宁夏农林科技，基金项目：宁夏自然科学基金项目“枸杞不同抗感材料应答枸杞病菌侵染的代谢组学研究”（2019AAC03146）、宁夏农林科学院对外科技合作专项项目“基于TaqMan 实时荧光定量PCR 技术建立枸杞病高效分子检测体系的研究”（DW-X-2018012）、宁夏回族自治区育种专项（2013NYYZ0101）。
作者简介：曲玲（1972-），女，宁夏银川人，副研究员，主要从事枸杞抗病性分子机制和枸杞生物技术抗病育种研究。通信作者：安巍（1970-），男，宁夏中宁人，研究员，主要从事枸杞育种及种质资源研究。通信作者：曹有龙（1963-），男，宁夏中宁人，研究员，主要从事枸杞生物技术育种研究。收稿日期：2020-12-06
利用VIGS 技术在本氏烟中沉默枸杞同源基因的研究
曲玲，李彦龙，焦恩宁，赵建华，秦垦，尹跃，周旋，安巍，曹有龙宁夏农林科学院枸杞科学研究所，
宁夏银川750002摘
要：【目的】本项研究旨在通过建立一个异源VIGS 体系，为枸杞重要性状相关基因的功能鉴定提供前期信
息。【方法】从枸杞叶片中克隆获得409bp 长的八氢番茄红素脱饱和酶基因（phytoene desaturase,PDS ）
的编码区片段，构建入基于烟草脆裂病毒的VIGS 空载体中，通过农杆菌介导的侵润接种，将重组的病毒沉默载体pTRV2-PDS 转入本氏烟中。【结果】本氏烟幼苗被侵染接种后，沉默处理植株的叶片呈现整叶白化的表型，而阴性对照植株叶片一直未出现变白的症状，qRT-PCR 检测表明，接种17d 后，与阴性对照植株相比，沉默处理植株PDS 基因的表达显著地被抑制（P ＜0.05），说明枸杞PDS 基因的同源基因在本氏烟中得到了有效沉默。【结论】该VIGS 体系的构建，可用于对枸杞部分基因功能的快速初步鉴定和筛选，旨在提高枸杞基因功能研究的效率。
关键词：枸杞；八氢番茄红素脱饱和酶基因（PDS ）；病毒诱导基因沉默（VIGS）；本氏烟中图分类号：S567.19文献标识码：A
文章编号：1002-204X （2021）02-0025-06
doi:10.3969/j.issn.1002-204x.2021.02.008
Silencing Lycium PDS Ortholog in Nicotiana benthamiana Using VIGS
Abstract Lycium phytoene desaturase PDS Lycium PDS Nicotiana benthamiana Nicotiana benthamiana PDS P Lycium PDS Nicotiana benthamiana Lycium Lycium Key words Lycium Phytoene desaturase PDS Nicotiana benthamiana
·
生物技术
·25
26
曲玲，等利用VIGS技术在本氏烟中沉默枸杞同源基因的研究
62卷02期
phytoene desaturase PDS
PDS
PDS
1材料与方法
1.1供试材料
Xba
Bam
1.2试验方法1.
2.1pTRV2-沉默载体的构建
1.2.1.1克隆PDS 干扰片段序列
Bam Bam Xba Xba 1.2.1.2VIGS 重组载体pTRV2-PDS 的构建
PDS Bam Xba PDS 1.2.2农杆菌的侵染PDS PDS PDS 1.2.3
沉默效果的qRT-PCR （实时荧光定量PCR ）分析和侵染植株的表型观察
PDS PDS NbActin PDS NbPDS 1.3数据处理与统计
曲玲，等利用VIGS 技术在本氏烟中沉默枸杞同源基因的研究
62卷02期27
图1枸杞总RNA提取电泳检测
图2枸杞PDS基因沉默片段的PCR扩增电泳检测图3VIGS重组载体pTRV2-构建的PCR电泳检测
2结果与分析
2.1枸杞PDS基因沉默片段序列的扩增和分析
BamH Xba
2.2VIGS重组载体pTRV2-PDS的构建和转化
Bam Xba
PDS PDS
PDS
PDS
PDS
2.3本氏烟植株的侵润接种和沉默表型的观测分析
PDS
PDS
PDS
2.4本氏烟植株PDS基因的相对表达量分析
NbActin
PDS
PDS
PDS
P
PDS
PDS
PDS
图5
本氏烟中PDS 基因的表达分析
（侵染后17d ）
pTRV2-：沉默处理植株；小写字母表示沉默处理与
阴性对照植株差异显著
（＜0.05）。
3结论与讨论
PDS PDS [24]
PDS PDS NbPDS PDS NbPDS PDS 参考文献：
[1]钟鉎元.枸杞高产栽培与育种[M].银川：宁夏人民出
正则化工具包版社，1994：7-12.
[2]李润淮，焦恩宁，安巍，等.宁夏枸杞的种质资源及优化
栽培[C]//枸杞及抗衰老中药国际学术研讨会.宁夏：2001：49.
[3]KUMAGAI M H,DONSON J,DELLA-CIOPPA G,
et al.Cytoplasmic inhibition of carotenoid biosynthesis with virus-derived RNA [J].Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,1995,92:1679-1683.
[4]RUIZ M T,VOINNET O,BAULCOMBE D C.Ini-tiation and maintenance of virus-induced gene silencing [J].Plant Cell,1998,10(6)：937-946.
[5]KJEMTRUP S,SAMPSON K S,PEELE C G,et al.
Gene
silencing
from
plant
DNA
carried
by
a
Geminivirus.[J].Plant Jurnal,1998,14:91-100.[6]ZHONG J,POWELL S,PRESTON J    C.Organ
boundary
NAC-domain
transcription
factors
are

版权声明：本站内容均来自互联网，仅供演示用，请勿用于商业和其他非法用途。如果侵犯了您的权益请与我们联系QQ:729038198，我们将在24小时内删除。