复方地芬诺酯灌胃的家兔功能性便秘模型制作
目的 探讨复方地芬诺酯复制功能性便秘家兔模型的可行性。方法 模型组采用复方地芬诺酯混悬液经口灌胃15 d，空白组予以相应量的蒸馏水灌胃。观察家兔首粒黑便时间、24 h粪便颗粒数以及24 h粪便质量，以判断模型的复制情况。结果 与空白对照组家兔比较，模型组家兔的首粒黑便排出时间明显延长，粪便重量减轻，粪便颗粒数减少，并表现出不同程度的精神状态的改变。结论 复方地芬诺酯灌胃可用于制作家兔功能性便秘模型，但在造模过程中要尽量避免各种不利因素的影响。
Abstract：Objective To explore the feasibility on the functional constipation rabbit model duplicated by compound diphenoxylate tablet.Methods Mixed suspension of compound diphenoxylate tablet was used to conduct gavage through the mouth for 15 days in the model group. At the same time ，the control group was given the correspounding amount of distilled water lavage.The discharging time of the first grain of black feces，fecal weight and grains in 24 hours were observed to judge the replication of the model.Results Compared with the control group，the discharging time of the first grain of black feces of the model groutablet5
p was prolonged obviously.The fecal weight and grains were reduced，and showed different degrees of mental status change.Conclusion The gavage of compound diphenoxylate tablet can be used to make functional constipation rabbit model.However，we should avoid all kinds of unfavorable factors during the experiment.
Key words：Functional constipation rabbit model；Compound diphenoxylate tablet；Model duplication；Animal experiment
功能性便秘（functional constipation，FC），是指無器质性病因，没有组织结构异常或代谢障碍，又排除肠易激综合征的慢性便秘，是功能性胃肠病最常见的类型之一，主要临床表现为排便次数减少、粪便干结、排便费力等。目前认为它的发病与结肠运动功能障碍、肛门直肠功能障碍、精神心理异常等因素有关[2]。近年来对功能性便秘的机制研究多采用大鼠或者小鼠作为模型动物，鲜有家兔的便秘模型制作。本研究参考了相关文献，制作复方地芬诺酯家兔功能性便秘模型，并对其中出现的问题和不利因素进行归纳和探讨，报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料
1.1.1实验动物 4月龄的家兔20只，雌雄各半，体重2.5～3.5kg，购自成都达硕生物科技有限公司（合格证号：0014892），到实验室后首先进行1 w的适应性喂养。按照随机数字表法将家兔分为空白组、模型组2个组，每组10只，分组后每组家兔雌雄各半，体重无显著性差异。
1.1.2 实验药品 复方地芬诺酯（成都第一制药有限公司，生产批号：1403024）[3]，为止泻药，每片含盐酸地芬诺酯2.5 mg，硫酸阿托品0.025 mg。阿拉伯树胶粉（Gum arabic powder）（天津市化工有限公司，生产批号：20140725）。100目粉状活性炭（成都瑞丽神火木炭有限公司，生产批号：20140712）。
1.1.3实验器材 烧杯、玻棒、导尿管（用于灌胃[12-13]）、开口器、家兔固定器、酒精灯、粪尿分离器、注射器。
1.2实验方法
