For Genome DNA Analysis
Xho
I
C T C G A G G A G C T C
TaKaRa Code：D1094A 包 装 量：2,000 Units
附带试剂： 10×H Buffer 500 μl  10×Loading Buffer  500 μl
纯    度：
1） Overdigestion Test：≥15 Units 2） Ligation-Recutting Test：  Ligation Effi.：＞95%,Recutting Effi.：100% 3） Genome DNA Digest：≥20 Units 4） pKF3 Cloning Test：＜2%
●酶贮存液：  10 mM Tris-HCl, pH7.5  100 mM KCl  0.1 mM EDTA    1 mM DTT  0.01 % BSA  0.15 % TritonX-100  50 % Glycerol
●起    源：Xanthomonas holcicola
●一般反应体系：  Xho  I    1 μl  10×H Buffer    2 μl  DNA                        ≤1 μg  灭菌水                up to 20 μl
●反应温度：37℃
●反应时间：
在上述20 μl 的反应体系中，37℃反应5分钟可以完全切断λDNA，满足各种实验需求。针对特殊酶切底物DNA，如果得不到良好的酶切效果时，可以将反应时间延长至1小时。
●活性确认：
在50 μl 反应液中，37℃温度下反应1小时，将1 μg 的λDNA 完全分解的酶量定义为1个活性单位(U)。
●纯度检测：
1） Overdigestion Test：在1 μg DNA 中加入过量的该限制酶，
进行长时间（24小时）酶切反应，然后进行琼脂糖电泳，确认切出的DNA 片段的电泳谱带不发生变化。
2） Ligation-Recutting Test：在经过10倍量该酶切出的DNA 片
段中，加入 T4 DNA Ligase，使其连接，然后再使用该酶进行切断反应，判断Ligation-Recutting 效率。 3） Genome DNA Digest：在0.5 μg 的Escherichia coli  Genome
DNA（包埋于0.5% Agarose Gel 中）中，加入过量的该限制酶，进行长时间（24 小时）酶切反应，然后进行脉冲电泳，确定切出的DNA 片段的电泳谱带不发生变化。
4） pKF3 Enforcement Cloning Test：使用10倍量的该酶，将
Enforcement Cloning Vector pKF3 DNA 切开，然后再进行连接后，转化至TH2感受态细胞中，判断该酶切位点受到影响的重组体所占的比率。
●在各种Universal Buffer 中的相对活性：
●
各种DNA 的切断数：
●Ligation-Recutting Test：
因该酶切出的突出末端比一般的4个碱基突出末端的连接效率低，所以必须使用平滑末端的连接条件。
●甲基化的影响：
不受CG methylase 影响。
●Basal Buffer 组成：  10 mM Tris-HCl, pH7.5  7 mM MgCl 2  100 mM NaCl  7 mM 2-Mercaptoethanol
●Universal Buffer 组成（-20℃保存）：
1.10 × L 100 mM Tris-HCl,pH7.5    4.10 × K 200 mM Tris-HCl,pH8.5  100 mM MgCl 2  100 mM MgCl 2  10 mM Dithiothreitol  10 mM Dithiothreitol
2.10 × M 100 mM Tris-HCl,pH7.5  1,000 mM KCl  100 mM MgCl 2    5.10 × T 330 mM Tris-Ac,pH7.9  10 mM Dithiothreitol (BSA 100 mM Mg-Ac  500 mM NaCl －Free)    5 mM Dithiothreitol
3.10 × H 500 mM Tris-HCl,pH7.5  660 mM K-Ac  100 mM MgCl 2    6. 0.1% BSA  10 mM  Dithiothreitol 7. 0.1% Triton X-100  1,000 mM NaCl
●10×Loading Buffer 组成  （开封后室温保存）  0.9% SDS  50%  Glycerol  0.05%  Bromophenol Blue
hex字符串是什么
使用时添加反应液量的1/10，即可停止反应，进行电泳。-20℃保存时，会出现SDS 沉淀，请于温水浴中溶解后使用。在室温下保存时，SDS 有时也会出现沉淀，此时同样请在温水浴中溶解后使用。
L M H K T（+BSA）
相对活性(%)
<20
60
100
160
60
λ Ad2SV φX pBR pUC pUC M13Col
40
174
322
19
119 mp18
E1
1    6 0    1 0 0 0 0 0 V2010.10

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