２０２０，Ｖｏｌ．３７，Ｎｏ ５
评价技术与方法
［作者简介］　梅芊，硕士，主管药师，研究方向：药物分析。Ｅ ｍａｉｌ：ｍｍｑｑｇｇｌｌ＠１６３ ｃｏｍ
［通讯作者］　刘英，硕士，主任药师，研究方向：药物分析。Ｅ ｍａｉｌ：ｙｉｎｇ＿ｌｅａｆ＠
２６３ ｎｅｔ
ＵＨＰＬＣ Ｑ ＯｒｂｉｔｒａｐＨＲＭＳ法测定盐酸二甲双胍
及其片剂中遗传毒性杂质的含量
梅芊，李倚天，杨博涵，刘英
（河南省食品药品检验所，河南郑州４５００１８）
［摘要］　目的：采用超高效液相谱 四级杆／静电场轨道阱高分辨质谱法（ＵＨＰＬＣ Ｑ ＯｒｂｉｔｒａｐＨＲＭＳ）建立一种快速测定盐酸二甲双胍及其片剂中遗传毒性杂质（杂质Ｃ）的定量分析方
法。方法：使用ＷａｔｅｒｓＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣ ＢＥＨＳｈｉｅｌｄＲＰ１８（２ １ｍｍ×
１００ｍｍ，１ ７μｍ）谱柱，以１０ｍＭ甲酸铵溶液 乙腈（９０∶１０）为流动相，流速为０ ２ｍＬ·ｍｉｎ－１
，正离子（ＥＳＩ＋）模式下平行反应监测（ＰＲＭ）方式检测。结果：所建方法的专属性、重复性、稳定性均良好。杂质Ｃ的浓度在０ ６２５６～３ ９１０２ｎｇ·ｍＬ－１范围内
线性关系良好（ｒ＝０ ９９９７），原料的平均回收率为８７ ６％，片剂的平均回收率为８６ ４％。６批次样品中的杂质Ｃ含量为３ ５～
１１ ０μｇ·ｇ－１。结论：该方法简便快捷，准确可靠，适合盐酸二甲双胍及片剂中杂质Ｃ的快速检测，也为研究其他药物中类似杂
质的检测提供参考。
［关键词］　超高效液相谱 四级杆／静电场轨道阱高分辨质谱法（ＵＨＰＬＣ Ｑ ＯｒｂｉｔｒａｐＨＲＭＳ）；遗传毒性杂质；盐酸二甲双胍；杂质Ｃ［中图分类号］　Ｒ９１７  ［文献标志码］　Ｂ  ［文章编号］　２０９５－３５９３（２０２０）０５－０３５３－０５
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＧｅｎｏｔｏｘｉｃＩｍｐｕｒｉｔｙｉｎＭｅｔｆｏｒｍｉｎＨｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ
ａｎｄＩｔｓＴａｂｌｅｔｓｂｙＵＨＰＬＣ Ｑ ＯｒｂｉｔｒａｐＨＲＭＳ
ＭＥＩＱｉａｎ，ＬＩＹｉ ｔｉａｎ，ＹＡＮＧＢｏ ｈａｎ，ＬＩＵＹｉｎｇ
（ＨｅｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，ＨｅｎａｎＺｈｅｎｇｚｈｏｕ４５００１８，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｒａｐｉｄｕｌｔｒａｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ／ｏｒｂｉｔｒａｐｈｉｇｈｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ（ＵＨＰＬＣ Ｑ ＯｒｂｉｔｒａｐＨＲＭＳ）ｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｇｅｎｏｔｏｘｉｃｉｍｐｕｒｉｔｙｉｎｍｅｔｆｏｒｍｉｎｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅａｎｄｉｔｓｔａｂｌｅｔｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｈｅａｎａｌｙｔｅｗａｓｓｅｐａｒａｔｅｄｏｎＷａｔｅｒｓＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣ ＢＥＨＳｈｉｅｌｄＲＰ１８（２ １ｍｍ×１００ｍｍ，１ ７μｍ）ｃｏｌｕｍｎｗｉｔｈ１０