1.2.1药液及墨汁制备 药液：将复方地芬诺酯片研磨成粉与30℃蒸馏水以1：1的比例配置成复方地芬诺酯混悬液，灌胃前充分摇匀。墨汁：精密称取阿拉伯树胶100 g，加入800 ml蒸
馏水煮沸至溶液透明；取粉状活性炭50 g，精密称定后加入上述溶液中煮沸3次（即文火煮沸后关火，待溶液冷却至室温后再次文火煮沸，如此操作3次），待溶液冷却至室温后加蒸馏水定容至1000ml，放于0℃～5℃的冰箱保存，使用前摇匀[4]。1.2.2家兔便秘模型制作 将家兔分笼喂养，每笼一只，保持室内温度23℃～25℃，室内相对湿度50%～70%，室内清洁安静，适应性喂养7 d。适应喂养结束后，2组均禁食不禁水24 h，进行肠道功能的测定，具体方法如下：采用活性炭溶液灌胃，灌胃容量为10 ml/kg，随后恢复正常饮食饮水[5]。从灌墨汁的时间开始记录每只家兔的首粒黑便排出时间以及家兔24 h内粪便的粒数及重量.随后进行便秘模型的制作，按7.5 mg/kg的剂量对模型组家兔进行地芬诺酯混悬液经口灌胃，空白组按照同样方法抓取捆绑，进行蒸馏水经口灌胃。两组家兔均1次/d，连续灌胃15 d。然后再次进行肠道功能的检测。
1.2.3观测指标 观察两组家兔首粒黑便排出时间、24 h内排出的粪便的重量及颗粒数。因有文献报道[5]禁食禁水可影响动物排便改变或导致便秘发生，故为排除该因素对家兔的影响，观察期24 h内所有家兔均正常进食饮水。
1.3统计学处理 采用SPSS17.0统计软件对实验数据进行处理，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验分析组间差异。
2结果
2.1一般情况 在灌胃15 d后，与空白对照组比较，模型组家兔有明显的精神状态差、食欲不振、动作迟缓、毛发失泽等症状，且死亡率也高于空白对照组。
2.2粪便性状 模型组家兔粪便颗粒不规则变小、变干、偏硬，呈便秘型粪便，见图1；空白对照组家兔粪便颗粒大小均匀、干湿适中、软硬适中，见图2。
2.3 两组检测指标对比 空白对照组家兔首粒黑便排出时间为（206.00±24.12）min，24 h大便颗粒数为（312.50±136.56）粒，24 h大便质量为（104.20±78.88）g；而模型组家兔首粒黑便排出时间为（296.20±100.33）min，24 h大便颗粒数（235.00±76.45）粒，24 h大便质量为（57.50±15.06）g.两组家兔的首粒黑便排出时间、24 h大便质量、24 h大便颗粒数均有显著的统计学差异（P＜0.05。
3讨论
功能性便秘是指缺乏器质性病因，没有组织结构异常或代谢障碍，又排除肠易激综合征的慢性便秘[1]。功能性便秘患者可以有粪便硬度增加、排便难度增加、排便不尽感以及排便次数
减少等表现[1]。复方地芬诺酯是一种功能性腹泻的药物，可以阻滞肠粘膜上的受体，减轻肠道蠕动使肠内容物通过延迟，正常状态下服用可导致便秘[6]，故很多研究均采用此药制作便秘模型[5，7-10]。且有研究表明，采用复方地芬诺酯造模可明显延长动物的首粒排便时间，便粒和便量明显减少，为简单高效便秘造模方法[11]。本实验采用复方地芬诺酯灌胃建立家兔功能性便秘模型，使家兔首粒黑便排出时间明显延长，24 h大便颗粒数及24 h粪便质量均明显减少，与文献报道一致[1]，故认为模型建立成功，可用于后续实验的模型制作。
既往功能性便秘多以大鼠模型和小鼠模型为主，未见家兔模型的相关报道，因此对于家兔模型复方地芬诺酯的灌胃剂量不明确。本研究参照《医用实验动物学》中不同动物之间用药剂量的换算方法：已知A种动物每千克体重用药剂量，预估算B种动物每千克体重用药剂量时，先查得折算系数（W），再按下式计算：B种动物的剂量（mg/kg）=W×A种动物的剂量（mg/kg）。有研究表明[9]大鼠经15 mg/kg复方地芬诺酯灌胃2 w后便可出现明显的便秘表现，且与其他剂量组比较，动物死亡更少。而家兔与大白鼠的折算系数（W）为0.25，故家兔的用药量为0.25×15mg/kg=3.75 mg/kg。由于鲜有以家兔制作便秘模型的先例，在本研究的预实验阶段，研究者采用了3.75 mg/kg，5.6 mg/kg，7.5 mg/kg即换算剂量的1倍、1.5倍、2倍三个剂量进行灌胃，最终观察7.5 mg/kg剂量效果最理想。本实验在吸取前期预实验
的经验教训后，家兔的死亡率有所降低，归纳为以下几点：①熟练掌握插管手法，避免生硬、粗暴地操作，以免造成家兔咽喉黏膜的损伤；②操作时仔细体会插管的走行，切记插入肺内，且灌胃时尽量缓慢推进药物；③改用温热的蒸馏水进行药液的配置及灌胃，尽可能地避免冷水对胃黏膜的刺激可大大降低死亡率；④灌胃操作整个过程，灌胃操作人员尽可能地无菌操作。
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