实验三  尿药法测定核黄素片剂消除速度常数
【实验目的】
1、 熟悉尿药法在生物药剂实验中的应用
2、 掌握尿药法计算消除速度常数等动力学参数的方法
【实验原理】
药物在体内的吸收、分布、代谢、排泄等过程既有区别，又有联系，观察一个方面的变化，常可间接地认识到另一方面的情况，所以药物在体内的速度过程变化规律，既可用血药法来估算，也可用尿药法来估算。
在多数情况下，尿药浓度高于血药浓度，定量分析精密度好，测定方法较易建立，而且取样方便，受试者可免收多次抽血的痛苦。因此，在体内药物大部分以原形从尿中排除条件下，通常可用尿药法估算消除速度常数、生物半衰期等动力学参数。尿中原形药物的瞬时排泄速度，可用下列微分式表示：
                                          （1）
Ke为表观一级排泄速度速度，Xu为t时间尿中原形药物的累计排泄量，X为t时间体内存有的药量。
在静脉给药时，体内药量的经时过程可由下式表示：
                                            （2）
Xo为给药剂量，K为表观一级消除速度常数。
将（2）式中X值代入（1）式后得：
                                      （3）
两边取对数得：
                            （4）
由（4）式可见，原形药物排泄速度得对数对时间作图为一直线，其斜率为-K/2.303，与血药浓度的对数对时间作图所求的斜率相同。（4）式适用于静脉给药后求算消除速度常数。
若口服给药，则体内药量经时过程可由下式表示：
                              （5）
Ka为表观一级吸收速度常数。
尿中原形药物的瞬时排泄速度可由（5）式代入（1）式得：
                        （6）
当Ka>K，t充分大时，则e-Kat→0，（5）式简化为：
                                  （7）
两边取对数得：
                        （8）
由上述关系式可见，若以logXu/dt对t作图，可得到一条二项指数曲线，从其后段直线得斜率可求出一级消除速度常数K。
由于尿中原形药物排泄速度得瞬时变化率是不可能实验方法求算得，通过实验只可求出平均排泄速度，设在一段时间间隔△t内药物得排泄量为△Xu，则平均排泄速度为△Xu/△t，这样（4）或（8）式可改写如下：
                          （9）
                      （10）
由于实验中采取平均排泄速度，求得的消除速度常数K会出现一些误差。但若以恒定的时间间隔集尿，其时间间隔不大于一个药物的半衰期时，则仅发生较小偏差。
【实验内容与操作】
一、服药及尿样收集
1 服药前一天收集24小时尿液，每次收集尿液后量体积，取10ml保留，其余倒掉。
2 临服药前排空小便
3 早餐后立即服用核黄素片3片（5毫克/片），用温水250ml吞服不咀碎，记录服药时间。
4 按服下药片后的第2、4、6、8、10小时收集尿液，用量筒量取并记录尿液体积，然后，将尿液倒入盛有0.2ml冰醋酸的刻度试管内至20ml，摇匀，于阴凉避光处保存。
注意点：
1.每次收集尿液后饮200ml左右水以维持尿量。
tablet52.每次大便时收集小便，切勿损失。
3.试验期间（包括服药前一天）控制食谱，不能吃含有核黄素的食物，如：蛋类、牛奶、麦乳精、奶糖等。并不得服用含有B族维生素的药品。
二、尿液中核黄素含量的测定
1 原理：
核黄素的异咯嗪环上具有活泼的双键，能接受和放出氢原子，在保险粉（连二亚硫酸钠）的作用下，能还原为无双氢核黄素，利用这一特性，可以由加入保险粉前后二次测得的吸收度（核黄素在波长444nm处有吸收）的差值，来计算尿液中核黄素的含量。
2 方法：
（1）标准曲线的制备：
精密称取105℃干燥2小时的核黄素对照品50mg于500ml量瓶中，加0.02mol/L醋酸液稀释300ml，置水浴加热溶解后，放冷至室温，用0.02mol/L醋酸液稀释至刻度，摇匀即得，每1ml中含核黄素100微克，然后加入甲苯覆盖上面，置凉暗处保存。
精密吸取标准液0.1、0.3、0.5、1.0、2.0、3.0ml分别置于10ml量瓶中，用酸化蒸馏水（每100ml蒸馏水中含有1ml冰醋酸）稀释至刻度，摇匀。以酸化蒸馏水作空白，在444nm波长处
测定吸收度，然后，在每管中各加保险粉约3mg，摇匀。在一分钟内再次测定吸收度。两次测定值之差，即为核黄素的吸收度，以此值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
（2）尿样中核黄素含量测定
尿样测定照标准曲线制备项下的方法。从“以酸化蒸馏水作空白”起，依法测定吸收度，以两次测定值之差，从标准曲线上查出尿液中核黄素的含量。
以上操作步骤，均须注意避光。
【实验结果与讨论】
1 原始记录
服药后尿液收集与测定数据填在表1、2、3、4中。
表1 空白尿液测定数据
A1
A2
A1-A2
C(μg/ml)
24小时空白尿体积（毫升）：
24小时空白尿中排泄核黄素的总△Xu量：
平均每2小时排泄核黄素的μg数：
表2 尿样的原始记录
试管号
集尿时间（hr）
集尿时间间隔（hr）
尿量（ml）
1
2
3
4
5
6
7
8
表3 尿药测定记录
试管号
A1
A2
A1-A2
C(μg/ml)
△Xu(mg)
△Xu－△Xuo(mg)
1
2
3
4
5
6
7
8
表4 尿药法动力学分析记录
集尿时间(hr)
集尿时间间隔（△t）
中点时间
（t中）
△Xu(mg)
平均排泄速度(△Xu/△t)
2 绘制尿药排泄速率二项指数曲线
3 从二项指数曲线后段直线部分计算斜率，从而计算消除速度常数K及生物半衰期。
4 计算总排泄量（毫克），排泄百分率。
【思考题】
1 以尿药数据法计算动力学参数和生物利用度与血药浓度法相比，有何有缺点？
2 尿药数据法计算生物利用度误差的主要来源有那些？

版权声明：本站内容均来自互联网，仅供演示用，请勿用于商业和其他非法用途。如果侵犯了您的权益请与我们联系QQ:729038198，我们将在24小时内删除。