ｍｍｏｌ·Ｌ－１ａｍｍｏｎｉｕｍｆｏｒｍａｔｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（９０∶１０）ａｓｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ Ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓｓｅｔａｔ０ ２ｍＬ·ｍｉｎ－１
Ｔｈｅｔａｒｇｅｔ
ｃｏｍｐｏｕｎｄｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｉｏｎｐａｒａｌｌｅｌｒｅａｃｔｉｏｎｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ （
ＰＲＭ）ｍｏｄｅ Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃａｌｅｖａｌｕａｔｉｏｎｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｈａｄｇｏｏｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ，ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙａｎｄｓｔａｂｉｌｉｔｙ ＴｈｅｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅｏｆｉｍｐｕｒｉｔｙＣｗａｓ０ ６２５６－３ ９１０２ｎｇ·ｍＬ－１（ｒ＝
０ ９９９７），ｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｙｏｆｄｒｕｇｓｕｂｓｔａｎｃｅａｎｄｔａｂｌｅｔｓｗｅｒｅ８７ ６％ａｎｄ８６ ４％ ＴｈｅｃｏｎｔｅｎｔｒａｎｇｅｏｆｉｍｐｕｒｉｔｙＣｉｎｓａｍｐｌｅｓｗａｓ３ ５－
１１ ０μｇ·ｇ－１ Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａ
ｔｅａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅ，ａｎｄｉｓｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｔｈｅｒａｐｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｉｍｐｕｒｉｔｙＣｉｎｍｅｔ
ｆｏｒｍｉｎｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅａｎｄｉｔｓｔａｂｌｅｔｓ Ａｎｄｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｗｉｌｌｌａｙａｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｓｉｍｉｌａｒｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓｉｎｏｔｈｅｒｄｒｕｇｓ．［ＫｅｙＷｏｒｄｓ］　ＵＨＰＬＣ Ｑ ＯｒｂｉｔｒａｐＨＲＭＳ；Ｇｅｎｏｔｏｘｉｃｉｍｐｕｒｉｔｙ；Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ；ＩｍｐｕｒｉｔｙＣ
