硕士学位论文
论文题目活性氧调控血小板凋亡及辐射对产板型
reactive oxygen species (ros)巨核Meg-01细胞影响的初步研究
研究生姓名王秀娟
指导教师姓名涂彧教授
专业名称放射医学
研究方向电离辐射与血小板
论文提交日期2014年5月
活性氧调控血小板凋亡及辐射对产板型
巨核Meg-01细胞影响的初步研究
中文摘要
目的研究Dibucaine（辛）和Thrombin（凝血酶）对血小板作用过程中活性氧的产生及抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）对其引起凋亡或酶切的作用，以及X射线对血小板凋亡和巨核细胞增殖分化等影响并探讨可能机制；
方法流式细胞术检测活性氧的产生、血小板GPIba的表达和线粒体膜电位的去极化；Western-blot法测定凋亡蛋白Caspase-3和抗凋亡蛋白Bcl-xL的表达水平和血小板酶切片段GC的表达。予以Meg-01细胞1、3、5、7(Gy)的X射线照射，CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞CD41和GPIba的表达以及Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况。
结果Dibucaine和Thrombin处理的血小板产生活性氧较对照组分别增加约1.64倍和1.5倍，而用NAC预处理组活性氧的产生明显低于刺激组。Dibucaine单独处理的血小板膜糖蛋白GPIba的表达明显减少，且离心后的上清中GC片段明显增多；而予以NAC（N-乙酰半胱氨酸）、DTT（二硫苏糖醇）等还原剂预先处理后再予以Dibucaine处理，血小板GPIba的表达减低明显受到抑制，上清液GC片段的表达也明显降低。Dibucaine处理组中△Ψm正常血小板为（13.52±3.01）%，NAC+Dibucaine 组为（86.30±9.37）%；Thrombin处理组中△Ψm正常的血小板为（76.58±5.28）%，NAC+Thrombin组为（93.00±3.03）%，差异均有统计学意义（P值均<0.001）。Dibucaine 处理的血小板，Caspase-3被激活后裂解的小片段明显多于DMSO对照组；预先用NAC处理血小板，再予Dibucaine处理，Caspase-3活化后裂解的小片段明显减少；Dibucaine或Thrombin处理的血小板抗凋亡蛋白Bcl-xL的表达较DMSO对照
组或空白组比较均有所减少；NAC预处理血小板后再予以Dibucaine或Thrombin处理，Bcl-xL的表达较Dibucaine或Thrombin单独处理组明显增多。予以2.5Gy~10Gy X射线照射，血小板线粒体膜电位和GPIba有小幅波动，但没有显著性差异。产板型巨核Meg-01细胞受到剂量大于3Gy的单次X射线照射后24小时，增殖能力较对照组明
显受到抑制，CD41或GPIba的表达较对照组明显增多，细胞受到照射后48小时，凋亡较对照组比较无显著差异，但3Gy以上照射的细胞坏死较对照比较有明显差异。
结论Dibucaine或Thrombin引起的血小板凋亡过程中，活性氧参与了其酶切和凋亡的调控；抗氧化剂NAC可明显抑制Dibucaine或Thrombin引起的血小板酶切与凋亡，并且主要是通过对活性氧的抑制或清除来发挥抗凋亡等作用的；2.5Gy~10Gy 的X射线照射不能引起血小板的凋亡与酶切。产板型巨核Meg-01细胞受到剂量大于3Gy的单次X射线照射，增殖明显受到抑制，而分化程度明显增加，细胞有晚期坏死的发生。此研究结果对进一步探讨血栓与止血、血小板减少以及辐射对造血系统的损伤具有一定的临床意义，其研究成果有望应用于相关疾病的或指导新药的研发。
[关键词]活性氧；血小板；凋亡；辐射；Meg-01巨核细胞
作者：王秀娟
指导老师：涂彧教授

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