、hederagenin(蛇床子素)等；红花活性成分14个，包括6-hydroxykaempferol(6-羟基山柰酚)、baicalein (黄芩素)、beta-carotene(β-胡萝卜素)等；地龙活性成分12个，包括palmitic acid(棕榈酸)、succinic acid (琥珀酸)、vanillin(香兰素)等。
综合PubChem、Swiss Target Prediction数据库结果，共获取赤芍153个靶点(剔除10个重复值)、川芎521个靶点(剔除804个重复值)、当归591个靶点(剔除1188个重复值)、黄芪504个靶点(剔除1196个重复值)、桃仁393个靶点(剔除539个重复值)、红花336个靶点(剔除664个重复值)、地龙281个靶点(剔除503个重复值)，把这7味中药靶点进行综合匹对，去除重复靶点后得到972个作用靶点。
2.2AS差异基因的获取
联合GSE19286、GSE2372芯片对其样本矩阵进行差异分析并以|log2FC|>1且P.adj<0.05为筛选条件绘制火山图(图1A)，共筛选出173个DEGs，其中103个DEGs在AS组织样本中高表达(log2FC>1), 70个DEGs在AS组织样本中低表达(log2FC>1)。根据|log2FC|排序绘制前40位差异基因热图以查看其在各样
本中的表达情况(图1B，表2)。2.3氧化应激靶点的获取GeneCards数据库共获取9438个氧化应激靶点，根据预测分数大小排序前10位氧化应激靶点
表1引物序列
基因名称ALB PLG F2 PLK1 GC GAPDH
上游引物(5'→3') AACAAGAGCCCGAAAGAAACG AGGAACCCAGACAATGATGAAC GTCTGGAAGGTCGCTGTGCTAT TACAGTATTCCCAAGCACATCAACC GAGGCAACTAACTTCTTTCATCG CCTCGTCCCGTAGACAAAATG
下游引物(5'→3')
CTGGCAACTTCATGCAAATAGTG
GTCTTGGAGATTTTGCCCTCATACT
GAGTTGATTTCAGGCTTGTGGG
GGGATGTAGCCAGAAGTGAAGAAC
CAAAGTCCGAGTGTTTCTCCAC
TGAGGTCAATGAAGGGGTCGT
片段长度/bp
154
143
124
131
167
133
671
湖南中医药大学学报hnzyydxxb.hnucm.edu2023年第43卷表2前40位差异基因差异分析情况
DEGs APOE MMP12 SPP1 AMBP
FGB UGT2B5 SERPINA3K
ALB COL2A1
reactive oxygen species (ros)TTR APOA1
PZP CD5L CYP2C37
FGA CLCA2 AKR1C6 PSMB11
GC 1700003E16RIK SERPINA1B TREM2 KLRA1 RDH7 CYP2C50 CYP3A11 SLC27A5 AI594671
FGG COL10A1 CYP2D26
NEB 4930511A02RIK 2810007J24RIK CXCL5 CYP3A25 CHAD CCL2 UHRF1
log2FC
-5.257380
4.900150
4.706413
-4.167260
-4.035490
-3.522990
-3.301780
-3.280870
3.215110
-3.198530
-3.197440
-3.190760
3.063399
-3.028050
-2.983090
2.978567
-2.978210
2.912136
-2.892160
2.844224
-2.817850
2.816793
2.790821
-
2.766940
-2.743330
-2.732750
-2.707480
-2.696050
-2.687260
2.659244
-2.653010
-2.652540
2.526025
-2.460050
2.452579
-2.432320
2.428766
2.415448
2.360952
P.adj
0.0000028
0.0002287
0.0000331
0.0000000
0.0004611
0.0018978
0.0000065
0.0000017
0.0003332
0.0000016
0.0000005
0.0000001
0.0006833
0.0020090
0.0025518
0.0070315
0.0015679
0.0162830
0.0000578
0.0034039
0.0031607
0.0004153
0.0000077
0.0000592
0.0001715
0.0001492
0.0168279
0.0096548
0.0001599
0.0139985
0.0128801
0.0452115
0.0001235
0.0136302
0.0045031
0.0255535
0.0065972
0.0032976
0.0000041
依次为NOS3、NO S2、CPT2、NOS1、SOD1、CAT、AIFM1、TNF、TP53、NFE2L2。
2.4补阳还五汤干预AS氧化应激潜在靶点韦恩图
取972个“中药靶点”、173个“AS差异基因”、9438个“氧化应激靶点”的交集绘制韦恩图，获取“AS 潜在靶点”共24个，分别为CDK1、CCNB2、PGR、PLG、ALB、CHEK1、SELE、AMPD1、LGMN、PTGS2、MMP12、FABP1、LGALS4、CHRNA7、C CR9、DBF4、TTR、GRM5、TOP2A、GC、F2、PLK1、C3AR1、VCAM1(图2A)。
2.5GO、KEGG富集化分析结果
“AS潜在靶点”共获取389条GO分析条目，包括328条生物过程(biological process,BP)条目、44条细胞组分(cellular component,CC)条目、17条分子功能(molecular function,MF)条目,KEGG分析共获取14条KEGG(通路)条目。结果显示,“AS潜在靶点”主要参与对β淀粉样蛋白的反应、核分裂核膜解体、膜解体等生物进程、富集于血液微粒、质膜筏、空泡腔等细胞组分，参与毒性物质结合、抗氧化活性、组蛋白激酶活性等分子功能(图2B)。KEGG 结果显示,“AS潜在靶点”主要通过调控CDK1、CHEK1、PLK1、CCNB2、DBF4CDK1、CHEK1、PLK1、CCNB2、DBF4介导的细胞周期信号通路,CDK1、PGR、PLK
1、CCNB2介导的卵母细胞成熟信号通路, CDK1、PGR、PLK1、CCNB2介导的卵母细胞减数分裂信号通路等信号通路发挥作用(图2C、图2D)。
2.6PPI网络图的构建及拓扑分析STRING数据库剔除2个无互作关系的靶点，分别为CCR9、AMPD1，保留22个AS潜在靶点的蛋白互作网络图(图3A)。
根据Degree算法对“AS潜在靶点”进行拓扑分析，鉴定出前5位“AS核心靶点”。根据Degree值排序前5位“AS核心靶点”依次为白蛋白(ALB)、纤溶酶原(PLG)、F2-异前列烷(F2)、Polo激酶1(PLK1)、糖皮质激素(GC)(图3B、表3)，提示其可作为补阳还五汤干预AS氧化应激的核心靶点。
2.7“AS核心靶点”统计学分析
差异分组比较图结果显示(图4),ALB、PLG、F2、GC在模型组中表达均低于正常组(P<0.01、P< 0.001),PLK1在模型组中表达高于正常组(P<0.01)，提示补阳还五汤可能可以通过上调ALB、PLG、F2、GC的表达、下调PLK1的表达起到干预AS氧化应激的作用。
2.8大鼠主动脉内皮细胞鉴定
如图5所示，用免疫荧光法鉴定显示，细胞均表达内皮细胞特有的vWF蛋白。因此，证明所提取细胞为内皮细胞。
2.9不同浓度ox-LDL对血管内皮细胞损伤的影响
与对照组比较，不同浓度ox-LDL(25、50、75、100μg/mL)均可显著降低主动脉血管内皮细胞6、12、24h的活力(P<0.01)，抑制细胞增殖，且以ox-LDL50μg/mL干预血管内皮细胞24h作为细胞损伤的最佳条件。详见图6。
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