  早在１８００年，研究者发现豆科植物山羊豆中富含胍类物质，１９１８年，有研究发现胍类物质具有降低动物血糖的活性。但由于该类提取物毒性较大，在临床上仅短暂用于糖尿病。１９２９年，包括二甲双胍在内的多种双胍类化合物被合成，
ＪｅａｎＳｔｅｒｎｅ于１９５７年将二甲双胍首次用于临床［１］
，直至目前盐酸
二甲双胍作为Ⅱ型糖尿病一线及全程用药的卓越地位已为世人所瞩目。
《中国药典》（ＣｈＰ２０１５）［２］
、美国药典（ＵＳＰ４２）［３］及欧洲药典（ＥＰ９ ０）［４］
中盐酸二甲双胍有关
物质项下均采用ＨＰＬＣ法限定已知杂质双氰胺、单杂
及总杂，日本药典（ＪＰ１７）［５］采用ＴＬＣ法控制其有关
物质。ＥＰ９ ０中收载的盐酸二甲双胍杂质Ｃ即Ｎ，Ｎ 二甲基三聚氰胺（以下简称杂质Ｃ），结构式见图１
·
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（Ａ），符合典型遗传毒性致癌性物警示结构双取代芳胺的结构，见图１（Ｂ），满足其中Ａｒ为芳杂环，Ｒ１、Ｒ２
为甲基的条件，提示可能存在遗传毒性和致癌性［６］
。
欧洲药品管理局（
ＥＭＥＡ）和美国食品药物管理局（ＦＤＡ）发布的关于遗传毒性杂质控制的相关指导原
则［７，８］
，对于含有警示结构的杂质，应当进行（定量）
构 型关系预测和体内外遗传毒性及致癌性研究，或
将杂质水平控制在毒理学关注阈值（
ＴＴＣ）之下［９］
。为保证药品安全，需要对盐酸二甲双胍产品中可能存在的上述遗传毒性杂质的残留量进行严格控制。根据美国医药研究与制造商协会（ＰｈＲＭＡ）白皮书中基于已经发表的文献数据或公开的基因毒性测试数据
将杂质分为５类［１０］
，杂质Ｃ归属为第３类，即指含有
警示结构，与原料药结构无关，无致突变性数据的物质。根据毒理学关注阈值（ＴＴＣ）法计算杂质Ｃ的日允许摄入量为１ ５μｇ，盐酸二甲双胍缓释片的最大日服用剂量为２ｇ
，故盐酸二甲双胍中杂质Ｃ的含量应不得过０ ７５μｇ·ｇ－１。由于该检测限度较低，使用
普通Ｈ
ＰＬＣ法的灵敏度达不到要求，且盐酸二甲双胍中存在与杂质Ｃ结构相似的其他已知杂质，易干扰实验结果，故本实验建立ＵＰＬＣ ＭＳ／ＭＳ方法检测杂质Ｃ，该法准确、快速、灵敏，可用于盐酸二甲双胍及片剂中杂质Ｃ的定量检测，并为盐酸二甲双胍及片剂的质量标准提供参考，
确保产品质量安全有效。
图１　盐酸二甲双胍杂质Ｃ（Ａ）和双取代芳胺（Ｂ）化学结构
１　仪器与试药１ １　仪器与试剂
ＵＨＰＬＣ Ｑ Ｏｒｂｉｔｒａｐ液相谱 质谱联用系统：Ｖａｎｑｕｉｓｈ超高效液相谱仪（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ公司）串联ＱＥｘａｃｔｉｖｅＰｌｕｓ高分辨质谱（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈ ｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ公司），ＸＰＥ２０５电子天平（梅特勒 托利多仪器（上海）有限公司）。甲醇、乙腈为谱纯（ＭＥＲＣＫ公司），甲酸铵（ＦｉｓｈｅｒＣｈｅｍｉｃａｌ，批号１６８４６９），水为ＭｉｌｌＱ去离子水。１ ２　样品
杂质Ａ（纯度９８％，批号１ ＺＮＬ １６２ １）、杂质Ｃ（纯度９８％，批号１ ＮＡＺ ９２ １）、杂质Ｄ（纯度９８％，批号１
７ ＡＮＲ １４１ １）、杂质Ｅ（纯度９５％，批号１ ＳＨＴ ４５ １）均购自ＴｏｒｏｎｔｏＲｅｓｅａｒｃｈＣｈｅｍｉｃａｌｓ，杂质Ｂ二硝酸盐（纯度９３ ６％，批号１９０４ ００５Ａ９）购自ＴＬＣＰｈａｒ ｍａＣｈｅｍ
。盐酸二甲双胍（批号１８０００６Ｃ０４）、盐酸二甲双胍缓释片（规格５００ｍｇ，批号１８１００８，１８１００９，１８１０１０，ＪＡ０４２５，ＪＣ０２２４，ＪＣ０２２７）及混合辅料均由企业提供。２　方法２ １　测定条件
谱条件：采用ＷａｔｅｒｓＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣ ＢＥＨＳｈｉｅｌｄＲＰ１８
（２ １ｍｍ×１００ｍｍ，１ ７μｍ）谱柱，流动相为１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１
甲酸铵溶液 乙腈（９０∶１０），流速０
２ｍＬ·ｍｉｎ－１
，柱温为室温，进样量２μＬ。质谱条件：采用电喷雾离子源（ＥＳＩ源），正离子模式检测，喷雾电压３ ５ＫＶ，离子传输管温度３５０℃，辅助气温度３５０℃，辅助气流量
１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，鞘气流量４０ｍｌ·ｍｉｎ－１
，碰撞能量
（ＣＥ）３０ｅＶ，扫描范围为ｍ／ｚ５０～１８０，扫描方式为Ｆｕｌｌｓｃａｎ一级质谱全扫描确定母离子，ＰＲＭ二级质谱确定子离子。杂质Ｃ的检测离子为ｍ／ｚ１５５ １０３４２→７１ ０６１０５（定量），１５５ １０３４２→９６ ０５６０８（定性）。２ ２　溶液的制备２ ２ １　原料供试品溶液　精密称取盐酸二甲双胍约１００ｍｇ，置１００ｍＬ量瓶中，加甲醇１０ｍＬ，超声５ｍｉｎ使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，即得。
２ ２ ２　片剂供试品溶液　取本品１０片，精密称取研细后的细粉适量（约相当于盐酸二甲双胍１００ｍｇ），置１００ｍＬ量瓶中，加甲醇１０ｍＬ，超声５ｍｉｎ使盐酸二甲双胍溶解，用水稀释至刻度，摇匀，即得。２ ２ ３　混合杂质对照品溶液　分别精密称取杂质
Ａ、杂质Ｂ二硝酸盐、杂质Ｃ、杂质Ｄ、杂质Ｅ对照品各适量，置１００ｍＬ量瓶中，加甲醇１０ｍＬ，超声５ｍｉｎ使溶解，用水稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液
适量，用１０％甲醇水溶液稀释制成约２ｎｇ·ｍＬ－１的
混合溶液。
２ ２ ４　杂质Ｃ对照品贮备液　精密称取杂质Ｃ约１５ｍｇ于置１００ｍＬ量瓶中，加甲醇超声溶解并定容，摇匀，即得。３　结果３ １　专属性
按处方比例称取盐酸二甲双胍缓释片混合辅料适量，照“２ ２ ２”项下方法配制相当于盐酸二甲双胍
浓度为１ｍｇ·ｍＬ－１的空白辅料溶液。分别取
“
２ ２ ３”项下的混合杂质对照品溶液、空白溶剂·
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tablet5（１０％甲醇水溶液）、空白辅料溶液各２μＬ进样，均未发现干扰峰，表明杂质Ａ、杂质Ｂ、杂质Ｄ、杂质Ｅ、空白溶剂及辅料对测定均无干扰。
３ ２　线性关系考察
精密量取“２ ２ ４”项下的杂质Ｃ对照品贮备液适量，加１０％甲醇水溶液制成浓度为０ ６２５６、０ ７８２０、０ ９３８４、１ ５６４１、３ １２８２、３ ９１０２ｎｇ·ｍＬ－１的系列对照品溶液，分别进样，以峰面积Ｙ为纵坐标，进样浓度Ｘ（ｎｇ·ｍＬ－１）为横坐标进行线性回归，得杂质Ｃ的回归方程（ｎ＝６）为：Ｙ＝２２７０３３Ｘ＋３０３２ １，ｒ＝０ ９９９７。结果表明杂质Ｃ浓度在０ ６２５６～３ ９１０２ｎｇ·ｍＬ－１范围内，与峰面积的线性关系良好。
３ ３　精密度与重复性
取“３ ２”项下０ ７８２０ｎｇ·ｍＬ－１的杂质Ｃ对照品溶液连续进样６次，杂质Ｃ峰面积的ＲＳＤ为１ ９％。结果表明该方法精密度良好。
分别取原料与片剂各一批次（盐酸二甲双胍批号１８０００６Ｃ０４，盐酸二甲双胍缓释片批号１８１００８），同一批样品６份，分别加１０％甲醇水溶液制成约含盐酸二甲双胍１ｍｇ·ｍＬ－１的溶液，进样测定，其杂质Ｃ含量的ＲＳＤ分别为０ ６％和３ ２％，重复性良好。
３ ４　定量限与检测限
逐级稀释“２ ２ ４”项下的杂质Ｃ对照品贮备液，测得杂质Ｃ的定量限（Ｓ／Ｎ＝１０）为６ ２６×１０－４ｎｇ；杂质Ｃ的最低检测限（Ｓ／Ｎ＝３）为２ ０６×１０－４ｎｇ。
３ ５　稳定性试验
分别取“２ ２ １”项下的原料供试品溶液、“２ ２ ２”项下的片剂供试品溶液与“３ ２”项下０ ７８２０ｎｇ·ｍＬ－１的杂质Ｃ对照品溶液，于室温放置后分别进样测定，以杂质Ｃ的峰面积为指标考察溶液稳定性。结果见表１，杂质Ｃ峰面积的ＲＳＤ分别为１ ５％、１ ６％和０ ８％，表明上述三种溶液１２ｈ内稳定性均良好。
表１　稳定性试验结果
时间原料供试品溶液片剂供试品溶液杂质Ｃ对照品溶液０ｈ６６５３４８７１７６５３１４６５４１
１ｈ６７１７６１７３２２１０１４６８７７
２ｈ６７３０６９７３１８５０１４６２４５
４ｈ６５９８５０７１１８０７１４６８８３
６ｈ６４３３２３７０２２９５１４６８２６
８ｈ６７１５７３７３６２５７１４３８８０
１０ｈ６７３３１７７１４０５２１４４７２４
１２ｈ６６５４８０７１９３４５１４５９６６
ＲＳＤ／％１ ５１ ６０ ８３ ６　回收率试验
３ ６ １　原料回收率　精密量取“２ ２ １”项下的原料供试品溶液１ｍＬ共９份，平均分为３组，分别置于２５ｍＬ量瓶中，每组分别精密加入４２ｎｇ·ｍＬ－１的杂质Ｃ对照品溶液０ ８、１ ０、１ ２ｍＬ，加１０％甲醇水溶液稀释并定容至刻度，制备高、中、低浓度的溶液，测得杂质Ｃ在盐酸二甲双胍中的平均回收率（ｎ＝９）为８７ ６％，见表２。
表２　原料回收率试验结果（ｎ＝３）
原有量
（ｎｇ）
加入量
（ｎｇ）
测得量
（ｎｇ）
回收率
（％）
平均回收率
（％）
ＲＳＤ
（％）４０ ８９３１３５ ０３５４７１ ６９６０８７ ９２８７ ８０ ８
７１ ３８９９８７ ０５
７１ ８６６７８８ ４１
４３ ７９４２７８ ３５９２８５ ５５８７ ２１ ７
７９ ２３６２８７ ５５
７９ ５９５１８８ ３７
５２ ５５３１８６ ４６７５８６ ７２８８ ０１ ６
８６ ９９１３８７ ７２
８７ ９６４８８９ ５７
３ ６ ２　片剂回收率　精密量取“２ ２ １”项下的原料供试品溶液１ｍＬ共９份，分别置于２５ｍＬ量瓶中，每份各精密加入“３ １”项下的空白辅料溶液１ｍＬ，平均分为３组，每组分别精密加入４２ｎｇ·ｍＬ－１的杂质Ｃ对照品溶液０ ８、１ ０、１ ２ｍＬ，加１０％甲醇水溶液稀释并定容至刻度，制备
高、中、低浓度的溶液，测得杂质Ｃ在盐酸二甲双胍缓释片中的平均回收率（ｎ＝９）为８６ ４％，见表３。
表３　片剂回收率试验结果（ｎ＝３）原有量
（ｎｇ）
加入量
（ｎｇ）
测得量
（ｎｇ）
回收率
（％）
平均回收率
（％）
ＲＳＤ
（％）４０ ８９３１３５ ０３５４７１ ５４６６８７ ４９８７ ４０ １
７１ ４７６２８７ ２９
７１ ５５２７８７ ５１
４３ ７９４２７７ １８７８８２ ８８８５ ０２ ４
７８ ２８８９８５ ３９
７８ ９２５８８６ ８４
５２ ５５３１８６ ５７４４８６ ９２８６ ７０ ３
８６ ５１９７８６ ８２
８６ ３４５８８６ ４９
３ ７　样品测定
按“２ ２”项下方法制备供试品溶液，照“２ １”项
·
５
５
３
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２０２０年第３７卷第５期
下分析条件进行测定，并作随行标准曲线，采用回归方程计算杂质Ｃ的含量，测定结果见表４。
表４　样品测定结果
剂型批号杂质Ｃ含量（μｇ·ｇ－１）
原料１８０８００６Ｃ０４３ ５
片剂１８１００８３ ９
１８１００９４ ２
１８１０１０３ ８
ＪＡ０４２５１１ ０
ＪＣ０２２４９ ７
ＪＣ０２２７１０ ３
４　讨论
４ １　离子的选择
使用质谱蠕动泵直接进样“２ ２ ４”项下的杂质Ｃ对照品贮备液，并结合杂质Ｃ结构式计算分子量为１５４ １，最终确定杂质Ｃ的一级质谱图选择［Ｍ＋Ｈ］＋
ｍ／ｚ１５５ １０３４２作为母离子。改变不同的碰撞能量值（ＣＥ），观察二级质谱图，最终选取特征子离子碎片ｍ／ｚ７１ ０６１０５（定量）、ｍ／ｚ９６ ０５６０８（定性）进行分析，见图２。
４ ２　谱柱的选择
由于杂质Ｃ的极性较大，在谱柱上基本不保留，考察了ＴｈｅｒｍｏＨｙｐｅｒｓｉｌＧｏｌｄＶａｎｑｕｉｓｈ、ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＳＢ Ｃ
１８
、ＤＩＫＭＡＣ
１８
（２）等谱柱，均在１ｍｉｎ左右出峰，易与盐酸二甲双胍共洗脱。最终确定使用ＷａｔｅｒｓＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣ ＢＥＨＳｈｉｅｌｄＲＰ１８（２ １ｍｍ×１００ｍｍ，１ ７μｍ）谱柱，该谱柱采用
亚乙基桥杂化颗粒技术，除了Ｃ
１８
链以外还包含一个亲水的氨基甲酸酯官能团（极性内嵌），可明显改善碱性分析物的峰形并提高对化合物的保留，最终将杂质Ｃ的保留时间延迟到２ ４ｍｉｎ左右，见图３
。
图２　杂质Ｃ对照品二级质谱图
４ ３　流动相的选择
以杂质Ｃ峰的响应及盐酸二甲双胍峰与杂质Ｃ
峰之间的分离度为指标，考察了水 甲醇、水 乙腈、甲
酸 甲醇、甲酸 乙腈、甲酸铵 乙腈等流动相体系，结果
表明，以乙腈作为有机相时，杂质Ｃ的质谱响应优于
甲醇；以１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１甲酸铵作为水相，盐酸二甲双
胍峰与杂质Ｃ峰能较好分离，在两峰分离良好的基
础上，可考虑采用盐酸二甲双胍完全出峰后再进质谱
检测杂质Ｃ的方法，以免高浓度的原料药污染质谱
仪。最终确定谱流动相为１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１甲酸铵溶
液 乙腈（９０∶１０）。
４ ４　溶剂的选择
分别考察了盐酸二甲双胍和杂质Ｃ在甲醇、乙
腈、１０％甲醇水溶液、１０％乙腈水溶液等溶剂中的溶
解性，结果表明，盐酸二甲双胍和杂质Ｃ均能在适量
的甲醇中溶解良好，可达到试验所需配制的浓度，同
时为防止溶剂与流动相极性差异而导致的目标物峰
形分叉，在配制溶液时，先向量瓶中加入一定量的甲
醇使盐酸二甲双胍和杂质Ｃ溶解，再加入水定容至
刻度，使溶剂的终浓度为１０％甲醇水溶液。
·
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５
３
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２０２０，Ｖｏｌ．３７，Ｎｏ ５
评价技术与方法
图３　杂质Ｃ对照品总离子流图
４ ５　方法的优点
杂质Ｃ属于具有典型遗传毒性致癌性物警示结构的物质，通用的ＨＰＬＣ紫外检测器灵敏度较低，无法满足该杂质的限度检测要求。本研究采用四级杆静电场轨道肼高分辨质谱仪，测得杂质Ｃ的检测限
为２ ０６×１０－４ｎｇ。该法灵敏度高、专属性强、准确度
好、测定快速，既可实现对盐酸二甲双胍及片剂中杂质Ｃ的监测，从而对原料合成工艺进行优化，对药品的安全性进行有效控制，同时该方法也为研究其他药物中类似杂质的检测提供了参考。
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